金樱子颗粒剂与金樱子饮片对肾炎大鼠临床药效比较

吕孝佳，王建芬，陈 敏，肖 敏，汤 晴，陆 叶

(长沙医学院，湖南 长沙 410219)



金樱子颗粒剂与金樱子饮片对肾炎大鼠临床药效比较

吕孝佳，王建芬，陈 敏*，肖 敏，汤 晴，陆 叶

(长沙医学院，湖南 长沙 410219)

目的：比较金樱子颗粒剂与金樱子饮片对肾炎模型大鼠的临床疗效。方法：制备金樱子醇提浓缩物颗粒剂，建立实验性肾炎大鼠模型，随机将其分为正常组、模型组、饮片组和颗粒组，分别给予相应药物。采用生化分析仪检测各组肾炎大鼠尿蛋白、尿红细胞、血清白蛋白、尿素氮、肌酐含量，并对其肾组织进行病理学显微观察。结果：金樱子醇提颗粒剂及饮片均可降低IgA肾炎大鼠尿蛋白、尿红细胞含量，并能减少因肾炎而升高的血清尿素氮及肌酐水平，减轻肾小球系膜增生，减少受损组织。结论：与金樱子饮片相比，金樱子醇提颗粒剂更能改善肾炎大鼠肾功能，减轻肾损伤。

金樱子；肾炎；颗粒剂

金樱子(RosalaevigataMickx)为蔷薇科植物金樱子的干燥成熟果实，性味酸、甘、平，归肾、膀胱、大肠经，具有固精缩尿、涩肠止泻的功效[1]。近年来结合中医药现代化技术，许多学者对金樱子对肾病的疗效展开了大量研究[2-4]。本实验在前人研究的基础上进一步比较金樱子颗粒剂与饮片在降低尿红细胞、改善肾脏系膜组织增生方面的疗效差异。利用肾炎大鼠实验模型，观察其服药前后相关肾功能指标的变化情况，为金樱子颗粒剂的临床应用提供科学依据。

1 材料与试剂

1.1 动物

SD大鼠，无特定病原体级，雄性，50只，18～20周龄，个体体重差异小于平均体重的20%，由湖南斯莱克景达实验动物有限公司提供，动物合格证号：SCXK(湘)2011-0003，含购入日饲养3天，去除外观、一般状态出现异常等可能对试验造成影响的大鼠。

1.2 药品

金樱子饮片购自安国市神禾中药材饮片有限责任公司，经长沙医学院生药教研室彭电讲师鉴定为金樱子。

金樱子颗粒剂制备方法：将70g金樱子饮片与700mL 70%乙醇回流3h后浓缩成相对密度约为0.96的稠膏，加入稠膏-乳糖-可溶性淀粉(5∶3∶12)及适量10%淀粉浆，混匀过筛，干燥整粒后即得，每克颗粒相当于原药材0.625g。制得颗粒符合《中国药典》2010版附录有关颗粒剂项下的检查要求。

1.3 仪器与试剂

JA2003电子天平(上海舜宇恒平科学仪器有限公司)，KD-202-VI冷冻切片机(北京佳源兴业科技有限公司)，生化自动检测仪，光学显微镜。

牛血清白蛋白购自国药集团化学试剂有限公司，批号：20121113；脂多糖(LPS)购自北京鼎国昌盛生物技术有限责任公司，原编号：L2880 LOT：032M4082V；蓖麻油购自天津市富宇精细化工有限公司，批号：20130317；四氯化碳购自天津市富宇精细化工有限公司，批号：20090516。

2 方法

2.1 肾炎大鼠模型建立

根据文献[6-8]报道，将SD大鼠适应性饲养1周后，除去外观和状态异常的大鼠，将剩余大鼠随机分为正常组、模型组、饮片组、颗粒组，每组各8只。除正常组大鼠外，其余各组隔日灌服阳离子牛血清白蛋白(BSA)，剂量为400mg/kg，从第6周隔日尾静脉注射1%BSA，持续3周。第9周起，皮下注射蓖麻油1.0mL+CCl40.2mL，每周1次，持续4周，并联合运用脂多糖(LPS)，分别于第9、11周尾静脉注射LPS 0.1mg，建立肾炎模型。

