HPLC法测定西洋参不同部位中人参皂苷含量

朱 秋

(驻马店市第一中医院，河南 驻马店 46300)



HPLC法测定西洋参不同部位中人参皂苷含量

朱 秋

(驻马店市第一中医院，河南 驻马店 46300)

目的：通过化学方法测定西洋参中人参皂苷的资源含量，确保西洋参中的人参皂苷资源被充分利用，为那些以中药材为原料的制药工业提供可靠数据[1-4]。方法：使用高效液相色谱法测定西洋参不同部位的人参皂苷含量。结果：该方法成功测定西洋参不同部位的人参皂苷成分含量。结论：高效液相色谱法准确、迅速、简便，可作为评价人参属植物质量的有效分析方法。

西洋参；人参皂苷；含量测定；产地差异

北美花旗参(西洋参)是多年生草本植物，原产于北美东北硬木森林[4-5]。西洋参的药用价值主要是由于其含有人参皂苷的成分[6]，参的各个部位中都含有相关的成分，目前已知种类约有30多种[4]，种类比较复杂。单独对某种西洋参进行人参皂苷的分析目前已经较为普遍[1]，但是对于西洋参不同部位的人参皂苷分析目前尚未见到。根据之前的研究数据和经验，本次研究主要选择测试3种皂苷的Rb1、Rc和Rg1在不同部位的含量。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂

仪器与试药Agilent 1100 Series高效液相色谱仪；色谱柱为德国Nucleosil-C18(4.6mm×150mm，5μm)；TGL-16g高速离心机，BUCH I旋转蒸发器。乙腈、甲醇、正丁醇为色谱纯；Milli Q超纯水。

1.2 材料

西洋参产地东北吉林。样品提取，干燥的根、茎、叶样品通过植物粉碎和筛分以获得均匀样品，称重以后，取3份，每份约1 500mg，精密称定，用氯仿90mL脱脂，过滤，再用甲醇120mL提取24h，过滤，蒸干，水溶，然后在水饱和正丁醇状态下萃取，回收溶剂，将正丁醇层提取物转移到10mL量瓶中，用正丁醇定容至刻度线，备用[5-6]。

1.3 统计学处理

2 结果

2.1 标准曲线建立

精密称定,取人参皂苷Rb1、Rc和Rg1适量,加甲醇制成浓度分别为0.984、1.020、0.992 g/L的溶液,作为对照溶液储备液,密封置冰箱保存。主要检测成分为人参皂苷，分别取对照品储备液0.08、0.16、0.32、0.64、1.28 mL，用流动相定容到2mL，摇匀，从而得到一系列浓度的标准液。通过连续3次等量进样，每次20μL，分析和记录色谱数据，以对照品浓度( μg/L)为横坐标(X)，对照品的峰面积为纵坐标(Y)，得到以下人参皂苷的回归方程。根的各组分方程：Rb1:Y=3575.98X +8.09，R=0.9999；Rc:Y=3141.08X +18.11，R=0.9991；Rg1:Y=6101.07X-9.98，R=0.9997；茎的各组分方程:Rb1:Y=3489.98X-2.88，R=0.9996，Rc:Y=2971.69X +87.07，R=0.9997；Rg1:Y=5891.07X +1.97，R=0.9994；叶的各组分方程:Rb1:Y=2095.57X-76.91，R=0.9995；Rc:Y=2671.69X+17.98，R=0.9998；Rg1:Y=4891.85X +11.44 ，R=0.9991。

2.2 人参皂苷含量测定

在上述色谱条件下,分别进样10μL,测定不同部位药材中人参皂苷含量。人参药材主根中人参皂苷Rb1含量较高,而Rc、Rg1含量相对较低,茎部位中，Rc较其他部位要高而Rb1高于叶中的含量却明显低于根部，同时Rg1也略高于其他部位；在叶部位中含量均较低，但是这可能与叶的材质有关，一些叶部位的提取率较低。

