根干模拟生长处理对杜仲有效成分含量的影响

吴 茜，肖深根*，张水寒，成 文，陈阳峰，胡 晟

(1 湖南农业大学园艺园林学院, 长沙 410128； 2 湖南省中医药研究院中药研究所, 长沙 410006 )

根干模拟生长处理对杜仲有效成分含量的影响

吴 茜1，肖深根1*，张水寒2，成 文1，陈阳峰1，胡 晟1

(1 湖南农业大学园艺园林学院, 长沙 410128； 2 湖南省中医药研究院中药研究所, 长沙 410006 )

对杜仲的根皮和干皮进行露晒根、裸根茎和干包埋6个月处理，研究模拟生长处理对杜仲皮中有效成分含量的影响。采用高效液相色谱法，测定处理后杜仲主要有效成分桃叶珊瑚苷、京尼平苷酸、绿原酸、松脂醇二葡萄糖苷含量。结果表明：经干包埋处理的杜仲干皮中的桃叶珊瑚苷含量提高了80.0%；经裸根茎和露晒根处理的杜仲根茎和根皮中松脂醇二葡萄糖苷含量分别提高101.5%和921.0%。说明通过模拟生长处理可以改变杜仲皮中有效成分的合成和积累。

杜仲；模拟生长；有效成分

杜仲(EucommiaulmoidesOliver)属杜仲科、杜仲属，是我国独有的一科一属国家珍贵二级保护植物[1]。《中华人民共和国药典》(一部)规定其树皮作为中药杜仲入药[2]，杜仲根皮则没有作为药用部位使用，造成杜仲药用资源的浪费。本研究通过对杜仲的根皮和干皮进行模拟生长处理，探究模拟生长处理对杜仲不同部位有效成分含量变化的影响，以为杜仲根皮综合开发利用提供科学依据。

1 材料与方法

1.1 材料

杜仲样皮采自于湖南农业大学长沙县长安教学基地杜仲林，树径约12 cm，树龄约12年，长势相近。

1.2 试药及仪器

桃叶珊瑚苷对照样品(批号MUST-14072606)、京尼平苷酸对照样品(批号MUST-14032413)、松脂醇二葡萄糖苷对照样品(批号MUST-14052103)均购于成都曼斯特生物科技有限公司；绿原酸对照样品(110753-201314)购于中国药品生物制品检定所。甲醇、乙腈为色谱纯(美国Tedia公司)，水为怡宝纯净水，其他试剂均为分析纯。

Agilent 1200高效液相仪(G1322A泵，G1314B VWD紫外检测器，G1329A自动进样器),依利特hypersil BDS C18(4.6 mm×250 mm,5 μm，批号11026)，Agilent色谱工作站；电子分析天平 AL204(梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司)；KQ5200DE型数控超声波清洗器(昆山市超声仪有限公司)；旋转蒸发仪RE-52AA(上海亚荣生化仪器)。

1.3 方法

按梅花5点法随机选取杜仲植株。设3个处理和3个对照，共40株，分别进行裸根茎、干包埋、露晒根及各自的对照处理。6个月(2014年1月-2014年7月)后，剥皮采样。

1.3.1 裸根茎处理

以杜仲植株为中心，50 cm为半径，由内向外将土层外推，直至露出杜仲的根茎部分，裸露部分离地为15～20 cm。对照为形态、长势相似的未露根茎的异株杜仲。样本量均为6株，处理取样部位为裸露部位的根茎皮，对照为相应部位的根茎皮。

1.3.2 干包埋处理

将杜仲植株在离地0.5 m以下采用土壤立式包埋，包裹土壤厚度约为10 cm，外加硬纸板加固。对照为形态、长势相似的离地0.5 m以下的异株杜仲。样本量均为8株，处理取样部位为包埋处理部位的干皮，对照为相应部位的干皮。

1.3.3 露晒根处理

将杜仲植株的向阳侧土壤呈辐射状挖开，深约0.5 m，露出其发达侧根，将侧根上土壤用软刷刷净。对照为形态、长势相似的土壤中的异株杜仲。样本量均为6株，处理取样部位为裸露的根皮，对照为相应部位的根皮。