2.2 肾炎大鼠给药方案

金樱子饮片组按照10g/kg的剂量[7]将药物添加在饲料里，金樱子颗粒剂组按照16g/kg的剂量(相当于含金樱子药材量计)将药物添加在饲料里，模型组和正常组大鼠则给予等量饲料，持续喂养4周(每周按称重后调整给药剂量)。给药期间每日观察各组大鼠体征、进食、行为及阴部尿染等变化。

2.3 统计学分析

3 结果

3.1 造模过程尿蛋白和尿红细胞测定

造模期间，于第7、12周收集各组大鼠24h尿液，分别取10mL和1mL测定尿蛋白和尿中红细胞变化。连续3周尾静脉注射BSA后，除正常组外，其他组大鼠尿蛋白均有所升高，但组间差异不明显。进一步连续皮下注射蓖麻油和CCl4，并联合运用LPS后，除正常组外，各组大鼠尿蛋白水平均显著增加(P<0.05)，并出现中度血尿。见表1。

组别例数(n)尿蛋白(g·L-1)造模前第7周第12周尿红细胞造模前第7周第12周正常组82.46±0.514.26±0.436.25±0.72---模型组82.21±0.266.36±1.4637.82±6.35*--++饮片组83.2±0.357.21±1.4635.67±7.21*--++颗粒组82.1±0.286.89±2.1341.23±8.35*--++

注：与正常组比较，*P<0.05。血尿强度用半定量评分：阴性(-)；阳性：轻度(+)，中度(++)，(重度+++)。

3.2 给药期间尿蛋白和尿红细胞测定

根据实验给药方案，分别于给药后第2周、第4周收集各组大鼠24h尿液，测定其尿蛋白和尿中红细胞变化。结果表明，饮片组和颗粒组大鼠尿蛋白和尿红细胞含量均明显下降(P<0.05)，模型组大鼠尿蛋白和尿红细胞含量呈明显上升趋势，与给药前比较差异具有统计学意义(P<0.05)。给药4周后，饮片组和颗粒组大鼠血尿强度均降为轻度，且颗粒组大鼠尿蛋白下降程度更明显，见表2。

组别例数(n)尿蛋白(g·L-1)给药第2周给药第4周尿红细胞给药第2周给药第4周正常组87.06±0.866.38±0.54--模型组842.28±5.85*45.28±5.26*+++++饮片组832.67±6.21*26.33±4.38*+++颗粒组831.75±7.18*25.46±5.45*+++

注：与正常组比较，*P<0.05。血尿强度用半定量评分：阴性(-)；阳性：轻度(+)，中度(++)，(重度+++)。

3.3 服药后肾炎大鼠血清白蛋白(Alb)、尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)含量比较

连续用药4周后，用乙醚麻醉实验大鼠，腹主动脉取血，凝固后立即离心分离血清，采用生化自动检测仪测定各组大鼠血清白蛋白(Alb)、尿素氮(BUN)和肌酐(Cr)含量。结果表明，饮片组和颗粒组大鼠血清白蛋白含量均有所升高，尿素氮(BUN)和肌酐(Cr)含量均明显低于模型组 (P<0.05)；颗粒组大鼠血清肌酐(Cr)含量趋近于正常组，由此可见金樱子饮片和金樱子颗粒剂均可改善肾炎大鼠血清生化指标，但就降低血清尿素氮和肌酐含量而言，颗粒组略显优势，见表3。

组别例数(n)Alb(g·L-1)BUN(mmol·L-1)Cr(μmol·L-1)正常组839.21±1.394.42±1.8341.00±2.11模型组834.85±1.545.49±1.22﹡60.00±2.64*饮片组843.59±1.454.38±1.33⊿55.00±3.13⊿颗粒组842.21±1.354.26±1.35◇42.00±3.15◇

