土杂鸡免疫一次和二次禽流感H5灭活苗 免疫效果对比试验

高玉玲，常海燕，瞿国海，姚利金

(1. 玉溪市红塔区动物卫生监督所， 云南 玉溪 653100； 2. 玉溪市红塔区动物疫病预防控制中心，云南 玉溪 653100；3. 玉溪市红塔区春和街道办事处畜牧兽医站，云南 玉溪 653100； 4. 玉溪市红塔区草山饲料站，云南 玉溪 653100)

土杂鸡免疫一次和二次禽流感H5灭活苗 免疫效果对比试验

高玉玲1，常海燕2，瞿国海3，姚利金4

(1. 玉溪市红塔区动物卫生监督所， 云南 玉溪 653100； 2. 玉溪市红塔区动物疫病预防控制中心，云南 玉溪 653100；3. 玉溪市红塔区春和街道办事处畜牧兽医站，云南 玉溪 653100； 4. 玉溪市红塔区草山饲料站，云南 玉溪 653100)

按程序、规范接种的蛋鸡在免疫保护期内其禽流感免疫抗体水平较高且抗体效价整齐。土杂鸡的抗体水平免疫21d后抗体滴度合格率仅为30%。为提高土杂鸡禽流感免疫抗体合格率，进行了一次免疫和二次免疫效果的对比试验，结果显示：土杂鸡二次免疫禽流感H5灭活苗后，免疫抗体水平显著提高，合格率达90%。试验用的两个不同厂家的禽流感H5灭活苗的免疫效果区别不大。蛋鸡三次免疫后免疫抗体合格率达95%，且抗体效价高而整齐。

高致病性禽流感；土杂鸡；免疫； 免疫抗体

高致病性禽流感是由A型流感病毒引起的以禽类为主的烈性传染病，已成为当今影响养禽业健康发展的重要疫病之一。高致病性禽流感疫情的不断发生，严重威胁着人类公共卫生安全，全球人感染禽流感事件时有发生。疫苗免疫作为防控禽流感的重要措施已被广泛使用，灭活疫苗是当今应用最广泛的禽流感疫苗，由国家免费提供的禽流感H5灭活苗适用任何日龄的家禽。但疫苗的免疫效果如何？推荐免疫程序是否适合禽流感疫情防控的实际？则是广大养殖户和兽医技术人员普遍关注的问题，也是目前家禽养殖急需解决的问题。近几年来，笔者通过血凝抑制试验，对全区的512个养鸡场(户)共计4673份血清样本进行了禽流感H5N1免疫效果的抗体监测，结果显示：按程序、规范接种的蛋鸡在免疫保护期内其禽流感免疫抗体水平较高且抗体效价整齐，免疫抗体合格率达95%以上；而土杂鸡的抗体水平就不容乐观，仅在7～10日龄进行一次免疫，其抗体水平较低且衰减很快，免疫21d后抗体滴度普遍偏低，合格率仅为30%，难以抵御强毒攻击，为疫情的暴发流行埋下了严重隐患。为确定疫苗免疫效果，特进行该对比试验，为制定有效的免疫程序提供科学依据，最终有效防控禽流感疫情，保证全区家禽业的健康稳步发展。

1 材料和方法

1.1 疫苗

(重组)禽流感病毒灭活疫苗(H5亚型，Re-1株)，由玉溪市动物疫病预防控制中心统一提供。

1.2 诊断液

H5型标准抗原(批号：2007050704)和阳性血清、阴性对照等，由农业部哈尔滨兽医研究所提供。

1.3 检测样品采集时间

免疫后 21～40 d。

1.4 样品采集

每个群体中随机采样本5～15份，以3000r/min离心10min，吸取血清，待检。

1.5 溶液配制

(1)阿氏液配制：葡萄糖2.05g、柠檬酸钠0.8g、柠檬酸0.055g、NaCl 0.42g，加蒸馏水至100mL，散热溶解后调pH值至6.1，69kPa 15min高压灭菌，4℃保存备用。

(2)1%鸡红细胞液制备：采集3只无禽流感和鸡新城疫抗体的健康公鸡的血液与等体积阿氏液混合，离心移去上清液，再加入阿氏液洗涤2次，每次均以1000r/min离心10min，洗涤后用生理盐水配成10%红细胞悬液。取1mL 10%红细胞悬液加入9mL生理盐水，混匀即可。