1.3.4 采样

杜仲剥皮技术参见文献[3] 。

1.4 样品制备

1.4.1 主要有效成分对照品溶液的制备

精密称取桃叶珊瑚苷、京尼平苷酸、绿原酸、松脂醇二葡萄糖苷，置于10 mL的容量瓶中，加入75%的甲醇溶解并稀释，摇匀，配制成质量浓度为0.26 mg/mL的桃叶珊瑚苷, 0.20 mg/mL的京尼平苷酸，0.025 mg/mL的绿原酸，0.0105 mg/mL的松脂醇二葡萄糖苷的混合储备液，冷藏保存，备用。

1.4.2 杜仲皮样品溶液的制备

制备方法参见文献[4]，其中：精密称取杜仲粉末1.0 g，置具塞锥形瓶中，加75%的甲醇40 mL，称重，超声提取40 min。

1.5 色谱条件

色谱条件参见文献 [5]。其中，流动相：乙腈-0.1%磷酸水；流速：1.0 mL/min；进样量：10 μL。

1.6 方法学检查

试验对液相色谱条件进行了方法学检查：线性关系考察、精密度考察、重复性考察、稳定性考察和加样回收率考察。

1.7 样品的测定

经露晒根、干包埋、裸根茎及各自对照处理，采样阴干后制备样品溶液、并进行含量测定。

1.8 数据处理

数据采用Spss软件进行分析。

2 结果与分析

2.1 方法学考察

2.1.1 线性关系考察

从表1可以看出，线性方程相关系数范围在0.9905～0.9993之间，说明线性关系良好，试验方法符合检验要求。

表1 线性方程和检测范围

2.1.2 重复性、稳定性、精密度及加样回收率考察

从表2可看出，4个考察试验结果的RSD(relative standard deviation，相对标准偏差)均<3%，表明试验重复性、稳定性、精密度和加样回收率均良好，符合检验要求。

表2 试验精密度、稳定性、重复性及加样回收率的RSD (%)

2.2 干包埋处理对杜仲干皮有效成分含量的影响

由表3可以看出，经干包埋处理后，杜仲干皮中桃叶珊瑚苷的含量提高了80.0%，具有显著性差异；松脂醇二葡萄糖苷的含量下降了39.0%，具有显著性差异；而京尼平苷酸和绿原酸的含量变化不具有统计学意义。

表3 干包埋处理杜仲干皮有效成分的平均含量(mg/mL)及标准差

注：*表示处理间有显著性差异，**表示处理间有极显著性差异。下同。

2.3 裸根茎处理对杜仲根茎皮有效成分含量的影响

经裸根茎处理后，杜仲根茎部位皮的京尼平苷酸和松脂醇二葡萄糖苷含量分别提高了94.6%和101.5%，绿原酸的含量下降了39.6%，均具有显著性差异；而桃叶珊瑚苷含量变化无统计学意义(表4)。

表4 裸根茎处理杜仲根茎皮有效成分的平均含量(mg/mL)及标准差

2.4 露晒根处理对杜仲根皮有效成分含量的影响

经露晒根处理后，杜仲根皮中的京尼平苷酸和绿原酸含量分别下降了32%和49%，具有显著性差异；松脂醇二葡萄糖苷含量则提高了921%，具有极显著性差异；而桃叶珊瑚苷的含量变化无统计学意义(表5)。

表5 露晒根处理杜仲根皮有效成分的平均含量(mg/mL)及标准差

2.5 不同处理间有效成分含量比较

药典中将杜仲干皮作为药用杜仲部位，因此将3种模拟生长处理后的干皮、根茎皮及根皮与药典规定的药用部位干皮中有效成分含量进行对比，比较其有效成分含量差异。

干包埋、裸根茎和露晒根处理与对照组(即正常生长的杜仲干皮)有效成分的比较结果见表6。可以看出，经3种模拟生长处理后杜仲干皮和根皮中桃叶珊瑚苷的含量比对照组要高且具有显著性差异；裸根茎和露晒根处理的京尼平苷酸含量与对照的含量差异具有显著性；干包埋及裸根茎处理的绿原酸的含量与对照组相比无显著性差异；松脂醇二葡萄糖苷含量经干包埋和露晒根处理后与对照相比具有显著性差异。说明经处理后的杜仲干、根皮的有效成分含量与正常生长的杜仲干皮的有效成分含量差异明显。