注：正常组与模型组比较，*P<0.05；模型组与饮片组比较，⊿P<0.05；模型组与剂型组比较，◇P<0.05。

3.4 大鼠肾组织病理变化

服药4周后，各组大鼠取出肾组织，取10%福尔马林固定液固定、30%蔗糖脱水制成10μm厚的冰冻切片，以苏木素-伊红(HE)染色，光镜下观察各组大鼠肾小球变化情况，见图1。肾炎大鼠肾脏病变主要表现为弥漫型中重度系膜组织增生(系膜区增宽)、基质增多，肾小管上皮细胞肿胀。HE染色光镜下显示，与模型组相比，饮片组和颗粒组大鼠系膜组织增生程度较轻，且颗粒组增生程度较饮片组轻，说明金樱子颗粒对肾炎有更好的治疗效果。

图1 各组大鼠肾组织病理显微观察结果 (HE,×400)

4 讨论

本实验结果表明，金樱子颗粒剂与饮片在含有相同含量有效成分的条件下均能减轻肾炎模型大鼠蛋白尿和血尿情况，减缓肾脏肾小球系膜增生，减少受损组织，降低蛋白尿和尿红细胞含量，且金樱子颗粒剂效果优于饮片。考虑到金樱子颗粒剂是在金樱子水醇提取物[9]的基础上经过剂型开发而得到的制剂，因此未将更多的肾炎病理检测指标列入考察内容，其剂型优化仍需进一步深入研究。

[1] 李时珍.本草纲目[M].北京:人民卫生出版社,1978:243.

[2] 张庭延,聂刘旺,刘爱民,等.金樱子多糖的免疫活性研究[J].中国实验方剂学杂志,2005,11(4):55.

[3] 陈敬民,李友娣.金樱子醇提物对血清病型肾炎大鼠模型的药理作用[J].时珍国医国药,2006,17(8):1404.

[4] 张庭延,潘继红,聂刘旺,等.金樱子多糖的抑菌和抗炎作用研究[J].生物学杂志,2005,22(2):41.

[5] 唐红梅,常丽新,丁存宝,等.回流法提取山楂叶悬钩子叶片中黄酮类化合物的工艺研究[J].安徽农业科学,2011,39(32):19772-19774.

[5] 汤颖,娄探奇,成彩联,等.实验性IgA肾病模型的改进[J].中山大学学报:医学科学版,2006,27(2):184-187.

[6] 刘 明,庞 媛,程云霞,等.益肾冲剂治疗IgA肾病大鼠的实验研究[J].中医药学刊,2002,21(7):1111.

[7] 刘照峰.玉肾汤对IgA肾病大鼠的实验研究[J],实验中医药学,2006,7(4):17-19.

[8] 周玖瑶,王霞,余应嘉,等.三叶人字草对IgA肾病模型大鼠的治疗作用[J].中国新药与临床药理,2009,11(20):533-536.

(责任编辑：尹晨茹)

Comparison Between Fructus Rosae Laevigatae from Fructus Rosae Laevigatae Granules and Slices On the Efficacy of Nephropathy

Lv Xiaojia,Wang Jianfen,Chen Min*, Xiao Min,Tang Qing, Lu Ye

(Changsha Medical School, Changsha 410219,China)

Objective:To compare pharmacological equivalent test on nephropathy in rats Jinyingzi alcohol extract granules and herbal.Methods:To preparate Jinyingzi alcohol extract granules, nephropathy model was established, rats were devided into normal group，model group , herbal group and granules group. The levels of Urinary protein，Red blood cells in urine,serum albumin,creatinine and urinary nitrogen were determined by Automatic biochemical analyzer. Renal pathology was observated by optical microscoper.Results:The levels of Urinary protein and Red blood cells in urine of nephropathy in rats were decreased,and the number of increased serum urea nitrogen and creatinine of nephropathy in rats were reduced both Jinyingzi alcohol extract granules and herbal,Conclusion:Fructus rosae laevigatae fructus rosae laevigatae alcohol granules than yinpian treating nephritis rats have better effect.

RosalaevigataMichx;Nephropathy;Granules

2014-09-23

湖南省大学生研究性学习和创新性实验计划项目(湘教通[2012]402号)

吕孝佳,男，长沙医学院在读生，研究方向为药物制剂。

陈敏(1994-)，女，长沙医学院在读生，研究方向为药学。E-mail:lightysun@163.com

R285.5

A

1673-2197(2015)02-0011-02

10.11954/ytctyy.201502005