高效价冷凝集素所致血型鉴定困难200 例报告分析

刘 芳 ，高 新

（1.辽宁省阜新市中心血站，阜新 123000；2.阜新市第二人民医院，阜新 123000）

冷凝集素是冷反应型抗红细胞抗体，可与自身红细胞发生凝集，相关试验证实高效价冷凝集素可造成血型鉴定和交叉配血困难［1，2］。除冷凝集素综合征外，自身免疫性疾病、血液系统疾病、感染性疾病和肿瘤性疾病均可造成冷凝集素效价增高。如何排除高效价冷凝集素干扰，确保血型鉴定和交叉配血对降低输血治疗风险有重要的临床意义。本研究探析高效价冷凝集素所致血型鉴定困难的处理方法，现报道如下：

1 资料与方法

1.1 基本资料以收集的2011 年10 月～2014 年10 月200 例因冷凝集素导致的血型鉴定困难患者为观察对象，年龄23～58 岁，平均（40.6±3.6）岁，男性112 例，女性88 例，患者情况：贫血72 例，肺炎62 例，系统性红斑狼疮30 例，不明原因发热20 例，淋巴瘤16 例。

1.2 仪器和试剂仪器：离心机，水浴箱，显微镜，冰箱；试剂：单克隆抗体-A、抗-B、抗-D 和抗人球蛋白试剂，ABO 反定型标准红细胞、不规则抗体鉴定标准红细胞（上海血液生物医药有限责任公司），聚凝胺试剂（上海贝索生物技术有限公司）

1.3 方法

1.3.1 冷凝集素效价测定抽取5mL 静脉血，分离血清，取0.5mL 血清，用生理盐水倍比稀释，加等体积经过洗涤的正常人O 型2%红细胞悬液，摇匀，置于4℃冰箱过夜，以最高稀释倍数肉眼观察可见凝集者为冷凝集素检测效价。

1.3.2 血型鉴定取静脉血5 mL，分离血清和红细胞，正定型：取三支试管标以抗-A、抗-B、抗-D，5%红细胞悬液（生理盐水洗涤红细胞3 次制得）加入各1 滴，后加入抗-A、抗-B、抗-D 血型分型试剂2 滴，3000 转/min，离心15s，观察结果。反定型：取试管三支标以Ac、Bc、Oc，分别加入患者血清各2 滴，后加入ABO 血型分型试剂1 滴，3000 转r/min，离心15s，观察结果。

1.3.3 交叉配血盐水介质法：①取2 支试管，标明主、次侧，主侧管各滴1 滴供血者红细胞悬液和受血者血清，混匀，次侧管中各滴1 滴供血者血清和受血者红细胞悬液。②1000r/min 离心1 min，观察结果，同型配血，主侧、次侧均不凝集提示符合，出现凝集提示不符。凝聚胺法：① 取2 支试管（标明主、次侧），主侧管分别加受血者血清和供血者5%红细胞悬液各1 滴，混匀，次侧管反之。②分主次侧管中分别加0.6 mL 低离子溶液，混匀，各滴加凝聚胺液2 滴，混匀，1000r/min 离心10s，观察管底红细胞聚集情况，若试管反应物未凝集，重新检测。③将2 滴悬浮液加入2 试管中，混匀，观察结果。60s 内凝聚散开提示符合配血结果；若凝集未散开，提示不符合配血结果。

1.3.4 洗涤和吸收洗涤：100 mL 生理盐水置于37 度水浴箱30min，从中取8mL 生理盐水于试管中，加入0.5mL 红细胞，摇匀，3000 转/min 离心5 min，去上清，反复洗涤至显微镜观察无红细胞凝集，然后进行正定型检测。吸收：取正常2 mL O 型红细胞，生理盐水洗涤3 次，最后用吸水纸吸干上清液，加入等量血清置于4 度冰箱吸收120 min，3000 转r/min 离心5 min，取上清作反定型和交叉配血。

