早期分泌性抗原靶6、脂阿拉伯甘露聚糖诊断结核性脑膜炎的价值

田宋新，柴璐璐，王 宏

(石河子大学 a.第一附属医院神经内科； b.医学院神经病学教研室，新疆 石河子 832000)

早期分泌性抗原靶6、脂阿拉伯甘露聚糖诊断结核性脑膜炎的价值

田宋新a，柴璐璐a，王 宏b

(石河子大学 a.第一附属医院神经内科； b.医学院神经病学教研室，新疆 石河子 832000)

目的 探讨早期分泌性抗原靶6(Esat6)、脂阿拉伯甘露聚糖(LAM)检测在结核性脑膜炎诊断中的应用价值。方法 采用酶联免疫吸附试验(Elisa法)检测结核性脑膜炎患者(结脑组，20例)、非结核性脑膜炎患者(非结脑组，20例)和对照组(以头痛为主诉者，20例)脑脊液及血清中Esat6和LAM含量，并进行比较。结果 结脑组患者脑脊液、血清中的Esat6及LAM含量均明显高于非结脑组和对照组(均P<0.05)；非结脑组与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结核性脑膜炎患者脑脊液及血清中Esat6与LAM水平存在显著相关性(r=0.961，r=0.894，均P<0.05)。结论 脑脊液、血清中Esat6和LAM检测可作为结核性脑膜炎的辅助诊断指标。

结核性脑膜炎； 诊断； 分泌型抗原靶6； 脂阿拉伯甘露聚糖； 酶联免疫吸附法

结核性脑膜炎是由结核分枝杆菌引起的非化脓性脑膜炎性疾病，约占全身性结核病的1%，肺外结核病的7%～10%，病死率为20%～50%，生存患者中20%～30%遗留永久性中枢神经系统后遗症[1]。因此，早期诊断、早期治疗是降低结核性脑膜炎致死率、致残率的关键。由于结核性脑膜炎患者临床表现缺乏特异性，实验室及影像学表现也无特异性的指标，因此结核性脑膜炎早期、准确的诊断一直是困扰医学界的难题。结核抗原作为结核杆菌存在的证据，对结核病的诊断很有价值。有研究[2]表明，检测结核性脑膜炎患者脑脊液中分泌性抗原靶6(Esat6)的含量，在诊断结核杆菌感染方面具有较高的灵敏度和特异度。国外有研究[3]发现，检测脂阿拉伯甘露聚糖(LAM)抗原有助于结核病的诊断。本研究采用酶联免疫吸附法(Elisa法)检测结核性脑膜炎患者脑脊液及血清中Esat6和LAM的表达，探讨两者联合检测在结核性脑膜炎诊断中的应用价值。

1 资料与方法

1.1 病例资料

选择2013年11月至2014年8月在石河子大学医学院第一附属医院、石河子市人民医院住院的结核性脑膜炎患者20例(结脑组)，均符合2010年柳叶刀的结核性脑膜炎诊断标准[4]，包括临床入选标准、临床评分标准(临床特征、脑脊液特征、脑影像学特征及其他部位结核的证据)及排除标准。其中男12例，女8例，年龄18～68(44.70±16.32)岁，病程3～30(17.4±10.5)d。选择非结核性脑膜炎患者20例(非结脑组)，男10例，女10例，年龄14～72(44.50±17.55)岁。其中病毒性脑膜炎14例，化脓性脑膜炎6例。选择同期住院以头痛为主诉的患者20例(对照组)，男13例，女7例，年龄14～78(43.05±18.35)岁。查体神经系统无异常，脑脊液常规、生化检测指标均在正常参考范围。3组患者年龄、性别比较差异均无统计学意义(均P>0.05)。

1.2 检测方法

所有入选对象于入院48 h内行腰椎穿刺术，留取脑脊液2 mL行常规+生化检查及结核杆菌涂片检测；同时留存脑脊液2 mL，于4 ℃、2 300 r·min-1离心10 min，取上清液分装，置于-80 ℃ 冰箱保存备用。取入院次日清晨空腹静脉血3 mL，加入未加抗凝剂的试管中，以3 000 r·min-1离心15 min 后分离血清，置于-80 ℃ 冰箱保存备用。

