高效液相色谱法测定地龙膏中柚皮苷含量

文芳杰，周 勇，游绍雪，李 姗

(黔南州中医医院，贵州 都匀 558000)



高效液相色谱法测定地龙膏中柚皮苷含量

文芳杰，周 勇，游绍雪，李 姗

(黔南州中医医院，贵州 都匀 558000)

目的：建立地龙膏中柚皮苷含量的测定方法，以控制该产品的质量。方法：采用Wondasil C18色谱柱(4.6mm×150mm，5μm)，以甲醇-醋酸-水(35∶4∶65)为流动相，流速为1.0mL/min，柱温30℃，检测波长283nm。结果：柚皮苷在0.055～1.370μg范围内，线性关系良好(r=0.999 9)。平均加样回收率为96.68%，RSD=1.33%。结论：该方法快速、灵敏、准确，稳定性、重现性良好，可用于地龙膏的质量控制。

地龙膏；柚皮苷；高效液相色谱法；含量测定

地龙膏为我院自制的中药制剂，由地龙、烫骨碎补等五味中药组成，具有清热消肿、化瘀止痛的功效，临床主要用于治疗急性软组织损伤。方中烫骨碎补的主要成分为柚皮苷，为了更好地控制该制剂的质量，本试验采用HPLC法测定了柚皮苷的含量。

1 仪器与试药

日本岛津LC-15C高效液相色谱仪(SPD-15C型紫外可见检测器，LCsolution Lite工作站)，FA-1004型电子天平(上海舜宇恒平科学仪器有限公司)，AUW120D型电子天平(日本岛津)，电热恒温水浴锅(上海医疗器械五厂)。

柚皮苷(中国食品药品检定研究院，批号：110722-201111)，地龙膏为我院制剂科自制；甲醇为色谱纯，水为娃哈哈纯净水，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件[1]

色谱柱：Wondasil C18柱(4.6mm×150mm，5μm)；流

动相：甲醇-冰醋酸-水(35∶4∶65)；检测波长：283nm；柱温：30℃；流速：1.0mL·min-1；理论塔板数按柚皮苷峰计算应不低于3 000。

2.2 溶液配制

2.2.1 对照品溶液制备 精密称取柚皮苷对照品13mg，置25mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀；精密量取1mL置10mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得每1mL含柚皮苷0.054 8mg的对照品溶液。

2.2.2 供试品溶液制备 取本品5片，除去盖衬，精密称定，平展贴于医用纱布上，剪成约1cm×1cm的小片，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇200mL，密塞，称定重量，加热回流3h，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.2.3 阴性样品溶液制备 取缺烫骨碎补的其他各味药材，按“2.2.2”项下方法制备阴性样品溶液，即得。

2.3 专属性试验

精密吸取对照品溶液、供试品溶液及阴性样品溶液各10μL，按“2.1”项下方法测定，样品中柚皮苷色谱峰与其他色谱峰分离良好，阴性样品溶液无干扰，证明系统适应性良好。柚皮苷、样品及阴性样品的HPLC图谱见图1。

图1 地龙膏HPLC图谱

2.4 线性关系考察

精密吸取对照品溶液(浓度为0.0548mg·mL-1)1、5、10、15、20、25μL，注入液相色谱仪中，按“2.1”项下色谱条件测定峰面积，以峰面积积分值(Y)对进样量(X)进行线性回归，得回归方程为：Y=193288X+611.45，r=0.999 9。结果表明柚皮苷在0.054 8～1.37 0μg范围内，峰面积与进样量呈良好的线性关系。见图2。

图2 柚皮苷标准曲线

2.5 精密度考察

精密吸取对照品溶液10μL，按“2.1”色谱条件重复进样6次，测定柚皮苷峰面积RSD为1.43%，表明仪器的精密度良好。结果见表1。

表1 精密度试验结果

2.6 稳定性试验

取同一供试品溶液，按“2.1”色谱条件于0、1、2、4、6、8h进样测定，记录柚皮苷色谱峰峰面积。结果表明样品溶液在8h内保持稳定，RSD=1.37%。结果见表2。

