联合放化疗对鼻咽癌患者淋巴细胞亚群影响的观察

刘斌，刘丽霞，臧爱民，马涛，王萍，张永刚

（1. 河北大学附属医院肿瘤内科，河北 保定 071000；2. 河北大学附属医院功能科，河北 保定 071000；3. 保定市第一中心医院肿瘤外科，河北 保定 071000；4. 保定市第一中心医院质管科教科，河北 保定 071000；5. 河北大学附属医院（北院）头颈外科，河北 保定 071000）

联合放化疗对鼻咽癌患者淋巴细胞亚群影响的观察

刘斌1，刘丽霞2，臧爱民1，马涛3，王萍4，张永刚5

（1. 河北大学附属医院肿瘤内科，河北 保定 071000；2. 河北大学附属医院功能科，河北 保定 071000；3. 保定市第一中心医院肿瘤外科，河北 保定 071000；4. 保定市第一中心医院质管科教科，河北 保定 071000；5. 河北大学附属医院（北院）头颈外科，河北 保定 071000）

目的 观察鼻咽癌患者同步放化疗前、后的细胞免疫功能变化，以探讨联合放化疗对鼻咽癌患者免疫功能的影响。方法 应用FACS Calibur流式细胞仪对60例鼻咽癌患者和60名健康体检者同步放化疗前、后外周血T、B淋巴细胞亚群进行检测，并分别对健康体检者与鼻咽癌患者同步放化疗前、鼻咽癌患者同步放化疗前与放化疗后的检测值进行比较。结果 鼻咽癌患者放疗前与健康体检者对比，CD3+、CD16+56+和CD19+均值差异无统计学意义，t值分别为1.567、0.971和1.561，P 值分别为0.078、0.392和0.240；CD4+、CD4+/CD8+均值下降差异有统计学意义，t值分别为2.389和2.358，P 值分别为0.013和0.027；CD8+均值升高差异有统计学意义，t=-2.342，P=0.019。鼻咽癌患者同步放化疗后与放化疗前对比，CD3+、CD4+、CD4+/CD8+均值明显下降，差异有统计学意义，t值分别为-7.163、-11.217和3.817，P 值均＜0.01；CD8+与CD16+56+均值明显上升，差异有统计学意义，t值分别为-8.271和4.383，P 值分别为0.01和0.001；CD19+均值差异无统计学意义，t=-0.986，P=0.323。结论 鼻咽癌患者免疫功能下降，外周血T、B淋巴细胞亚群的检测对判断患者的免疫功能有参考作用。

鼻咽癌；放射疗法；药物疗法；T细胞亚群；流式细胞术

鼻咽癌（nasopharyngeal carcinoma，NPC）主要是指由于地域、环境因素及EB病毒感染影响发生在鼻咽腔顶部和（或）侧壁发生的恶性肿瘤，具有遗传倾向性。目前，鼻咽癌治疗的标准模式是放疗联合同期化疗，但在同步放化疗过程中最主要的毒副作用就是免疫抑制，这种免疫抑制直接影响患者机体的免疫功能，降低患者的生活质量及治疗依从性，使得患者不能坚持放化疗，进而中断治疗而影响临床治疗效果[1-3]。另外，免疫抑制理论上又会潜在增加鼻咽癌患者发生转移的风险。因此，对鼻咽癌患者在放化疗过程中进行免疫系统功能动态监测就显得尤为必要。在识别及清除肿瘤细胞方面，T淋巴细胞介导的细胞免疫发挥着主导作用，同时也作为人体抗肿瘤免疫方面十分重要的一环。评价细胞免疫功能的指标主要是淋巴细胞亚群，这也是肿瘤免疫监测重要评价指标[4]。本研究旨在通过观察同步放化疗前后对60例鼻咽癌初诊患者和60例健康体检者外周血淋巴细胞亚群的变化，来探讨其对机体免疫功能的影响，并为制定合理的鼻咽癌免疫治疗方案提供临床依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2012年1月至2014年12月河北大学附属医院收治的60例鼻咽癌患者，均经病理明确诊断，具有完整临床资料及并未行任何治疗。将此60例患者作为治疗组，其中男性患者39例，女性患者21例，年龄27～69岁，中位年龄43岁；临床分期（根据2008中国鼻咽癌分期标准）：Ⅱ期13例，Ⅲ期29例，Ⅳ18例，Karnofsky评分60～85。另外选取同期进行体检的60例健康患者作为对照组，其中男性患者41例，女性患者19例，年龄26～68岁，中位年龄46岁。两组患者的一般资料方面（年龄、性别等）差异无统计学意义，具有可比性（P＞0.05）。

