复方熊胆茵陈颗粒祛痰化瘀作用药效学研究

郑海音，徐 伟，黄鸣清，李 煌，洪振丰，阙金花

(1.福建中医药大学 中西医结合学院，福建 福州 350122；2.福建中医药大学 药学院，福建 福州 350122)



复方熊胆茵陈颗粒祛痰化瘀作用药效学研究

郑海音1，徐 伟2，黄鸣清2，李 煌2，洪振丰1，阙金花2

(1.福建中医药大学 中西医结合学院，福建 福州 350122；2.福建中医药大学 药学院，福建 福州 350122)

目的：研究复方熊胆茵陈颗粒的祛痰化瘀作用。方法：小鼠连续灌胃给药5天，末次给药30min后采用酚红法检测复方熊胆茵陈颗粒的祛痰作用；同时，SD大鼠连续灌胃给药5天，末次给药1 h后测定大鼠排痰量，研究复方熊胆茵陈颗粒的祛痰作用；SD大鼠连续灌胃给药14天，末次给药后采用肾上腺素+冷水刺激制造急性血瘀大鼠模型，检测大鼠血液流变学指标，研究复方熊胆茵陈颗粒的化瘀作用。结果：复方熊胆茵陈颗粒中、高剂量组可增加小鼠酚红排泌量，高剂量组可增加大鼠排痰量；复方熊胆茵陈颗粒高剂量可改善肾上腺素+冷水刺激诱导的急性血瘀大鼠全血还原中切黏度和红细胞刚性指数。结论：复方熊胆茵陈颗粒具有一定的祛痰化瘀作用。

复方熊胆茵陈颗粒；祛痰；化瘀

复方熊胆茵陈颗粒是福建中医药大学附属第二人民医院院内制剂(批准文号：闽药制Z20110007)，并获得国家知识产权局授权专利(ZL201210516947.9)。方中含有熊胆粉、茵陈、山楂、泽泻、白术、柴胡、甘草等七味中药，具有清肝利湿、祛痰化瘀、疏肝健脾之功效。本研究就该方的祛痰化瘀功效进行初步药效学研究，以进一步探讨该方的作用机制。实验采用小鼠酚红祛痰及大鼠排痰法，观察复方熊胆茵陈颗粒的祛痰作用；构建肾上腺素及冷水刺激诱导的急性血瘀大鼠模型，观察复方熊胆茵陈颗粒的化瘀作用。

1 材料与仪器

1.1 动物

健康SPF级SD大鼠，SPF级KM小鼠，均雌雄各半，由广东省医学实验动物中心提供，实验动物使用许可证号：SYXK(粤)2008-0002。

动物在广东省医学实验动物中心SPF级动物房进行饲养，饲养条件：中箱10只小鼠，大箱5只大鼠；饲养温度与湿度：20～26℃，40%～70%，采用10∶14h昼夜间断照明，自由进食和饮水。饲料和饮用水均由广东省医学实验动物中心提供。购入大(小)鼠均检疫3～7天，期间每天检查1次，且未发现不健康大(小)鼠，全部健康鼠均纳入实验。

1.2 药物

复方熊胆茵陈颗粒(福建中医药大学附属第二人民医院，批号：20121101)；复方贝母氯化铵片(西安利君制药有限责任公司，批号：120725)；硫酸氢氯吡格雷片(深圳信立泰药业股份有限公司，批号：20121005)；复方丹参片(广州白云山和记黄埔中药有限公司，批号：12A041)；盐酸肾上腺素(天津药业集团新郑股份有限公司产品，批号：1203121)；戊巴比妥钠(Sigma公司，批号：120210)；苯酚红(天津市福晨化学试剂厂，批号：20120210)。

1.3 仪器

BS-3000A系列电子天平(上海友声衡器有限公司)；BS224S电子天平(德国Sartorius)；N6G全自动血液流变仪(北京普利生仪器有限公司产品)；UV-1200型紫外可见分光光度计(上海美谱达仪器有限公司)。

2 方法

2.1 复方熊胆茵陈颗粒祛痰试验

2.1.1 复方熊胆茵陈颗粒对小鼠酚红祛痰的影响 苯酚红标准曲线绘制[1]：称取一定量的苯酚红，加5%碳酸氢钠溶液配制成100μg·mL-1的酚红溶液，作为储备液，分别精密吸取0.01、0.03、0.07、0.10、0.30、0.50mL酚红储备液于10mL容量瓶中，用5%碳酸氢钠溶液定容，摇匀，作为标准溶液备用。取适量上述配制的标准溶液，以5%的碳酸氢钠溶液作为空白对照，采用分光光度计于546nm处测定吸光度(OD)，每个浓度平行测定3次，取其平均值，以酚红剂量为横坐标，OD值为纵坐标，绘制标准曲线。酚红标准曲线方程为：Y=1.038X+0.005，r=0.999 7。

