基于HPLC法同时测定3个苷元含量的射干药材质量评价研究

姜 鸿，张婧涵，邹桂欣，李国信*，张振秋*

(1.辽宁省中医药研究院, 辽宁 沈阳 110034；2.辽宁中医药大学 药学院 ,辽宁 大连 116600)



基于HPLC法同时测定3个苷元含量的射干药材质量评价研究

姜 鸿1，张婧涵2，邹桂欣1，李国信1*，张振秋2*

(1.辽宁省中医药研究院, 辽宁 沈阳 110034；2.辽宁中医药大学 药学院 ,辽宁 大连 116600)

目的：建立射干药材中野鸢尾黄素、白射干素和次野鸢尾黄素3个苷元的含量测定方法，比较不同产地及不同栽培方式射干药材中3个苷元的含量。方法：采用HPLC法，使用Phenomenex Synergi 4u Polar-RP色谱柱，流动相为0.1%甲酸水溶液-乙腈，梯度洗脱，流速0.5mL/min，柱温40℃，检测波长为266nm。结果：野鸢尾黄素在140.2～1402μg(r=0.999 9，n=6)，白射干素在96.4～964μg(r=0.9998，n=6)，次野鸢尾黄素在77～770μg(r=0.999 9，n=6)范围内线性关系良好；平均加样回收率分别为：99.05%、98.86%、97.52%(n=9)。结论：该方法灵敏、快速、准确，专属性强，可为射干药材的质量评价研究提供理论依据。

射干；野鸢尾黄素；白射干素；次野鸢尾黄素；HPLC

射干为鸢尾科植物射干(Belamcandachinensis(L)DC.)的根茎，味苦辛，性寒，归肺、肝经。具有清热解毒、祛痰利咽、消癖散结之功效，临床用于治疗痰涎壅盛、咽喉肿痛、痰咳气喘、胸胁满闷、瘰疬、痈肿疮毒等症，为中医治疗喉痹咽痛之要药。射干主要含有黄酮类和异黄酮类化合物，此外还有酮类、醌类、酚类、二环三萜类、甾类化合物等，射干中的苷元具有明显的抗炎作用[1-3]。

1 仪器与试药

仪器：Agilent 1100高效液相色谱仪、四元泵、DAD检测器(Agilent公司)；电子天平(梅特勒-托利多仪器有限公司)；KQ3200超声波清洗器(超声功率120 W,工作频率40kHz,昆山市超声仪器有限公司)。

对照品：野鸢尾黄素(批号：20140609)、白射干素(批号：20140621)均购于江苏永健医药科技有限公司，纯度均大于98.5%；次野鸢尾黄素(批号：111557-200602)购于中国食品药品检定研究院)。

药材：不同产地的栽培和野生射干药材，均是花期后采集，经辽宁省中医药研究院药学研究室鉴定为鸢尾科植物射干(Belamcandachinensis(L)DC.)。

试剂：甲酸、乙腈为色谱纯；水为哇哈哈纯净水；乙醇为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱(Phenomenex Synergi 4u Polar-RP 250mm×4.6mm)，流动相为0.1%甲酸水溶液(A)，乙腈(B)，梯度洗脱(0～70min，86%A→86%A；70～71min，86%A→81%A；71～145min，81%A→0%A；145～155min，0%A→0%A)，流速：0.5mL/min，柱温：40℃，检测波长：266nm。

2.2 对照品溶液制备

(4)花岗质片麻岩类残坡积物：在北部许双头及南部滴水崖区域分布，主要出露二长花岗质片麻岩体。淀积层一般呈酸性-中酸性，母质风化后一般成麻石黄棕壤，土壤质地多为砂壤土。

精密称取野鸢尾黄素、白射干素和次野鸢尾黄素对照品适量，加甲醇分别制成含量为0.701、0.482、0.385mg/mL的对照品储备溶液。

2.3 供试液制备

取射干药材根茎适量，粉碎成细粉，精密称取1g，精密加入70%乙醇25mL，超声提取30min，冷却，用70%乙醇补足减失的重量，混匀，用微孔滤膜，滤过，取续滤液，作为供试品溶液。

2.4 专属性试验

分别取上述对照品溶液、供试品溶液进行测定，色谱见图1。

A.对照品; B.供试品;1.野鸢尾黄素;2.白射干素;3.次野鸢尾黄素

2.5 线性关系考察

精密吸取野鸢尾黄素、白射干素和次野鸢尾黄素对照品储备液逐级稀释，分别制成一系列不同浓度的对照品混合溶液，分别进样，记录峰面积，以对照品进样量为横坐标，峰面积为纵坐标进行线性回归，绘制标准曲线，结果表明3种成分线性关系良好。详见表1。

表1 3种指标成分的线性关系 (n=6)

精密吸取野鸢尾黄素、白射干素和次野鸢尾黄素的对照品混合溶液(浓度分别为70.1、38.5、48.2μg/mL)，在上述色谱质谱条件下，连续进样6次，记录峰面积，结果野鸢尾黄素、次野鸢尾黄素和白射干素峰面积的RSD分别为1.6%、0.85%、1.2%，表明仪器精密度良好。