2.3 精确度和重复性测试

精确度采用6次重复的实验数据采集，得到的可重复性数据为：0.22%、0.18%、0.19%、0.28%、0.33%、0.15%、0.21%、0.41%、0.42%，均处于较好的可控范围内。重复性测试，通过同一批样本不同时间点检测，时间间隔为24、48、72h，RSD值为1.7%，属于正常范围。另外，对于样本的回收率基本可以达到95%以上。

2.4 西洋参不同部位人参皂苷含量比较

每次将20μL样本加入HPLC中，重复3次，取平均值进行比对。我们通过2次不同进样量的测试，最终基本验证了之前的数据，各部位的基本含量与10μL进样量的数据基本可以进行比较归纳，具体数据见表1。

表1 不同部位人参皂苷的含量 (mg/g)

3 讨论

人参皂苷是西洋参的重要有效成分，皂苷含量的高低直接决定了西洋参的品质和价格，也是工业制药和科研的重要参考数据。已知人参皂苷有30余种，其结构均比较类似，都含有由30个碳原子排列成4个环的甾烷类固醇核，其中比较主要的是达玛烷类型，包括人参皂苷Rb1、Rb2、Rb3、Rc、Rd、Rg3、Rh2及糖苷基PD，Re、Rg1、Rg2、Rh1及糖苷基PT。由于结构极为类似，因此也给实际操作中的分析提出了更高要求。目前比较实用的方法为HPLC法检测，也有其他检测方法联用，如HPLC-ELSD。无论哪种方法检测，最主要的目的是为了分选出不同种类人参皂苷的含量。我们有选择性地测试了3种主要的皂苷含量，最主要的目的是为了验证不同部位的皂苷含量是否有差别。从实验结果观察，我们发现西洋参根部含有较高的人参皂苷Rb1，茎则含有较高的Rc，但是3个部位的Rg1含量都不高，有专家认为Rg1的含量可能在西洋参的芦头上含量较高。西洋参中其他种类的皂苷并没有在此一一检测。从数据上分析，我们发现不同产地的西洋参人参皂苷含量均有较大差别，这可以考虑到人参药材中皂苷类成分含量受生长环境影响较大，西洋参的活性成分含量与其生产地的多种因素有关，如经纬度、无霜期、日光照射时间、降水量、土壤特性等；另外，采收季节、采收年限、干燥和保存的方法也有非常重要的影响作用。本实验分析的3种部位人参皂苷含量具有显著特征,可作为区分道地和非道地人参药材的初步依据，同时也可以帮助区分市场上不同种类产品的优劣和真伪。目前我们对于西洋参皂苷含量与外界因素的相关性分析还处于初级阶段，在下次建立回归方程的时候，我们会考虑更多的其他因素，如，西洋参的具体产地，西洋参的参龄和保存方法等。这将为参类制品的种植、生产、制备和保存提供重要的参考依据。

[1] 蔡治纲,张莉伟,龚晓英.不同来源西洋参中人参总皂苷及人参皂苷Rb1含量的比较[J].中草药,2002,33(2):121-122.

[2] 王旭.引种栽培西洋参中人参皂苷Rb1含量的比较分析[J].首都医药,2004,11(6):31-32.

[3] 陈军辉,谢明勇,张中伟,等.西洋参皂苷的HPLC测定及不同提取方法比较[J].天然产物研究与开发,2006(18):120-125.

[4] 王玉堂.人参中人参皂苷的提取、分离和测定[D].长春：吉林大学,2008.

[5] 郜玉钢,郝建勋,臧埔，等.高效液相色谱法测定农田人参中9种人参皂苷单体含量[J].食品科学，2012(2):189-193.

[6] 林美妤,刘海宇,刘金平，等.人参皂苷的化学研究进展[J].人参研究,2011,23(4):43-46.

(责任编辑：余 婷)

2015-04-14

朱秋(1972-)，男，河南省驻马店市第一中医院主管中药师，研究方向为中药鉴别与中药制剂。

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A

1673-2197(2015)19-0023-02

10.11954/ytctyy.201519010