SPF级KM小鼠50只，雌雄各半，(25±2)g。检疫合格后，随机分为空白对照组、阳性对照组(复方贝母氯化铵，50mg/mL)及复方熊胆茵陈颗粒低、中、高剂量组(按原药材计4.85、9.69、19.39g·kg-1·d-1)各10只。各组小鼠按20mL/kg分别灌胃给予相应的受试药物，每天1次，连续5天，空白对照组灌服等体积蒸馏水。末次给药30min后，按0.01mL/g腹腔注射酚红溶液(50mg/mL)。注射酚红溶液30min后，处死小鼠，剥离气管周围组织，剪下自甲状软骨下至气管分支处气管，放入含有2mL生理盐水试管中，加0.1mL浓度为1M的NaOH溶液，调节pH为碱性，浸泡1h后取上清液，采用分光光度计于546nm处测定OD值，根据酚红标准曲线计算小鼠酚红分泌量。

2.1.2 复方熊胆茵陈颗粒对大鼠排痰量的影响 SPF级SD大鼠50只，雌雄各半，(180±20)g，随机分为空白对照组、阳性对照组(复方贝母氯化铵，10mg/mL)及复方熊胆茵陈颗粒低、中、高剂量组(按原药材计2.42、4.85、9.69g·kg-1·d-1)各10只。各组大鼠按10mL/kg灌服相应药物，空白对照组给予等体积蒸馏水，每天1次，连续给药5天。末次给药1h后，腹腔注射3%的戊巴比妥钠溶液麻醉大鼠，仰位固定，颈部去毛，解剖分离气管，在甲状软骨下缘正中两软骨间插入已知重量的玻璃毛细管(毛细管长10cm，内径0.8mm左右)，使分泌液沿毛细管上升，收集60min气管分泌引流液，称重后收集60min/100g体重的引流重量。

2.2 复方熊胆茵陈颗粒对肾上腺素及冷水刺激诱导的急性血瘀大鼠影响[2]

SPF级SD大鼠84只，雌雄各半，(250±50)g。检疫结束后动物随机分为7组，即阴性对照组、模型对照组、阳性对照组(硫酸氢氯吡格雷片，1.56mg/mL；复方丹参片，112.5mg/mL)及复方熊胆茵陈颗粒低、中、高剂量组(按原药材计2.42、4.85、9.69g·kg-1·d-1)各12只。阴性对照组、模型对照组每天给予等体积的蒸馏水，其他各组大鼠每天按10mL/kg体重灌胃给予相应治疗药物，每天1次，连续给药14天。末次给药后，除阴性对照组外，其他各组大鼠皮下注射肾上腺素0.8mL/kg，共2次，间隔4h。首次注射肾上腺素2h后，将大鼠置于冰水浴中浸泡5min，阴性对照组于同等时间内注射同剂量的生理盐水及冰水浸泡，肾上腺素第2次注射后，大鼠禁食不禁水，24h后麻醉大鼠，取腹主动脉血，检测大鼠血液流变学指标。

2.3 统计方法

3 结果

3.1 复方熊胆茵陈颗粒的祛痰作用研究

3.1.1 复方熊胆茵陈颗粒对小鼠酚红祛痰的影响 复方贝母氯化铵组及复方熊胆茵陈颗粒中、高剂量组小鼠的酚红排泌量均显著高于空白对照组(P<0.01)，复方熊胆茵陈颗粒低剂量组小鼠的酚红排泌量与空白对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。见表1。

表1 复方熊胆茵陈颗粒对小鼠酚红排痰量的影响 ±s)

注：与空白对照组比较，*P>0.05，**P<0.01。

3.1.2 复方熊胆茵陈颗粒对大鼠排痰量的影响 复方贝母氯化铵组、复方熊胆茵陈颗粒高剂量组大鼠的痰排泌量显著高于空白对照组(P<0.01)，复方熊胆茵陈颗粒低、中剂量组大鼠的痰排泌量与空白对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。见表2。

3.2 复方熊胆茵陈颗粒对肾上腺素及冷水刺激诱导的急性血瘀大鼠血液流变学影响

模型评价：模型对照组全血黏度、全血还原黏度、血浆黏度、红细胞聚集指数及刚性指数均明显增加，与阴性对照组比较差异具有显著统计学意义(P<0.01)，红细胞压积增加(P<0.05)，红细胞电泳指数均有所增加。结果表明，肾上腺素及冷水刺激诱导的急性血瘀大鼠模型建模成功。

表2 复方熊胆茵陈颗粒对大鼠排痰量的影响 ±s)

注：与空白对照组比较，*P>0.05，**P<0.01。

给药后，与模型对照组比较，硫酸氢氯吡格雷片组可降低全血中切、高切黏度、全血还原低切、中切和高切黏度、红细胞刚性指数(P<0.05)，其他指标均有所改善但均无统计学差异(P>0.05)；复方丹参片组大鼠血液流变学各指标均无统计学差异(P>0.05)；复方熊胆茵陈颗粒高剂量组可降低全血还原中切黏度、红细胞刚性指数(P<0.05)，其他指标均有所改善但均无统计学差异(P>0.05)；复方熊胆茵陈颗粒低、中剂量组大鼠的血液流变学各指标均无统计学差异(P>0.05)。见表3。

表3 复方熊胆茵陈颗粒对肾上腺素及冷水刺激诱导的急性血瘀大鼠血液流变学影响 ±s)

