纳米氢氧化钙根充材料对变形链球菌的抗菌性研究

刘 明 (吉林省人民医院口腔科，吉林 长春 130000)

根管治疗的目的是将根管内的微生物，尤其是致病菌彻底清除，根管充填材料的抗菌性评价是衡量根管充填效果的重要指标，具有抗菌、抑菌性的根管充填材料能显著提高根管治疗的效果。因此我们合成了纳米氢氧化钙根管充填材料，前期研究已证实其具有良好的根尖封闭性能、组织相容性和生物活性等，本实验通过琼脂扩散法检测纳米氢氧化钙根管充填材料对根管内、尤其是感染根管内变形链球菌的抗菌性，为其作为根管充填材料提供坚实的理论依据。

1 资料与方法

1.1 实验菌种:变形链球菌。

1.2 实验材料的制备

1.2.1 实验模具的制备:a.不锈钢圈50个b.五柱定位器4个 经高温、高压消毒。

1.2.2 制备4个时段的纳米氢氧化钙根管充填材料的圆柱体，即:28天、14天、7天前及即刻。圆柱体的要求为:高为4 mm、外径为5 mm，各10个，放于恒温箱中保持37℃备用。

1.2.3 滤纸卷:10个，宽为4mm、长为38 mm，卷成外径为5 mm，经高温、高压消毒浸泡在蒸馏水中，放于恒温箱中保持37℃备用。

1.3 分组:试验组:纳米氢氧化钙根管充填材料;阴性对照组:浸有蒸馏水的、无菌滤纸。

1.4 实验步骤:①变形链球菌复苏后，接种于沙氏培养皿，用高温、高压消毒后的五柱定位器在培养基上定位、并标记;②将4个时段的纳米氢氧化钙根管充填材料柱体分别放入外周四孔、并做好标记;将制备好的滤纸卷放入中心孔;10组;③将沙氏培养皿置于室温中2 h后，再放入恒温箱中37℃培养72 h;④观察细菌的生长情况:将平板置于无反光、暗色的物体表面，用游标卡尺精密测量抑菌区域大小(抑菌区域是指细菌生长的内缘到材料的外缘之间的最短距离);每个标本测量4个十字固定点的数值，精确度为0.01 mm，取10组的平均值;⑤结果判定:参照药敏实验中抗菌、抑菌区域的测量标准，若抗菌、抑菌区域≧0.5 mm，即有抗菌、抑菌作用，若抑菌区域﹤0.5 mm，则无抗菌、抑菌作用，记录为0［1］。

1.5 统计学分析:用SPSS 10.0统计软件进行数据分析，因数据变量为非正态分布，采用多个样本比较的秩和检验。

2 结果

纳米氢氧化钙根管充填材料对变形链球菌的抗菌区域(mm) 见表1。

表1 纳米氢氧化钙根管充填材料对变形链球菌的抗菌区域(mm)

3 讨论

临床上常用的根管充填材料的主要成分是氢氧化钙和丁香油氧化锌，丁香油氧化锌糊剂在根管充填后会有短暂的炎性反应，引起不适、疼痛、肿胀、使患者不易接受［2］;氢氧化钙糊剂因具有强碱性，能有效地清除感染根管内的病原菌;又因具备良好的组织生物相容性和可吸收性，能诱导牙体组织进行矿化、修复，但稳定性差［3］，因此我们合成了纳米氢氧化钙材料根管充填材料，使其不仅具有氢氧化钙的抗菌、抑菌作用，又兼具了纳米材料的表面能作用，提高材料与病原菌的接触面积、提高材料的韧性和稳定性。根管治疗的目的是清除、抑制感染根管内的病源菌，严密封闭根管，改变残留病原菌的生存条件和增殖能力。因此，在根管充填时使用具有抗菌、抑菌性强的根管充填材料，能更好地消除根管内残留的病原菌，根管充填材料的抗菌性、抑菌性是影响根管充填效果的至关重要指标。

本实验采用琼脂扩散法检测纳米氢氧化钙根管充填材料对变形链球菌的抗菌、抑菌性［2］。琼脂扩散法是检测药物敏感实验的常规方法，已被广泛应用，最大的优点是可以直接观察到与所检测的材料相接触的微生物生长情况，能较客观地表达纳米氢氧化钙根管充填材料的抗菌、抑菌能力。

感染根管中常检测出的病原菌有变形链球菌、粪肠球菌、金黄色葡萄球菌、念珠菌等，其中变形链球菌检出率较高，因此我们选择变形链球菌菌种作为实验对象检测纳米氢氧化钙根充材料的抗菌能力。在本实验中研究的4个时间段上，即刻制备的纳米氢氧化钙根管充填材料的抗菌性、抑菌性最强，随着时间的迁移其抗菌性、抑菌性也逐渐减弱，但其仍具有抗菌、抑菌作用，这一特点完全符合根管充填材料的要求。

实验结果显示纳米氢氧化钙根管充填材料的抗菌性、抑菌性既依赖于氢氧化钙的pH值，又依赖于材料中的纳米粒子所发挥的表面能作用。当材料中pH值保持在一个较高的水平时，即有杀菌、抑菌的活性，即刻制备的纳米氢氧化钙根管充填材料的pH值高达12.2，即使2周后该材料的pH值下降为9.5，但仍具有抗菌、抑菌能力［4］。纳米微粒具有较高的表面能，对微生物具有很强的吸附能力，而且能吸附与细菌代谢相关的酶，可以直接干扰细菌的代谢、控制细菌的生长，却不破坏根管内的微生态环境，纳米微粒在抗菌性、抑菌性方面有独特的作用。本实验结果显示纳米氢氧化钙根管充填材料在即刻制备时段对变形链球菌具有最强的抗菌性、抑菌性，随着时间的延长还具有缓慢持续的抗菌、抑菌作用，兼具了氢氧化钙和纳米材料的抗菌、抑菌性，二者协同作用，提高了抗菌、抑菌效果，纳米氢氧化钙根管充填材料适于作为根管充填材料。

［1］ 李怡源，陈 进，胡 琛.两种根管糊剂用于根管消毒的疗效比较［J］.医学理论与实践，2014，27(15):2037.

［2］ 项 健.三种根管封闭剂抗菌性能的体外对比实验［J］.南通大学学报(医学版)，2013，(5):409.

［3］ 郭佳杰，仇丽鸿.氢氧化钙在根管消毒中的作用机制［J］.中国实用口腔科杂志，2013，6(9):560.

［4］ 丁 虹，孙明磊.氢氧化钙碘仿糊剂在根管消毒中的应用［J］.中国实用医药，2011，8(11):43.