1.2 治疗方法

首先对所有鼻咽癌患者进行标准化的鼻咽癌根治性放射治疗即原发病灶常规体外照射加颈淋巴结预防性或根治性外照射，为期6周。主要分两步，先进行鼻咽部病灶常规照射，再对颈部淋巴结进行预防性放疗；治疗的总剂量为鼻咽部64～68 Gy/(35～39)次，颈部(N1-3)65～70 Gy/(33～36)次，颈部(N0)51～55 Gy /(25～28)次。另外，所有患者均行同步化疗，化疗在放疗中第1周和第5周进行，采取“顺铂、氟尿嘧啶”方案，所有患者均完成2个周期化疗。

1.3 外周血淋巴细胞亚群检测

所有患者均于治疗前及治疗结束4周后采晨起空腹静脉血，应用流式细胞仪对患者外周血的分别进行T淋巴细胞亚群检测（CD3+、CD4+、CD8+）、NK细胞检测（CD16+56+）、 CD4+/CD8+及B细胞（CD19+）检测。采用的流式细胞仪为美国Becton Dickinson公司（BD公司）生产，所用试剂盒亦由BD公司提供。

1.4 统计学方法

采用SPSS 16.0数据统计分析软件进行统计学分析，计量资料以均数±标准差(x±s)表示，计数资料采用χ2检验，组间比较采用配对设计的t检验进行数据分析。以P＜0.05代表差异存在统计学意义。

2 结果

2.1 鼻咽癌患者和正常人淋巴细胞亚群的比较

鼻咽癌患者放疗前与对照组的CD3+水平、CD16+56+ 水平、CD19+水平比较结果分别为（t=1.567, P=0.078)、(t=0.971, P=0.392)、(t=1.561, P=0.240），差异均无统计学意义。鼻咽癌患者放疗前与对照组的CD4+水平、CD4+/CD8+水平、CD8+水平比较结果分别为(t=2.389, P=0.013)、(t=2.358, P=0.027)、(t=-2.342 7, P=0.019)，差异均有统计学意义（表1）。

表1 鼻咽癌患者和对照组淋巴细胞亚群的比较%

2.2 鼻咽癌患者放化疗前后淋巴细胞亚群的水平变化比较

鼻咽癌患者放化疗后患者与治疗前CD3+水平、CD4+水平、CD4+/CD8+水平、CD8+水平、CD16+56+水平比较结果为（t=-7.163, P＜0.01）、（t=-11.217, P＜0.01）、（t=3.817, P=0.000）、（t= -8.271, P＜0.01）、（t=4.383, P=0.001）差异均有统计学意义。鼻咽癌患者放化疗后患者与治疗前CD19+水平比较结果为（t=-0.986 0, P=0.323），差异均无统计学意义（表2）。

表2 鼻咽癌患者放化疗前后淋巴细胞亚群的水平变化比较%

3 讨论

目前，鼻咽癌的治疗手段主要是同步放化疗治疗。相较其他头颈部肿瘤，即使鼻咽癌患者经过系统及时的根治性同步放疗联合化疗，仍有部分鼻咽癌患者发生复发甚至转移。据文献报道，晚期鼻咽癌患者的复发率更高[5]，可以说鼻咽癌的复发及远处转移也是导致治疗失败和死亡的首要原因。在同步放化疗过程中，鼻咽癌患者的免疫功能均受到不同程度的免疫抑制，而免疫功能的下降是否增加了鼻咽癌患者远处转移的风险，是一个亟待了解却未被充分了解的问题。