1.6 抗体检测

采用血凝抑制试验，具体方法按国家标准执行。

1.7 免疫效果评价标准

按农业部要求，在禽流感H5灭活苗免疫家禽21d后进行免疫效果监测，禽流感抗体血凝抑制试验(HI)抗体效价等于或大于24判定为免疫合格，存栏家禽群体免疫抗体合格率必须大于70%判为免疫合格。

1.8 高致病性禽流感H5免疫程序

免疫程序一(2008年农业部禽流感规范)：商品土杂鸡7～10日龄，用H5禽流感灭活苗0.5mL/只进行一次免疫即可。免疫程序二：商品土杂鸡7～10日龄时，用H5禽流感灭活苗0.5mL/只进行第一次免疫，3～4周后再用H5禽流感灭活苗0.5mL/只进行一次加强免疫。

2 监测结果

监测结果见表1、表2。

(1)按照免疫程序一次免疫注射土杂鸡养殖户23户338份血清样本，合格127份，合格率37%。

(2)按照免疫程序二次免疫注射土杂鸡养殖户24户235份血清样本，合格212份，合格率90%。

(3)对照组按蛋鸡免疫程序免疫注射灭活苗进行三次，14户蛋鸡养殖户159份血清，合格154份，合格率97%。

表1 禽流感H5免疫抗体效价监测情况

3 分析与讨论

(1)进行三次免疫的蛋鸡，不管是用哪个厂家的H5灭活疫苗，禽流感免疫抗体合格率达95%以上，且免疫抗体效价整齐均在26以上。第三次免疫在开产前进行，避免免疫给鸡群造成应激从而影响产蛋率，确保鸡群在开产初期的抗体达到高峰值，尽量避免在产蛋高峰期进行免疫。以后根据免疫抗体监测结果，每隔4～6个月进行一次H5免疫。

(2)土杂鸡由于生长期短，按农业部高致病性禽流感等重大动物疫病免疫方案的要求，肉鸡一般在7～10日龄进行一次禽流感H5灭活苗免疫即可。但试验结果证明：一次免疫仅仅给机体一个刺激，所产生的抗体效价不高且抗体水平维持时间太短，土杂肉鸡饲养期一般为65～70d，一次免疫后的抗体水平难以保护家禽群体，有受野毒攻击暴发疫情的潜在威胁。

(3)土杂鸡二次免疫后抗体水平显著提高，从试验结果可看出抗体阳性率在90%以上。一次免疫后免疫禽的抗体参差不齐，无抗体或抗体水平很低的家禽为病毒感染埋下极大的隐患，感染后这些家禽不仅会大量死亡，而且会大量的排毒、散毒，污染整个饲养场，增加了其它家禽感染和患病的机会。初免后加强一次免疫，一方面可以减少或消除一些人为因素的影响，如疫苗剂量流失、不足等。另一方面，则可在一次免疫启动的基础上加强刺激机体免疫系统，使之迅速产生更高的免疫抗体，且维持时间更长。

(4)对监测效果不理想的养殖户进行追踪调查，经调查分析，主要由以下因素造成：①接种速度偏快，接种深度不够，致使部分疫苗溢出，客观上造成疫苗剂量不足。②仅仅7～10日龄免疫一次，抗体水平较低且衰减很快。③养殖户和防疫员由于担心引起免疫反应主观减少接种剂量，免疫剂量不足导致效果不理想。作为基层兽医工作者应加大对养殖户和防疫员的培训力度，强化防疫规范意识，建立考核机制，做到有效防疫，确保免疫质量。

(5)禽流感H5疫苗为灭活疫苗，主要激发机体的体液免疫应答能力，产生以IgG为主的抗体，发挥体液免疫作用，其通过肌肉注射进行免疫，免疫效果是由注射剂量和疫苗中抗原含量共同决定的，通过监测及调查也充分证明了这一点。因此，防疫员在免疫注射时有必要重视免疫剂量的充足和免疫次数的保证，只有实施有效的免疫，使免疫质量得到保证，才能有效防制高致病性禽流感，确保家禽业的健康稳步发展。

S852.4

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1005-1341(2015)06-0010-02

2015-06-16