表2 稳定性试验结果

2.7 重复性试验

取同一批样品，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液6份。精密吸取各供试液10μL，分别注入液相色谱仪，测定峰面积并计算含量，结果样品中柚皮苷的平均含量为0.834mg/10g，RSD=1.31%，表明重复性良好。见表3。

表3 重复性试验结果

2.8 回收率试验

取已知含量的地龙膏样品(批号20120206，含量0.834mg/10g)2片，共6份，分别除去盖衬，精密称定，分别加入柚皮苷对照品适量，按“2.2.2”项下方法制备成供试品溶液，按“2.1”色谱条件测定柚皮苷的含量，计算回收率。结果平均回收率为96.68%，RSD=1.33%，见表4。

表4 回收率试验结果

2.9 样品含量测定

取地龙膏5片，精密称定，按“2.2.2”项下方法制备成供试品溶液，按“2.1”色谱条件测定峰面积，计算样品中柚皮苷的含量。结果见表5。

表5 样品含量测定结果

3 讨论

3.1 提取条件的选择

试验前期，曾考察甲醇和乙醇对本品的提取效率，结果甲醇提取完全，杂质较少；且以甲醇为提取溶剂，通过对超声提取法和回流提取法以及提取时间的考察，结果得甲醇加热回流3h，柚皮苷提取效果较好，方法可行。

3.2 测定方法的选择

骨碎补为方中主药，主要含柚皮苷。目前，国内外报道中，柚皮苷的含量测定方法较多[2-5]，笔者参考《中国药典》中骨碎补的含量测定方法，采用高效液相色谱法，以甲醇-冰醋酸-水(35∶4∶65)为流动相建立了适合本制剂的含量测定方法，并测定出合理的含量限度。且测定方法能提取完全，精密度、重现性良好，回收率符合药典要求，整个试验可控性强，能较客观地控制本品的含量。

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典 [S].一部.北京：中国医药科技出版社,2010:239.

[2] 伍奕,蒋晓煌,蒋孟良,等.骨碎补中柚皮苷含量测定方法的优化研究[J].湖南中医药大学学报,2010,30(3):48-50.

[3] 秦文兵,岐琳.HPLC法测定骨伤胶囊中柚皮苷的含量[J].西北药学杂志,2009,24(3):168-169.

[4] 李雁玲,汤启勋.HPLC法测定驳骨丸中柚皮苷的含量[J].中药新药与临床药理,2004,15(1):46-47.

[5] 李芳,周建平,雷建林,等.HPLC测定接骨续筋胶囊中柚皮苷的含量[J].现代中医药,2007,27(6):57-59.

(责任编辑：魏 晓)

Determination of Naringin in Dilong Emplastrum by HPLC

Wen Fangjie，Zhou Yong，You Shaoxue，Li Shan

(Qiannan Traditional Chinese Medicine Hospital，Duyun 558000，China)

Objective:To establish a method for the determination of naringin in Dilong emplastrum.Methods:The HPLC separation was performed on Wondasil-C18(4.6mm×150mm，5μm) column with a mixture methanol-acetic acid-water(35∶4∶65)as the mobile phase,at a flow rate of 1 ml/min. Detection wavelength was 283nm and column temperature was 30℃.Results:The linearity of naringin was in the range of 0.0548～1.370μg (r=0.999 9) and the average recovery was 96.68 %,RSD=1.33 %.Conclusion:The method quick,sensitive,accurate,stable,reproducible and can be used to control the quality of Dilong emplastrum.

Dilong Emplastrum；Naringin；HPLC

2015-07-01

文芳杰(1974-)，女，贵州省黔南州中医医院主管药师，研究方向为中药新药研发。

R284.2

A

1673-2197(2015)21-0041-03

10.11954/ytctyy.201521017