表6 3种处理间杜仲有效成分的平均含量(mg/mL)及标准差

3 结论与讨论

本试验比较了杜仲的3个部位(根皮、干皮和根茎皮)及对照组的有效成分含量，发现未经处理的杜仲根皮中桃叶珊瑚苷、京尼平苷酸和绿原酸的含量均为最高，但指标成分松脂醇二葡萄糖苷的含量很低；松脂醇二葡萄糖苷在干皮中含量最高。经处理(露晒根、干包埋和裸根茎)后，杜仲不同部位的有效成分含量发生了变化，桃叶珊瑚苷、京尼平苷酸含量最高的部位均变为裸根茎处理，绿原酸含量最高部位依旧为未处理杜仲根皮。但杜仲根皮和根茎皮中高含量的京尼平苷酸有预防性功能低下、抗癌抗氧化等作用，桃叶珊瑚苷、绿原酸具有较强的镇痛、抗菌消炎作用[6～8]，说明杜仲根皮具有药用价值。杜仲皮中有效成分含量的变化是否与处理时间的长短或树龄大小有关还需要进一步探究。

试验结果表明，模拟生长处理可改变杜仲皮中有效成分的合成和积累，说明可通过调节生长过程探讨使杜仲根皮达到药用标准的可能性，为杜仲资源综合利用提供依据。

[1] 中国杜仲学会. 中国杜仲研究文集[M]. 西安：陕西科学技术出版社，1986.77.

[2] 国家药典委员会. 中华人民共和国药典(一部)[M].北京：化学工业出版社，2005.114.

[3] 李红运.杜仲剥皮技术[J]. 河南林业，2001(3)：21.

[4] 冯薇薇，郭方遒，范 岚. 多波长高效液相色谱法同时测定杜仲中三类有效成分[J]. 现代中药研究与实践，2013，27(2)：13-16.

[5] 梁雪娟.杜仲皮有效成分与其内生真菌的相关性研究[D].长沙：湖南中医药大学硕士学位论文，2014.

[6] 李芳东，杜红岩. 杜仲[M]. 北京：中国中医药出版社，2001.277.

[7] 戚友维. 杜仲化学成分研究进展[J].中草药，1989(4)：88.

[8] 杜红岩. 杜仲活性成分与药理研究的新进展[J].经济林研究，2003，21(2)：58-61.

Effects of Simulation Growth Model on Components ofEucommiaulmoidesOliver Stem and Root Barks

WU Xi1, XIAO Shen-gen1*, ZHANG Shui-han2, CHENG Wen1, CHEN Yang-feng1, HU Sheng1

(1 College of Horticulture and Landscape, Hunan Agricultural University, Changsha, Hunan 410128,China; 2 Institute of Chinese Materia Medica, Hunan Academy of Chinese Medicine, Changsha ,Hunan 410006, China)

In order to study the effect of simulation growth model on the content variation of the active constituents of theeucommiaulmoidesoliver stem and its root barks. Three different simulation growth methods were carried out: Treatment 1.revealing the root bark; treatment 2.uncovering the connection of root and stem; treatment 3.covering the stem with soil and the control group, 6 months later the samples were collected respectively. HPLC was used to analyze the content of effective ingredients aucubin, geniposidic acid, chlorogenic acid and pinoresinol diglucoside. The results showed that the content of the aucubin increased by 80% after treated with the 3rd processing method，while the pinoresinol diglucoside increased by 101.5% and 921.0% after treated with the 1st and 2nd simulation of growth methods，dramatically，which meaned by simulating growth methods could change the synthesis and accumulation of the effective ingredients in theEucommiaulmoidesoliver stem and its root barks.

Eucommiaulmoidesoliver; simulation of growth treatment; effective ingredient

2014-12-24

吴 茜(1989-)，女，湖南吉首市人，硕士研究生， Email：wuxidwb@sina.com。

* 通信作者：肖深根，博士，教授，Email：2395265030@qq.com。

S567.1+9

A

1001-5280(2015)02-0173-04

10.3969/j.issn.1001-5280.2015.02.15