人体的免疫功能水平在肿瘤的发生、发展、转移、复发过程中发挥着重要作用。细胞免疫是肿瘤免疫反应的主要部分，其中淋巴细胞的主要组分是T细胞，其在肿瘤免疫中发挥着中心调控的作用。如果机体T细胞各亚群的比例和数量发生异常，可导致机体免疫功能紊乱，从而不能发挥其抗肿瘤作用，其中反映机体免疫状态的重要指标主要是CD4+/CD8+比值。通常CD4+/CD8+比值在机体内处于一个相对平衡状态，并保持机体免疫内环境处于一个相对稳定状态。而当机体免疫功能下降时，其CD4+/CD8+比值就会低于正常值。王汉姣研究发现，局部晚期鼻咽癌患者在治疗前CD4+、CD4+/CD8+水平均较健康者明显降低[6]; 程霞等研究发现，CD4+/CD8+比值可能与鼻咽癌的预后存在密切的相关，即鼻咽癌患者的CD4+/CD8+比值下降越明显，其发生局部复发或远处转移可能性就越高[7]。本研究中，与正常人群对比，鼻咽癌患者放化疗前的CD4+水平和CD4+/CD8+比值均出现明显下降。这提示较健康人群相比，鼻咽癌患者出现了免疫功能紊乱、免疫失调。

同步放化疗是治疗鼻咽癌不可或缺的重要手段。不容忽视的是同步放化疗过程中在对肿瘤细胞的杀灭同时，机体正常的免疫细胞也损失，从而影响机体免疫功能。本研究中，鼻咽癌患者同步放化疗前后的CD3+水平、CD4+水平和CD4+/CD8+比值均明显下降。从中提示放射治疗可能存在抑制淋巴细胞增殖功能的作用。故在放射治疗中可通过加强营养与支持治疗,或者给予免疫增强剂的治疗等方法提高鼻咽癌疗效,减轻不良反应。本研究对鼻咽癌患者采用同步放化疗治疗方案，究竟是放（化）疗单独的抑制作用或是两者共同作用使患者机体免疫功能下降尚不明确。需要补充说明的是本研究只检测其T细胞亚群百分率，如果通过直接检测淋巴细胞亚群的绝对值更能反映其实际储备情况。因此为更好地为临床提供更丰富、有价值的信息，建议检测T细胞亚群时同时对其百分率及其绝对值同时检测[8]。

总之，检测鼻咽癌患者联合放化疗前后T淋巴细胞亚群的比率，能够帮助医护人员及时有效地了解患者机体免疫功能。特别是监测CD4+/CD8+比值变化，为临床治疗及评价预后提供依据。鉴于本研究样本量小，观察时间较短，患者机体T淋巴细胞亚群的改变与生存率变化及相关预后的相关性仍需进一步研究。

[1] JEMAL A, BRAY F, CENTER M M, et al. Global cancerstatistics[J]. CA Cancer J Clin, 2011, 61(2): 69-90.

[2] CHEN Q Y, WEN Y F, GUO L, et al. Concurrent chemoradiotherapy vs radiotherapy alone in stage II nasopharyngeal carcinoma: phase III randomized trial[J]. JNatl Cancer Inst, 2011, 103(23): 1761-1770.

[3] LEE A W, TUNG S Y, CHUA D T, et al. Randomized trial of radiotherapy plus concurrent-adjuvant chemotherapy vs radiotherapy alone for regionally advanced nasopharyngeal carcinoma[J]. J Natl Cancer Inst, 2010, 102(15): 1188-1198.