2 结果

2.1 血型鉴定结果高效价冷凝集素标本洗涤吸收前200 例抗-A、抗-B、抗-D、Ac、Bc、Oc 均为阳性，洗涤吸收处理后确定血型，A 型26%，B 型34%，AB 型35%，O 型5%，见表1。

表1 200例高效价冷凝集素标本处理前后的血型鉴定结果

2.2 交叉配血结果高效价冷凝集素处理前自身对照、盐水介质、聚凝胺介质中主侧、次侧交叉配血结果均为阳性，处理后主侧、次侧交叉配血结果均为阴性，见表2。

表2 200例高效价冷凝集素标本处理前后的交叉配血结果

3 讨论

冷凝集素以免疫球蛋白（IgM）形式存在于血清中，是红细胞自身免疫学冷抗体，该物质在4℃活性最高。相关研究 表明冷凝激素可直接作用红细胞抗原，健康人血清冷凝集素效价较低（<1∶16），室温下无活性，对红细胞不会造成影响。病理条件如肺炎、系统性红斑狼疮、贫血、肿瘤性疾病等，患者血清冷凝集素的含量上升，效价多超过1∶64，20℃的活性较强，影响红细胞功能，可能出现凝集现象，对人体造成不同程度伤害 。另外高效价冷凝集素还会导致血型鉴定困难，给交叉配血造成不利影响。ABO 血型鉴定和交叉配血是临床输血的基础，循环血量不足、贫血或失血过多的患者均需要接受输血治疗，输血前首先保证供血者和受血者的血型需相同，然后才可进行交叉配血，确定完全一致后方可输血。这就要求临床上加强对血型鉴定的重视，大量报道［5，6］指出高效价冷凝集素可导致血型鉴定困难，是影响输血的重要因素。本研究中的200 例患者血清冷凝集素均为高效价，在未接受洗涤和吸收前，经盐水法无法鉴定获得准确的血型，正反定型不相符，该结果说明高效价冷凝集素会导致血型鉴定困难。200 例患者洗涤吸收前的交叉配血结果均为凝集，说明高效价冷凝集素会导致交叉配血困难。根据凝集反应理论，供血者和受血者进行交叉配血试验要确保两者血液混合不发生凝集，从而确保安全输血。

血型的正确鉴定是交叉配血的基础，而要确定高效价冷凝集素患者的血型，就要将该因素进行排除，以保证血型鉴定结果的准确性。温度是控制冷凝集素活力的关键点，相关报道 指出温度低于31℃，冷凝集素可作用红细胞抗原，发生红细胞凝集反应，随着温度的升高，冷凝集素的活力消失。感染、肿瘤、自身免疫和血液系统疾病体内冷凝集素升高可能和红细胞抗原性改变有关 。200 例高效价冷凝集素的血样经洗涤和吸收处理后再进行血型鉴定和交叉配血，均获得了准确结果。处理血样的目的就是排除高效价冷凝集素的干扰，进而确保血型鉴定和交叉配血。笔者认为，当检查血型时出现正反定型不符的情况首先要考虑冷凝集素效价过高情况，冷凝集素效价检测可以证实。检验人员在工作中难免遇到该类病例，在进行血型鉴定时要注意：①温度因素，高效价冷凝集素多出现于春冬季节，实验室检测可将样本置于37℃水浴箱后再检测。②高效价冷凝集素导致配血不和，主要是主侧管凝集（多为弱凝集），孵育加温后基本消除，注意鉴别。③正反定型结果不符时，需进一步选择定型试验，聚凝胺法、吸收放散试验等。④输血患者，术前须测定冷凝集素效价，必须确保输入同型红细胞血液，且输入过程中要保温缓缓滴入，以保证输血的安全有效。以往多数报道［9，10］仅选择1 例患者进行报告，本研究扩大了研究例数，进步说明洗涤和吸收处理可有效排除高效价冷凝集素，为该类血型的准确鉴别提供技术保障。

综上所述，高效价冷凝集素会导致血型鉴定困难，影响交叉配血结果，临床工作中应仔细对待分析异常结果，正确分析原因，保证临床检验结果的准确性，以减少医疗纠纷的发生。

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