虎杖药材中蒽醌衍生物及其苷类成分的测定探讨

胡伟 张体干 褚衍宁

虎杖药材中蒽醌衍生物及其苷类成分的测定探讨

胡伟 张体干 褚衍宁

目的 探讨虎杖药材中蒽醌衍生物及其苷类成分测定。方法 应用高效液相色谱法, 流动相为甲醇-1%高氯酸水溶液(85∶15), 检测波长：200 ng。结果 芦荟大黄素经检测含量居较低水平,大黄素甲醚、大黄酸、大黄素含量较高, 含蒽酯类成分状况在4批供试品中基本一致, 总量约1.1%～2.8%。虎杖药材中, 芦荟大黄素、大黄素、大黄酸、大黄素甲醚在水解后的样本含量均高于水解前。结论 对虎杖药材中蒽醌衍生物及其苷类成分测定, 结果准确, 操作简便, 可为质量控制提供保障。

虎杖；蒽醌衍生物；苷类成分；测定

虎杖具通经、解毒清热、通淋利尿、祛风利湿等功效。为蓼科植物虎杖的干燥根和根茎。以江苏、湖南、浙江等地区为主产地。研究显示, 虎杖中蒽醌类以大黄酚、芦荟大黄素、大黄素甲醚、大黄酸等蒽醌类衍生物为主要成分［1］。本次研究详细测定蒽醌类衍生物含量, 了解其苷类成分情况, 以为临床应用提供依据。

1 材料与方法

1.1 材料 分别在香港、广西、广州等药材商店采购虎杖药材, 经2000年版中国药典标准检验与规定符合。大黄素甲醚、芦荟大黄素、大黄酚、大黄酸、大黄素对照片于中国药品生物制品检定所采购。

1.2 仪器 日立U-3010紫外分光光度计；N-2000双通道色谱工作站；LC-10A高效液相色谱仪。

1.3 方法 选择波长：取大黄素甲醚、芦荟大黄素、大黄酚对照品, 用甲醇制成溶液, 每毫升含20 μg, 在400～200 nm波长处扫描测定, 大黄最大吸收289.6 nm, 芦荟大黄素225.6 nm,大黄酸257.8 nm, 大黄酚348.8 nm, 大黄素甲醚262.2 nm, 波长220 nm。色谱条件：柱温38℃, 流动相设置为甲醇-1%高氯酸水溶液, 检测波长200 nm。重现性试验：对同一供试样品选取, 分为6份, 行供试品溶液制定, 测定结果［2］。测定样品：取2 g虎杖药材末, 完成精密测定, 取甲醇80 ml加入, 置水浴上加热回流30 min, 放冷过滤, 采用甲醇洗涤器完成稀释处理, 至100 ml摇匀, 设为溶液A。取10 ml, 将大部分甲醇挥发, 取5%硫酸溶液20 ml加入残留液, 置沸水加热, 回流1 h, 放冷, 向分液漏斗中移入水溶液, 用氯仿行4次萃取.25 ml/次, 与氯仿萃取液合并, 水洗2次.15 ml/次,分取氯仿萃取液, 实施挥干操作。用甲醇溶解残渣, 在10 ml量瓶中定容, 为溶液B。另取大黄素甲醚、大黄素等对照品,配置每毫升含15 μg溶液, 依法测定。

2 结果

芦荟大黄素经检测含量居较低水平, 大黄素甲醚、大黄酸、大黄素含量较高, 含蒽酯类成分状况在4批供试品中基本一致, 总量约1.1%～2.8%。 虎杖药材中, 芦荟大黄素、大黄素、大黄酸、大黄素甲醚在水解后的样本含量均高于水解前。见表1。

表 虎杖药材中大黄酸、芦荟大黄素等含量测定(mg/g)

3 讨论

在水解前后, 总蒽醌衍生物在供品中的但有变化, 水解后呈明显增加表现, 其中大黄素甲醚、大黄素变化较大, 表明此成分存在多以结合型形式, 芦荟大黄素、大黄酸变化不大［3］。分析4批供试样品中含有的总蒽醌含量实施测定的结果, 蒽醌类衍生物在供试样品间有较大差别, 未呈规律性,与取样部位, 根、根颈、皮部比例及采集季节、药材生长时间相关。芦荟大黄素经检测含量居较低水平, 大黄素甲醚、大黄酸、大黄素含量较高, 含蒽醌类成分状况在4批供试品中基本一致, 总量约1.1%～2.8%。 虎杖药材中, 芦荟大黄素、大黄素、大黄酸、大黄素甲醚在水解后的样本含量均高于水解前。提示参考检测结果, 可制定质量保障方案, 以使药物药效最大程度发挥, 提高在临床应用的价值, 对保障患者生存质量意义重大, 临床需重视相关研究的进一步深入［4,5］。

分析流动相的选择, 有研究应用0.1%甲酸水(A)-乙腈(B)梯度进行洗脱, 虎杖药材中相关化学成分出现了快速分离, 在55 min内, 所建立的方法可同时对虎杖药材中分布的4种化学成分的量测定。通过虎杖药材自建的化学成分数据库, 通过对在TOF/MS上获取的化合物精确质量数利用, 与数据库中化合物已知理论相对分子质量展开对比, 可快速分析虎杖药材中化学成分, 应用Calculator计算工具, 两次验证化学成分后, 可明晰化鉴别化学成分, 共鉴别虎杖药材中的成分有24种。此实验在对质谱条件、色谱和样品前处理方法系统考察基础上, 依据虎杖药材中化学成分具体的性质特点, 分别应用HPLC-MSIFC法和HPLC-DAD法, 对虎杖中2种蒽醌类成分和2种二苯乙烯类成分的量同时测定, 应用HPLC-TOF/MS, 明晰化分析虎杖药材中其他化学成分, 共鉴别出24种虎杖药材中的化学成分, 定性测定和综合定量两方面, 综合评价虎杖药材的质量, 对全面可控制虎杖药材质量的模式和方法建立, 以指导临床应用。

综上所述, 对虎杖药材中蒽醌衍生物及其苷类成分测定,结果准确, 操作简便, 可为质量控制提供保障。

［1］ 马培. 虎杖生药学研究.北京协和医学院.2013.

［2］ 李萍. 虎杖及其化学成分的质量控制. 齐鲁药事.2011(4):232-233.238.

［3］ 曹亮. 虎杖中白藜芦醇和蒽醌类提取分离工艺研究.陕西理工学院.2010.

［4］ 李育川, 郭巧生, 房海灵, 等.小桐子果壳抑菌活性部位的分离及其HPLC-MS分析.中草药.2010.41(9):1445-1448.

［5］ 彭娟, 马辰.对中国药典2005版虎杖中大黄素测定方法的商榷与改进.北京中医.2007.26(4):234-237.

10.14163/j.cnki.11-5547/r.2015.35.215

2015-07-02］

277400 山东省枣庄市台儿庄区中医院药剂科