采用Elisa法检测脑脊液及血清中Esat6和LAM水平，试剂盒由上海蓝基生物科技有限公司提供，具体步骤严格按试剂盒的操作说明书进行。

1.3 统计学方法

2 结果

结脑组脑脊液中Esat6及LAM含量明显高于非结脑组和对照组(均P<0.05)，非结脑组与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)；结脑组患者血清中Esat6及LAM含量明显高于非结脑组和对照组(均P<0.05)；非结脑组与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。见表1。结核性脑膜炎患者脑脊液及血清Esat6与LAM水平存在显著相关性(r=0.961，r=0.894，均P<0.05)。

组别n脑脊液血清Esat6LAMEsat6LAM结脑组203.23±0.89*9.48±1.80*1.11±0.25*3.05±1.11*非结脑组202.21±0.457.57±1.400.83±0.201.86±0.60对照组201.98±0.307.02±1.350.72±0.161.51±0.57

*P<0.05与非结脑组和对照组比较。

3 讨论

结核性脑膜炎诊断的金标准是脑脊液涂片检出抗酸杆菌或培养出结核分枝杆菌，但是两者检出阳性率很低，并且结核杆菌生长缓慢，培养周期较长(4～6周)，对疾病的早期诊断价值有限。聚合酶链反应检测结核杆菌具有快速、敏感的特点，但对技术设备要求高，从而限制了其在临床的应用。目前，结核杆菌抗原检测诊断结核病的方法备受关注。结核的致病菌为结核分枝杆菌，当机体受到结核分枝杆菌感染后，体内首先会出现结核抗原，结核抗原的检测可以作为结核分枝杆菌存在的直接证据，其检测不受机体免疫功能状况的影响，避免了结核病患者因免疫应答低下导致的体液免疫检测或细胞免疫检测的假阴性。因此检测结核抗原可作为结核病早期快速、敏感及特异的诊断方法。

结核分枝杆菌抗原根据所处的细胞位置不同，分为分泌性蛋白抗原、胞壁脂膜抗原和胞浆应激蛋白抗原3种，分泌性蛋白是目前发现对结核分枝杆菌感染保护性最好的一组蛋白抗原。Esat6是结核分枝杆菌早期分泌性蛋白的主要成分，由RD1区基因Rv3875编码，共编码95个氨基酸。有研究[5]证实，Esat6仅存在于结核分枝杆菌及少数几种致病性分枝杆菌中，90%以上的非致病性分枝杆菌缺乏编码此蛋白的基因，增殖期和非复制期的结核分枝杆菌都高度表达Esat6。Esat6是重要的T细胞抗原，可被感染结核分枝杆菌的T淋巴细胞识别产生γ-干扰素，基于此原理的结核分枝杆菌感染T细胞斑点试验(T-SPOT)在临床上逐步开展，它具有敏感性高、快速的特点，但是不能区分活动性感染、既往感染或潜伏感染，因此T-SPOT不能作为单独诊断结核病的依据，尤其是对结核性脑膜炎仅能作为参考性实验室依据。而Elisa法相对于T-SPOT操作简便、价格低廉，所需样本量少，更适宜临床应用。

宋孚霞等[6]应用间接酶联免疫实验检测结脑组和对照组脑脊液中Esat6含量，结果显示：结脑组与对照组比较差异有统计学意义，诊断灵敏性为88%，特异性为92%。本研究对3组患者脑脊液及血清Esat6进行检测，结果显示：结脑组患者脑脊液中Esat6含量明显高于非结脑组和对照组(均P<0.05)；非结脑组与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)，与文献[6]研究结果一致。提示Esat6对结核性脑膜炎的早期诊断具有一定的价值，可能作为结核性脑膜炎诊断的一项辅助检查手段。

