高效液相色谱法测定碳酸钙D3咀嚼片中维生素D3的含量

邢俊波,姜春来，靳守东，曹 红,陈玉敏,水彩红,单婷婷,胡 丹

(总后勤部卫生部药品仪器检验所，北京 100071)

高效液相色谱法测定碳酸钙D3咀嚼片中维生素D3的含量

邢俊波*,姜春来，靳守东，曹 红,陈玉敏,水彩红,单婷婷,胡 丹

(总后勤部卫生部药品仪器检验所，北京 100071)

目的：建立高效液相色谱法测定碳酸钙D3咀嚼片中维生素D3含量的方法。方法：采用高效液相色谱法。以Diamonsil C18(250 mm×4.6mm，5 μm)为色谱柱；流动相为甲醇；流速：1.0 ml·min-1；检测波长：264 nm。结果：维生素D3在4.8～38.4 μg范围内。进样量与峰面积线性关系良好(r=1.0)。平均回收率为：97.82%(RSD=1.15%)。结论：方法简便、快速准确、灵敏度高，重现性好。可作为碳酸钙D3咀嚼片的质量控制方法。

碳酸钙D3咀嚼片；维生素D3；高效液相色谱

维生素D是一种脂溶性维生素，是人体和动物维持生命和健康必不可少的。主要用于调节人体内化学元素的代谢，并且促进其吸收和利用，促进骨骼成长，且可动员、促进钙离子在骨骼上的沉积，从而降低摔倒及骨折的风险。有研究也表明，维生素D在对抗心血管病、不良情绪以及特定类型的癌症方面亦具有积极作用。碳酸钙D3咀嚼片是以碳酸钙和维生素D3等为主要原料制成的非处方药品，主要用于妊娠和哺乳期妇女、更年期妇女、老年人和儿童的钙补充剂，因此有必要对其主要成分进行含量测定，提高其质量可控性。本文参照文献等[1-3]建立了高效液相色谱柱测定碳酸钙D3咀嚼片中维生素D3含量的方法。所建方法简便、快捷，专属性好，可用于其质量控制。

1 仪器与试药

高效液相色谱仪：岛津LC-20AT高效液相色谱仪，SPD-20A紫外检测器，LC-solutin色谱工作站。甲醇为色谱纯，水为重蒸水。维生素D3对照品(100061-201208,中检院提供)。碳酸钙D3咀嚼片(1.2g/片×60片，批号为1303320、1303325、1402130，安士制药有限公司)

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：Diamonsil C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相为甲醇；检测波长：264 nm；流速：1.0 mL·min-1；柱温：40 ℃。

2.2 系统适用性试验

按上述色谱条件进样,得对照品、供试品及空白图谱，见图1，空白无干扰，理论板数按维生素D3峰计算可达9 000以上，且与相邻杂质峰的分离度均能达到要求。

2.3 供试品溶液的制备

取本品20片，研细，取5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50 mL，密塞，超声处理(功率250 W，频率33 kHz)30 min，取出，放冷，滤过，滤液减压浓缩，用甲醇定容至5 mL，用微孔滤膜(0.45 μm)滤过，取续滤液，即得。

2.4 对照品溶液的制备

取维生素D3对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 mL含1 μg的溶液。

2.5 阴性对照液的制备

按处方比例制备缺维生素D3的阴性样品，按含量测定方法操作，结果阴性样品在与维生素D3对照品相同保留时间处，未显示色谱峰。

2.6 线性关系的考察

精密吸取维生素D3对照品溶液(0.048 mg· mL-1) 0.5、1.0、2.0、3.0、4.0 mL分别置于50 mL量瓶中，用乙醇定容，摇匀。以进样量(μg)为横坐标(X)，峰面积为纵坐标(Y)，绘制标准曲线，计算得回归方程为：Y=15 383 592.71X+910.68，r=1.0,线性范围为：4.8～38.4 μg。

2.7 定量限检测

以流动相的基线信噪比为10 ∶1计算，定量限为0.2 ng。

2.8 样品溶液稳定性试验

将待测样品溶液，在室温下贮存，每间隔一定时间进样测定，结果8 h内平均峰面积为228 460，RSD为3.22%。

2.9 重复性试验

取同一批号的碳酸钙D3咀嚼片6份，按含量测定方法平行试验，测得平均含量为0.926 μg·g-1，RSD为0.84%。

2.10 准确度试验(加样回收率试验)

称取已知含量的同一批样品约2.5 g(6份)，精密称定，分别精密加入维生素D3对照品适量，按正文供试品溶液的制备方法操作，测定含量，并计算回收率，结果见表1。

表1 加样回收率试验

2.11 样品测定

分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μl，注入高效液相色谱仪，按上述色谱条件，以外标法计算含量，结果三批样品分别为0.926 μg·g-1、0.928 μg·g-1、0.926 μg·g-1。色谱图见图1。

图1 碳酸钙D3咀嚼片HPLC色谱图

3 讨 论

本研究结果表明，测得值与标示值基本一致，反映本品质量控制较好。

本研究建立了测定碳酸钙D3咀嚼片中维生素D3的高效液相色谱法，前处理直接用溶剂提取，避免了繁杂的柱净化提纯步骤，减少了维生素的损失。另外在测量中对照品溶液尽量现用现配，且使用棕色量瓶，避免光线对维生素D3的影响。结果表明该方法灵敏度高、重现性好、操作简便。

[1] 谭青松，付洁，何瑞国. 高效液相色谱法测定鱼样中的维生素A、维生素D3和维生素E [J]. 动物营养学报,2007，19(5)：636-640.

[2] 舒琬清，杨晓东，曾晓丹. HPLC法测定三种药品中的维生素D2的含量分析[J]. 中国医药指南，2013，11(11):75-76.

[3] 蒋 晔，刘红菊，郝晓花. 4 种脂溶性维生素的非水反相HPLC 测定[J]. 中国医药工业杂志，2005，36(2)：93-94.

Determination of Vitamin D3in Calcium Carbonate and Vitamin D3Chewable Tablets by HPLC

Xing Junbo, Jiang Chunlai，Jin Shoudong, Cao Hong, Chen Yumin, Shui Caihong, Shan Tingting, Hu Dan

(Institute for Drug and Instrument Control of Health Dept., GLD of PLA, Beijing 100071, China)

Objective: To establish a method for the determination of vitamin D3in Calcium Carbonate and Vitamin D3Chewable Tablets by HPLC. Methods: The HPLC system consisted of Diamonsil C18column(250 mm×4.6 mm, 5 μm), acetonitrile-water(23 ∶77); flow rate at 1.0ml·min-1and detected with UV at 264 nm. Results: The method had good linear relationship within the rage 4.8～38.4 μg of vitamin D3(r=1.0). The result (n=6)of the recovery was 97.82%(RSD=1.15%. Conclusion: The method is simple, fast, rapid, accurate and suitable for the determination of preparation.

HPLC；Calcium Carbonate and Vitamin D3Chewable Tablets ;vitamin D3; HPLC

2015-03-18

国家重大科学仪器设备开发专项项目(2012YQ18013208)。

10.3969/j.issn.1006-9690.2015.05.009

R284.1

A

1006-9690(2015)05-0033-02

*通讯作者： 邢俊波。E-mail: junboxing98@sohu.com