降糖通便丸质量标准研究*

平佳宜,刘丰林 ,肖文静,张娜娜

(开封市中医院中医药重点实验室，河南 开封 475000)

·药学研究·

降糖通便丸质量标准研究*

平佳宜,刘丰林 ,肖文静,张娜娜

(开封市中医院中医药重点实验室，河南 开封 475000)

目的：建立降糖通便丸的质量标准。方法：用TLC法对方中当归、大黄、甘草进行鉴别；用HPLC法测定白芍中芍药苷的含量。结果：TLC斑点清晰、分离度好。芍药苷在0.16～4.008mg/L(r=0.999 9)范围内与峰面积积分值呈良好线性关系；回收率的平均值为96.74%，RSD为2.49%(n=9)。 结论：该质量标准可用于降糖通便丸的质量控制。

降糖通便丸；质量标准；薄层色谱法；高效液相色谱；芍药苷

降糖通便丸由当归、大黄、白芍、枳实、川芎、甘草、牵牛子、桃仁组成，具有润肠通便、逐瘀降浊的作用，用于治疗糖尿病合并便秘，疗效显著。为了有效控制该产品的质量，笔者对制剂中当归、大黄、甘草进行了TLC鉴别，并采用HPLC法对白芍中芍药苷进行了含量测定。

1 药品、试剂与仪器

降糖通便丸由开封市中医院制剂室提供，批号130215，130219，130225。大黄素对照品(批号110756-200110)、唐古特大黄对照药材(批号120902-201010)、芍药苷对照品(批号110736-201136)、当归对照药材(批号120927-201014)及甘草对照药材(批号120904-201117)，均购自中国药品生物检定所。LC-10A高效液相色谱仪，日本岛津公司产品；ESJ182-4电子天平及JM5002电子天平，均为沈阳龙腾电子有限公司产品。

2 定性鉴别

2.1 当归的TLC鉴别[1]

2.1.1 对照品溶液的制备

称取当归对照药材0.5g，加乙醇10mL，超声提取20min，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1mL使溶解，即得。

2.1.2 供试品溶液的制备

取本品3g，粉碎成细粉，加乙醇15mL，超声15min，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1mL使溶解，即得。

2.1.3 阴性对照品溶液的制备

取缺当归的处方药材，按照拟定的工艺制成片剂，同法制备缺当归阴性对照品溶液。

2.1.4 薄层色谱鉴别

按照2010版《中国药典》一部附录ⅥB项下薄层色谱法。吸取上述3种溶液各10μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷—乙酸乙酯(4∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。结果：供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，缺当归阴性对照品溶液在相对应的位置无相应的荧光斑点检出。见图1。

1.当归对照药材；2，3，4.供试品；5.阴性对照品图1 当归的TLC

2.2 大黄的TLC鉴别

2.2.1 供试品溶液的制备

取本品10g，粉碎成细粉；加甲醇25mL，振摇30min，滤过；取滤液6mL，蒸干；残渣加水10mL溶解，再加盐酸1mL，加热回流30min；冷却后用乙醚振摇提取2次，每次20mL；合并乙醚液，蒸干，残渣加三氯甲烷1mL使溶解，即得。

2.2.2 对照溶液的制备

精密称大黄素对照品，加甲醇制成每毫升含1.1mg的对照品溶液。另取大黄对照药材0.3g，照供试品溶液的制备方法制得大黄对照药材溶液。

2.2.3 阴性对照品溶液的制备

取缺大黄的处方药材，按照拟定工艺制成片剂，同法制备缺大黄阴性对照品溶液。

2.2.4 薄层色谱鉴别

按照2010版《中国药典》一部附录ⅥB项下薄层色谱法。吸取上述4种溶液各5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(30～60 ℃)—甲酸乙酯—甲酸(15∶5∶1)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(254nm)下检视。结果：供试品色谱中，在与对照品和对照药材色谱相应的位上，分别显相同的橙黄色荧光斑点；置氨气中熏蒸后，在日光下检视，斑点变为红色;缺大黄阴性对照无干扰。见图2。

1.大黄素对照品；2.大黄对照药材；3，4，5.供试品；6.阴性对照品图2 降糖通便丸的TLC

2.3 甘草的TLC鉴别

2.3.1 对照药材溶液的制备

取甘草对照药材0.5g，加甲醇超声20min，取上清液，即得。

2.3.2 供试品溶液的制备

取本品8g，粉碎成细粉，加水饱和的正丁醇25mL，超声处理20min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解，即得。

2.3.3 阴性对照品溶液的制备

取缺甘草的处方药材，按照拟定工艺制成片剂，同法制备缺甘草阴性对照品溶液。

2.3.4 薄层色谱鉴别

按照2010版《中国药典》一部附录ⅥB项下薄层色谱法。吸取上述3种溶液各5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(60～90 ℃)—乙酸乙酯—甲酸(20∶8∶0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。结果：供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，缺甘草阴性对照无干扰。见图3。