2.7 重复性试验

取同一批射干药材(编号SG1) 粉末，按“2.3”项下方法制得6份供试品溶液，进样分析，结果野鸢尾黄素、白射干素和次野鸢尾黄素的平均含量分别为3.52mg/g、0.53mg/g、1.66mg/g，RSD分别为1.8%、1.3%、2.3%，结果表明该实验重复性良好。

2.8 稳定性试验

取同一供试品溶液，分别在0、2、4、8、12、24h进样，结果野鸢尾黄素、白射干素和次野鸢尾黄素的峰面积RSD分别为2.1%、1.9%、2.5%，结果表明供试液在24h内稳定。

2.9 加样回收率试验

取已知含量的射干药材粉末(编号SG1)，精密称取0.5g，共9份，分别按高、中、低质量浓度分别精密加入混合对照品溶液适量，按“2.3”项下方法制备供试品溶液。分别测定，计算加样回收率，结果野鸢尾黄素、白射干素和次野鸢尾黄素的平均回收率分别为：99.05%、98.86%、97.52%，RSD分别为：0.9%、1.7%、1.9%。

2.10 样品含量测定

分别取不同来源的射干药材粉末，每个编号平行2份，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，测定，计算平均含量，结果见表2。

表2 不同来源射干药材的3种苷元含量测定结果

3 讨论

3.1 供试品溶液制备方法考察

根据待测组分化学性质，曾采用50%乙醇、60%乙醇、70%乙醇、80%乙醇、90%乙醇、乙醇、甲醇等不同提取溶媒对射干进行提取，结果70%乙醇提取所制备的供试品溶液干扰成分少，各主成分峰分离较理想，且被测各成分含量最高；曾对超声和加热回流提取进行考察，结果超声和加热回流提取时被测定成分的含量几乎没有区别，而且超声提取的供试液色谱图杂质干扰小；对超声提取时间考察结果表明，超声提取30min即可提取完全。因此，选择70%乙醇超声提取30min作为供试品溶液制备方法。

3.2 测定波长选择

取野鸢尾黄素、白射干素和次野鸢尾黄素对照品溶液在200～400nm范围内进行紫外吸收扫描，结果3个成分均在266nm下有最大吸收，且测定过程中发现266nm下基线平稳，各峰峰型较好。《中国药典》2010版射干药材项下次野鸢尾黄素的HPLC测定波长为266nm，故本试验选择266nm作为测定波长。

3.3 流动相的选择

实验中发现射干中有一些成分与被测3个成分很难分离，可能是结构和极性都比较接近。因此，本实验选择梯度洗脱，并考查了水与乙腈、磷酸水溶液与乙腈、甲酸溶液与乙腈不同配比，发现甲酸溶液与乙腈配比的分离效果较好。同时考查了不同浓度的甲酸水溶液、流速和柱温对分离效果的影响，最后确定0.1%甲酸水溶液与乙腈配比，流速为0.5mL/min，柱温为40℃时，峰型和分离度最好。

3.4 小结

文献报道，射干中的苷元具有明显的抗炎作用，《中国药典》2010版射干药材项下只对单一成分次野鸢尾黄素进行了定量分析，本实验建立了同时测定射干中野鸢尾黄素、白射干素和次野鸢尾黄素的高效液相色谱法，且方法灵敏度高，简便，重复性好，为深入研究射干药材的药效物质基础提供一定科学方法依据。

比较不同产地的射干药材中野鸢尾黄素、白射干素和次野鸢尾黄素含量，发现不同产地射干药材中3种苷元含量有所差异，原因可能与气候、光照时间、海拔高度和土壤成分等生长条件有关。而且同一生长地点，栽培射干中3种苷元含量高于野生的，原因可能是栽培采集的都是3年生的射干药材，而野生的很难控制生长年限，或者是栽培的可以人为控制生长条件，比如浇水、施肥和除杂草等对药材生长有较大影响的因素。因此，今后有必要考察气候、光照时间、海拔高度、土壤成分等自然因素和浇水、施肥等人为因素对射干药材中有效成分含量的影响，以便控制和提高射干药材的质量。

[1] 齐建红,李宏卫.123射干的化学成分、药理作用及临床应用[J].国外医药·植物药分册,2006,21(3):111-114.

[2] 李晓兰.中药射干的研究概况[J]. 海峡药学,2003,15(5):72-74.

[3] 邱鹰昆,高玉白,徐碧霞,等.射干的化学成分研究[J].中国药学杂志,2006,41(15):1133- 1135.

(责任编辑：宋勇刚)

2014-01-19

国家重大新药临床技术平台资助项目(2012zx09303-017)；国家自然科学基金资助项目(81273927)

姜鸿(1975-)，男，辽宁省中医药研究院副研究员，研究方向为中药新药开发与中药质量控制。

李国信(1963-)，男，博士，辽宁省中医药研究院博士生导师，研究方向为中药临床药理学。E-mail：syyljdlgx024@126.com；张振秋(1964-)，男，辽宁中医药大学教授，博士生导师，研究方向为中药质量标准。E-mail：zhangzhenqiu@sina.com

R284.1

A

1673-2197(2015)09-0021-03

10.11954/ytctyy.201509009