《PCR检验实验室检查要点指南》概述

北京市医疗器械技术审评中心（100061）郑婕 冯路 赵阳 王辉

（接11月上）

②标本制备区的功能：核酸（RNA、DNA）提取、贮存及加样。配套用品一般应包括：a.2℃～8℃冰箱、-20℃以下冰箱。b.高速离心机。c.混匀器。d.水浴箱或加热模块。e.微量加样器。f.紫外消毒设备。g.生物安全柜。h.消耗品：一次性手套、耐高压处理的离心管和加样器吸头（带滤芯）。i.专用工作服和工作鞋(套)。j.专用办公用品。k.如需处理大分子DNA，应当具有超声波仪。③扩增区的功能：cDNA合成、DNA扩增及检测。配套用品一般应包括：a.核酸扩增仪。b.微量加样器。c.紫外消毒设备。d.消耗品：一次性手套、一次性帽子、耐高压处理的离心管和加样器吸头（带滤芯）。e.专用工作服和工作鞋。f.专用办公用品。④扩增产物分析区的功能：扩增片段的进一步分析测定。视检验方法不同而定，基本配置如下：a.微量加样器。b.紫外消毒设备。c.消耗品：一次性手套、一次性帽子、加样器吸头（带滤芯）。d.专用工作服和工作鞋。e.专用办公用品。⑤设备的维护保养：应建立设备维护保养规程，计量设备应定期检定。例如核酸扩增仪、微量加样器、生物安全柜、离心机应每年进行检定或校准工作。2.3 现场及文件检查工作流程及注意事项 完善的硬件条件下，合理的工作流程和工作制度才能进一步保证PCR检验工作的顺利开展。

①进入各工作区域应当严格按照单一方向进行，即试剂储存和准备区→标本制备区→扩增区→ 扩增产物分析区。②各工作区域必须有明确的标记，不同工作区域内的设备、物品不得混用。③不同工作区域的工作服应加以区分，不得混用（例如可以采用不同颜色）。工作人员离开各工作区域时，不得将本区域工作服带出。④实验室的清洁应当按试剂贮存和准备区→标本制备区→扩增区→扩增产物分析区的方向进行。不同的实验区域应当有其各自的清洁用具并防止交叉污染。实验垃圾属于医疗废物的应按《医疗废物管理条例》相关规定进行处理。⑤工作结束后，应立即对工作区进行清洁及消毒。⑥ 贮存试剂和用于标本制备的消耗品等材料应当直接运送至试剂贮存和准备区，不能经过扩增检测区。试剂盒中的阳性对照品及质控品应当保存在标本处理区。试剂应使用分子生物学级别试剂，使用的纯化水应高压灭菌。质检用于原辅料、半成品、成品检验用的PCR反应试剂应有相应的质量标准及操作程序。⑦为避免样本间的交叉污染，加入待测核酸后，应盖好含反应混合液的反应管。对具有潜在传染危险性的材料，应在生物安全柜内开盖，并有明确的样本处理和灭活程序。⑧应避免气溶胶所致的污染，尽量减少在扩增区内的走动，扩增反应管不得在扩增区打开。⑨扩增产物分析区有可能存在某些可致基因突变和有毒物质如溴化乙锭、丙烯酰胺、甲醛或放射性核素等，应注意实验人员的安全防护。

2.4 现场及文件检查人员培训情况 参与PCR检验工作人员应具备相应的专业知识和技能，包括能熟练操作相关设备，明确整个工作的流程，掌握出现污染情况的处理方法以及实验室质量控制方法和检测结果的解释。

检查员可以通过询问或要求企业以实际操作的方式对其进行评价，也可以通过查阅生产企业的培训记录的适宜性和完整性对其进行综合评价。

3 结语

本《指南》主要以现行医疗器械和卫生行业的法规、标准以及相关文献中对于PCR检验实验室的规定为基础，尤其是以《全国临床检验规程》（第三版）的相关要求为主，部分借鉴了《医疗机构临床基因扩增管理办法》（卫办医政发〔2010〕194号）、《医疗机构临床基因扩增检验实验室工作导则》、《临床诊断中聚合酶链反应（PCR）技术的应用》（WS/T 230-2002）等行业标准的相关要求。在检查要点的制订过程中我们走访了全国多家PCR试剂生产企业，并且我们组织了博奥生物、华大基因、中生北控、宝瑞源、鑫诺美迪、泰格瑞、普林耐特、金菩嘉等多家建设有PCR检测实验室的企业进行了研讨以及相应指标的验证，针对验证结果请教临床检验领域的专家进行了核实与相应指导，还在北京市食品药品监督管理局网站上公开征求了意见，以求能够客观、科学、合理的设定相关要求。

此文件的出台旨在指导北京市医疗器械现场检查人员的PCR检验工作。同时，为PCR类体外诊断试剂产品生产企业在PCR检验实验室的设计建造和管理要求提供参考，促进产品安全有效上市。