LAM是结核分枝杆菌细胞壁的重要组成部分，其核心骨架为甘露聚糖，侧链为甘露糖、阿拉伯糖单位，分子以磷脂酰肌醇锚定在胞质膜上。LAM具有菌属特异性和高度的免疫原性，为结核分枝杆菌的重要抗原，在结核分枝杆菌与宿主的相互作用中起着关键作用。以往主要用LAM-IgG抗体诊断结核病，当分枝杆菌感染人体后，LAM引起机体的免疫反应，致敏淋巴细胞产生针对LAM的特异性抗体LAM-IgG，通过对体液LAM-IgG的检测可反映分枝杆菌的感染情况。李永刚等[7]研究发现，检测脑脊液LAM抗体对结核性脑膜炎有良好的诊断价值。丁晓旭等[8]研究显示，脑脊液中LAM-IgG诊断结核性脑膜炎的敏感性为50.9%，血液中LAM-IgG诊断结核性脑膜炎的敏感性为75.4%。但针对抗原的特异性抗体产生需要时间，且易受机体免疫状态的影响出现假阴性结果，不能区别既往感染或急性感染，抗原的检测可以弥补这些不足。由此推测LAM抗原的检测可能优于LAM-IgG抗体。

近年来国外学者对体液中的LAM抗原进行检测，并取得了令人满意的结果。研究[9-12]报道，在结核病患者血清、尿液、痰液及肺外结核患者的胸腔积液和脑脊液中均检测到LAM抗原，检测的敏感性为50%～91%，特异性为69%～100%。施健等[13]研究显示，结核性胸腔积液患者胸水及血清中LAM抗原阳性率高于非结核组。王芳等[14]用Elisa法检测患者胸腔积液LAM抗原水平，结果显示：结核组高于非结核组，诊断结核性胸膜炎的敏感性为54%，特异性为78%。本研究结果显示，结脑组患者脑脊液及血清中LAM含量均高于非结脑组及对照组(均P<0.05)，非结脑组与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。表明LAM在结核性脑膜炎的病程中起到了一定的作用，是结核性脑膜炎诊断的一个有用参数。本研究将结核性脑膜炎患者的Esat6与LAM表达水平进行pearson相关分析，显示有较高的相关性，提示Esat6和LAM在结核性脑膜炎中可同时存在，发挥着相似的作用，2项指标联合检测有利于结核性脑膜炎的诊断。

本研究检测了结核性脑膜炎患者脑脊液及血清中Esat6及LAM水平，提示这2种抗原在结核性脑膜炎的诊断中具有较好的临床应用价值，有望成为结核性脑膜炎诊断的辅助指标。

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[14] 王芳,乐军.胸水中脂阿拉伯甘露聚糖抗原检测对结核性胸膜炎的诊断价值[J].检验医学,2012,27(3):199-201.

(责任编辑：周丽萍)

Values of Early Secretory Antigenic Target 6 and Lipoarabinomannan in Diagnosis of Tuberculous Meningitis

TIAN Song-xina,CHAI Lu-lua,WANG Hongb

(a.DepartmentofNeurologyoftheFirstAffiliatedHospital； b.DepartmentofNeurologyofSchoolofMedicine,ShiheziUniversity,Shihezi832000,China)

Objective To investigate the values of early secretory antigenic target 6 (Esat6) and lipoarabinomannan (LAM) in the diagnosis of tuberculous meningitis.Methods The levels of Esat6 and LAM in cerebrospinal fluid and serum were detected by Elisa in 20 patients with tuberculous meningitis,20 patients with non-tuberculous meningitis and 20 control subjects with headache as the chief complaint.Results The cerebrospinal fluid and serum levels of Esat6 and LAM in tuberculous meningitis group were significantly higher than those in non-tuberculous meningitis group and control group (P<0.05).However,the difference was not statistically significant between non-tuberculous meningitis group and control group (P>0.05).The cerebrospinal fluid and serum levels of Esat6 were significantly correlated with those of LAM in patients with tuberculous meningitis (r=0.961andr=0.894,respectively;P<0.05).Conclusion The Esat6 and LAM in cerebrospinal fluid and serum can be used as auxiliary diagnostic indicators of tuberculous meningitis.

tuberculous meningitis; diagnosis; secretory antigenic target 6; lipoarabinomannan; enzyme linked immunosorbent assay

2014-09-02

国家“十二五”计划重大传染病防治专项结核病专项(2013ZX10003003-002-002)

田宋新(1989—)，女，硕士研究生，主要从事神经系统疾病的诊治研究。

王宏，主任医师，教授，E-mail:wang832000@sina.com。

R529.3

A

1009-8194(2015)03-0001-03

10.13764/j.cnki.lcsy.2015.03.001