续表3 复方熊胆茵陈颗粒对肾上腺素及冷水刺激诱导的急性血瘀大鼠血液流变学影响 ±s)

注：与阴性对照组比较，△P<0.05，△△P<0.01；与模型对照组比较，*P<0.05。全血低切黏度、全血还原中切、高切黏度均采用秩和检验，其他指标均采用方差。

4 讨论

复方熊胆茵陈颗粒中、高剂量组可增加小鼠酚红排泌量，复方熊胆茵陈颗粒高剂量组可增加大鼠痰排泌量，表明复方熊胆茵陈颗粒具有一定的祛痰作用，且呈现一定程度的剂量依赖性。

血瘀证是指一定病因诱导的血流缓慢或停滞，或血液离开血管产生瘀积，主要体现血液“浓、黏、凝、聚”的现象，是由于血液流变性异常而形成的全身或局部血液循环障碍[3]，并导致全身或局部血行的生理功能发生紊乱、改变等疾病。本实验采用给大鼠皮下注射肾上腺素加冷水刺激成功复制血流变性符合“浓、黏、凝、聚”的血瘀模型，其中对照组、低剂量组、高剂量组大鼠在冷水刺激后各死亡1只，复方丹参片组及中剂量组大鼠各死亡2只。实验结果表明：复方熊胆茵陈颗粒可改善血液流变学和血液黏度，减少血液循环及微循环阻碍，增加组织器官血流量发挥治疗效果。复方熊胆茵陈颗粒与硫酸氢氯吡格雷片组相同，对血瘀大鼠全血还原中切变黏和红细胞刚性指数具有降低作用(P<0.05)；复方熊胆茵陈颗粒与硫酸氢氯吡格雷片组及复方丹参片组比较，全血各切变黏度、全血还原各切变黏度、红细胞黏度、红细胞压积及红细胞各指数均无统计学差异(P>0.05)。血液流变学研究结果表明，复方熊胆茵陈颗粒对血瘀大鼠的血液黏度具有降低作用。现代医学研究认为，血液的流动性质和血液黏度是反映各种活血化瘀药物的客观指标[4]，可直接作为各种活血化瘀药物共同作用的指标之一。

综上所述，复方熊胆茵陈颗粒中、高剂量组可增加小鼠酚红排泌量，高剂量组可增加大鼠排痰量；复方熊胆茵陈颗粒高剂量可改善肾上腺素+冷水刺激诱导的急性血瘀大鼠全血还原中切黏度和红细胞刚性指数。复方熊胆茵陈颗粒具有祛痰、化瘀作用，为临床应用的药理基础。

[1] 刘尧,毛羽.广藿香挥发油止咳化痰药理实验的研究[J].时珍国医国药,2007,18(8):1920-1921.

[2] 白仲梅,张建强,魏玉辉,等.地奥心血康对血淤大鼠血液流变学及凝血系统的影响[J].兰州大学学报：医学版,2013,39(2):38-40.

[3] 郭玉明,姜淼,品爱平.中医证候分类研究进展[J].中国中医药信息杂志,2011,18(7):106-109．

[4] 刘静,陈丽梅,曹林青,等.伊痛舒注射液对血瘀大鼠的活血祛瘀作用[J].西北药学杂志,2004,19(6):260-261.

(责任编辑：李岚春)

Study on the Effect of Compound Xiongdanyinchen Granule in Eliminating Phlegm and Removing Stasis

Zheng Haiyin1,Xu Wei2,Huang Mingqing2,Li Huang2,Hong Zhenfeng1,Jue Jinhua2

(1.Department of Integrated Medicine;2.Department of Pharmacy,TCM College of Fujian,Fuzhou 350122,China)

Objective:To study the effect of eliminating phlegm and removing stasis of compound Xiongdanyinchen granule.Methods:The mice were given corresponding medicines for 5 days,using the method of phenol red to detect the effect of eliminating phlegm of compound xiongdanyinchen granule 30 min later after the last administration,also the rats were ig.5 days,by measuring the capillary of phlegm to study its eliminating phlegm effect 1 h later after the last administration.And the rats ig 14 days,then the acute blood-stasis model rats were made by injected adrenaline and soaked in ice water after the last administration,by detected the indexes of blood rheology of rats to study its removing stasis effect.Results:High and middle dosage of compound xiongdanyinchen granule can increased the excretory amount of phenol red for the mice,and the high dosage can increased excretory amount of phenol red for the rats.Also,the high dosage can improve RBV (blood viscosity) and IR (Index of rigidity of red cell) in the acute blood-stasis model rats.Conclusion:comoound xiongdanyinchen granule showed the effect of eliminating phlegm and removing stasis.

Compound Xiongdanyinchen Granule;Eliminating Phlegm;Removing Stasis

2015-03-09

福建省科技重大专项(2010YZ0001-1)

郑海音(1977-)，女，福建中医药大学副教授，研究方向为病理学与病理生理学。E-mail:zhyfjtcm@sina.com

R285

A

1673-2197(2015)16-0009-03

10.11954/ytctyy.201516005