1.甘草对照药材；2，3，4.供试品；5.阴性对照品图3 甘草的TLC

3 含量测定

3.1 色谱条件

KromasilC18柱(4.6mm×200mm,5μm)，流动相为乙腈-1g/L磷酸溶液(13∶87)，检测波长230nm，流速1mL/min，柱温30 ℃，进样量10μL。

3.2 对照品储备液的制备

精取芍药苷对照品5.01mg，置25mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取1mL，置5mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得质量浓度为40.08mg/L的芍药苷对照品储备液。

3.3 供试品溶液的制备

取本品适量，研细；取约0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中；精密加入甲醇50.0mL，密塞；称定质量，超声处理(功率250W，频率50kHz)30min；取出，放冷，再称定质量，用甲醇补足减失的质量，摇匀；精密吸取续滤液2mL置5mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。

3.4 阴性对照品溶液的制备

取缺白芍的处方药材，按照拟定工艺制成片剂，同法制得缺白芍阴性对照品溶液。

3.5 专属性试验

精密吸取上述3种溶液，按3.1项下色谱条件进行测定。结果：在降糖通便丸供试品色谱中，在与芍药苷对照品相同保留时间处有相对应的色谱峰，而缺白芍阴性对照品溶液无干扰。见图4。

A.对照品；B.供试品；C.阴性对照品图4 高效液相色谱图

3.6 线性关系的考察

精密吸取芍药苷含量为40.08mg/L的对照品贮备液1.0，5.0，10.0，15.0，25.0mL，分别置250mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，备用。分别精密吸取10μL注入高效液相色谱仪中，按3.1项下色谱条件测定。以峰面积积分值(Y)为纵坐标，以进样质量分数X(mg/L)为横坐标，绘制标准曲线，得到芍药苷的回归方程为：Y=2 408 171.25X+5 921.7(r=0.999 9)。结果表明：芍药苷在0.16～4.008mg/L范围内与峰面积呈良好线性关系。

3.7 精密度试验

分别吸同一芍药苷对照品溶液10μL，按3.1项下色谱条件测定，重复进样6次。结果：峰面积的RSD值为1.08%。结果表明：精密度良好。

3.8 稳定性试验

精密取同一供试品溶液10μL，在室温下放置0，1，2，4，6，8，12，16，20，24h，按3.1项下色谱条件测定。结果：芍药苷峰面积的RSD值为1.01%。结果表明：供试品溶液在24h内较为稳定。

3.9 重复性试验

称取同一批号样品6份各0.2g，精密称定，按3.3项下方法制备供试品溶液，按3.1项下色谱条件进行测定。结果：芍药苷含量的RSD值为1.97%。结果表明：该方法重现性良好。

3.10 回收率试验

精密称取已知含量的降糖通便丸(批号130215)0.03g，置具塞锥形瓶中，平行9份，精密加入3.2项下对照品储备液适当体积，再加入甲醇定容至50mL，每个质量分数平行3份，按3.3项下供试品溶液的制备方法制成加样回收供试品溶液。分别精密吸取加样回收供试品溶液10μL，注入高效液相色谱仪中，按上述3.1项下色谱条件，测定峰面积，计算加样回收率。结果见表1。

表1 芍药苷加样回收率试验结果

3.11 样品含量测定

取3批样品(批号分别为130215,130219,130225)，按上述方法测定降糖通便丸中芍药苷的含量，每个批次平行测定3次。结果：3批样品中芍药苷的平均含量分别为0.8715,0.8706,50.8718mg/g。

4 讨 论

本实验对降糖通便丸中主要药物当归、大黄和甘草进行了薄层鉴别，结果显示各薄层斑点显色清晰，阴性对照无干扰，提示所建立的方法专属性强、简单易行，可作为本品中上述药材成分的定性鉴别。在芍药苷的含量测定中，试比较了甲醇-水-冰醋酸(49∶50∶1)、乙腈- 1g/L磷酸溶液(15∶85)和乙腈-水(13∶87)3种流动相[2-4]，结果以乙腈-1g/L磷酸溶液(15∶85)分离效果最好，故选其作为流动相。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典:一部[M].北京:中国医药科技出版社，2010:124.

[2]吴艳丽，孙海涛，史学.HPLC测定荡涤灵颗粒中芍药苷的含量[J].中国现代中药，2006，8(10)：16.

[3]丁广军.HPLC法测定补肾生精丸中芍药苷的含量[J].中国中医现代远程教育，2011，9(13):144.

[4]贾传弟.高效液相色谱法测定败酱草片中芍药苷的含量测定[J].中医药临床杂志，2010，9(13) :144

(编辑 陶 珠)

1001-6910(2015)02-0067-03

R

B

10.3969/j.issn.1001-6910.2015.02.31

开封市科技攻关计划项目(130368)

2014-06-26；

2014-11-21