[4] FAHMI T I, ESENDAGLI G. Immune compartmentalization of Tcell subsets in chemically-induced breast cancer[J]. Scand JImmunol, 2010, 72(4): 339-348.

[5] TANG L, MAO Y, LIU L, et al. The volume to be irradiated during selective neck irradiation in nasopharyngeal carcinoma: analysis of the spread patterns in lymph nodes by magnetic resonance imaging[J]. Cancer, 2009, 115(3): 680-688.

[6] 王汉姣. 鼻咽癌放化疗后细胞免疫功能的变化（附 45 例报告）[J]. 咸宁学院学报: 医学版, 2011, 25(6): 518-520.

[7] 程霞, 陈国健, 李坊铭, 等. 鼻咽癌患者T淋巴细胞亚群改变与预后的关系分析[J]. 牡丹江医学院学报, 2011, 32(4): 40-42.

[8] 陈国健, 程霞, 李坊铭, 等. T-淋巴细胞亚群测定与鼻咽癌预后关系的探讨[J]. 中华肿瘤防治杂志, 2010, 17(8): 627-628.

(责任编辑：乔艳华)

Observation of influence of radiotherapy and chemotherapy on T Lymphocytes subsets in patients with nasopharyngeal carcinoma

LIU Bin1, LIU Lixia2, ZANG Aimin1, MA Tao3, WANG Ping4, ZHANG Yonggang5
(1. Department of Oncology, Affiliated Hospital of Hebei University, Hebei Baoding 071000; 2. Functions Branch, Affiliated Hospital of Hebei University, Hebei Baoding 071000; 3. surgical Department Baoding NO.1 central Hospital, Hebei Baoding 071000; 4. Department of Education Baoding NO.1 central Hospital, Hebei Baoding 071000; 5. surgical Department, Affliated Hospital of Hebei University(North), Hebei Baoding 071000)

Objetive To explore the relationships between changes of immune functions in patients with nasopharyngeal carcinoma(NPC)pre-chemoradiotherapy and post-chemoradiotherapy. Methods The flow cytometry(FACS Calibur) was used to detect the blood T, B Lymphocytes subsets of 60 healthy check-ups and60 NPC patients before and after chemoradiotherapy. The immune indexes of changes before and after the radiotherapy were analyzed and their test values were compared. Results There were no signifcant differences in CD3+, CD16+56+, CD19+(t were 1.567; 0.971; 1.561, P were 0.078; 0.392; 0.240)between the healthy check-ups and the NPC patients before chemoradiotherapy. CD4+、CD4+/CD8+ had a downward trend(t were 2.389; 2.358, P were 0.01, 0.01)while CD8+ had an upward trend (t=-2.342, P=0.019), which was statistically significant. CD3+, CD4+, CD4+/CD8+ were significantly different before and after the chemoradiotherapy, CD3+, CD4+, CD4+/CD8+ gradually down, which had signifcant differences(t were -7.163, -11.217, 3.817, P＜0.01); CD8+, CD16+56+ gradually up,which had signifcant differences(t were -8.271, 4.383, P were 0.01, 0.001).There was no signifcant difference in CD19+ (t=-0.986, P=0.323).Conclusions The immune functions get lower in the NPC patients after chemoradiotherapy and can be estimated by the test of the blood T, B Lymphocytes subsets.

nasopharyngeal; radiotherapy; surgery; T lymphocytesubsets; flow cytome-try

10.3969/j.issn.1674-490X.2015.05.011

R445

A

1674-490X(2015)05-0042-04

本文引用：刘斌, 刘丽霞, 臧爱民, 等. 联合放化疗对鼻咽癌患者淋巴细胞亚群影响的观察[J].医学研究与教育, 2015, 32(5): 42-45.

2015-09-01

保定市科学技术研究与发展计划项目（112F015）

刘斌（1981—），男，河北保定人，主治医师，硕士，主要从事恶性肿瘤放化疗及分子靶向治疗E-mial: 401929599@qq.com