HPLC法测定心速宁胶囊中盐酸小檗碱含量

毛 鹏，姜建东

(陕西摩美得制药有限公司，陕西 咸阳 712000)



HPLC法测定心速宁胶囊中盐酸小檗碱含量

毛 鹏，姜建东

(陕西摩美得制药有限公司，陕西 咸阳 712000)

目的：建立HPLC法测定心速宁胶囊中盐酸小檗碱含量的方法。方法：采用高效液相色谱法，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙睛-水(48∶52)(1 000μL中含KH2PO43.4g，十二烷基磺酸钠1.2g)为流动相；检测波长为270nm。理论板数按盐酸小檗碱峰计算，应不低于3 500。结果：盐酸小檗碱在0.0563～0.4508μg进样量范围内与峰面积值呈良好线性关系,平均回收率为96.96%，RSD为0.58%(n=6)。结论：该方法准确、快速、专属性强，可作为心速宁胶囊的质量控制方法。

心速宁胶囊； 盐酸小檗碱；HPLC法；含量测定

心速宁胶囊由黄连、半夏、 茯苓、枳实、 常山、莲子心、苦参、青蒿、人参、麦冬、甘草11味中药组方而成。具有清热化痰、定心定悸的功效，主治痰热忧心所致的心悸、胸闷、心烦、易惊、口干口苦、失眠多梦、眩晕、脉结代等症。适用于冠心病、病毒性心肌炎引起的轻、中度室性过早搏动见上述症状者。本研究旨在建立HPLC法测定心速宁胶囊中盐酸小檗碱含量的方法。

1 仪器与试剂

1.1 实验仪器

日立高效液相色谱仪；L-2130色谱泵；L-2450检测器。

1.2 试验试剂

乙腈为色谱纯，水为重蒸馏水；盐酸、甲醇、磷酸二氢钾和十二烷基磺酸钠为分析纯试剂。盐酸小檗碱(110713-201212)购自中国食品药品检定研究院。实验用样品：心速宁胶囊样品(陕西摩美得制药有限公司，批号131001、131002、131003)。

2 实验方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：安捷伦Extend-C18柱，5μm填充料，4.6×250mm；流动相：乙睛-水(48∶52)(1000μL中含KH2PO43.4g，十二烷基磺酸钠1.2g)；检测波长：270nm；流速1.0μL/min；进样量10μL。

2.2 溶液制备

2.2.1 对照品溶液制备 精密称取盐酸小檗碱对照品适量，加甲醇制成每1μL含25μg的溶液，即得。

2.2.2 供试品溶液制备 取本品10粒内容物，研细，取约0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇-盐酸(100∶1)的混合溶液25μL，密塞，称定重量，超声处理(功率250W，频率40kHz)40min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液2μL，置10μL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.2.3 阴性溶液制备 按照心速宁胶囊处方比例，除去黄连，按照供试品溶液的制备方法制备阴性溶液。

2.3 系统适用性试验

按照以上仪器及方法，取本品供试品溶液(131001批)，对照品溶液及阴性对照溶液。分别精密吸取10μL注入色谱仪，照上述色谱条件测定。结果供试品溶液HPLC图谱中盐酸小檗碱色谱峰的保留时间为8.140min，盐酸小檗碱色谱峰峰形好，阴性样品色谱中，在盐酸小檗碱色谱峰相对应的位置上未见色谱峰，阴性对照无干扰。因此，照上述方法测定黄连中有效成分盐酸小檗碱，方法可行。

2.4 供试品溶液制备方法考察

本品含量测定项下供试品溶液制备方法参照《中国药典》2010年版一部黄连药材项下含量测定中的供试品溶液制备方法，对超声提取时间进行考察，选择最佳提取条件。具体制备方法：取本品131001批样品的内容物，研细，分别称取6份，各取约0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇-盐酸(100∶1)的混合溶液25μL，密塞，称定重量，分别超声处理(功率250W，频率40kHz)30min、40min、50min，放冷，再称定重量，分别用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液2μL，置10μL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。试验结果见表1,结果表明，本品按上述制备方法制备供试品溶液，在超声处理(功率250W，频率40kHz)40min条件下，测得的含量最高，故本品供试品溶液制备时，选择超声处理时间为40min。

表1 不同超声处理时间下含量测定结果

2.5 方法学考察

2.5.1 稳定性试验 取批号为131001的供试品溶液，分别于0、2、4、6、8、10h进样测定，考察供试品溶液的稳定性。结果表明，本品6次测定峰面积平均值为7139324.5，RSD为0.23%(n=6)，表明本品供试品溶液在10h内稳定性良好。

2.5.2 线性关系考察 精密吸取盐酸小檗碱对照品溶液1μL 0.022542mg/1μL 2.5、5、7.5、10、12.5、15、20μL，注入高效液相色谱仪，按上述色谱条件测定，以盐酸小檗碱色谱峰面积值为Y，进样量为X(μg)，进行线性回归，得线性方程：Y=2×107X+253 264，r=0.998 2。结果表明，盐酸小檗碱在0.0563～0.4508μg进样量范围内与峰面积值呈良好的线性关系。

2.5.3 精密度试验 取本品(131001批样品)同一供试品溶液，重复进样6次，进样量为10μL，以峰面积计算 RSD%， RSD%=0.21(n=6)，表明仪器精密度良好。

2.5.4 重复性试验 取同一批样品(批号131001)6份，照上述供试品溶液制备方法制备，并按以上色谱条件测定，分别计算每份样品中盐酸小檗碱含量，并以含量计算RSD%，RSD%=0.16(n=6),结果表明本品按上述色谱条件试验重复性良好。

2.5.5 回收率试验 取已知含量的样品(批号131001)，倾出内容物，研细，精密称取6份(每份约0.1g)，分别精密称定，置具塞三角瓶中，分别精密称取盐酸小檗碱对照品适量(约相当于样品中盐酸小檗碱含量)，加入上述样品中，按供试品溶液制备方法制备，并按上述色谱条件测试，计算回收率，结果见表2，平均回收率为96.96%，RSD为0.58%。

2.5.6 含量测定 取本品10批样品(批号分别为130101、130102、130301、130302、130401、130402、130601、131001、131002、131003)，用上述方法分别测定盐酸小檗碱的含量，本品盐酸小檗碱含量在9.10～11.47mg/粒之间，平均值为10.06mg/粒，故参照原标准含量限度，规定本品每粒含黄连以盐酸小檗碱(C20H17NO4·HCl)计，不得少于8.0mg。

表2 回收率试验结果

3 讨论

心速宁胶囊由11味中药组成，黄连是君药，黄连中主要成分为盐酸小檗碱，原标准方法采用薄层扫描法测定盐酸小檗碱，精确度较差，本方法参照《中国药典》2010年版一部黄连药材项下含量测定供试品溶液制备方法，以乙睛-水(48∶52)(1 000μL中含KH2PO43.4g，十二烷基磺酸钠1.2g)为流动相，盐酸小檗碱色谱峰的保留时间为8.140min，峰形好，分离效果好，可以作为心速宁胶囊的质量控制方法。

[1] 国家药典委员会.中国药典[S].北京：化学工业出版社：2010.

[2] 杨帝顺.用RP-HPLC法测定愈肠颗粒中小檗碱和异白茅苷的含量[J].药学服务与研究，2014，14(6)：447-449.

(责任编辑：宋勇刚)

2015-06-26

毛鹏(1977-)，男，陕西摩美得制药有限公司工程师，研究方向为新药开发。

R284.2

A

1673-2197(2015)23-0037-02

10.11954/ytctyy.201523014