香砂六君子汤治疗脾虚腹泻型肠易激综合征的药效学研究*

祝 捷 王 平 彭 腾 贾 波 黎豫川 禹亚杰 尚宁宁

成都中医药大学(成都 610075)

香砂六君子汤治疗脾虚腹泻型肠易激综合征的药效学研究*

祝 捷 王 平 彭 腾△贾 波 黎豫川 禹亚杰 尚宁宁

成都中医药大学(成都 610075)

目的：观察香砂六君子水煎液以及不同提取部位对脾虚腹泻型肠易激综合征的治疗作用。方法：采用大黄泻下法复制小鼠脾虚腹泻模型，观察受试药物对小鼠排便和肠推进率的影响;采用番泻叶及胶带束缚法复制大鼠脾虚泄泻型肠易激综合征模型，观察受试药物对大鼠肠道敏感性、肠推进率及血清、结肠组织中5-羟色胺量的影响。结果：香砂六君子汤对脾虚腹泻型肠易激综合征有改善作用，水煎液及不同提取部位对改善脾虚腹泻型肠易激综合征症状的不同表现有不同的效果。结论：香砂六君子汤对脾虚腹泻型肠易激综合征有明显的改善作用，其中香砂六君子汤乙酸乙酯部位、正丁醇部位主要通过改善腹泻型肠易激综合征大鼠肠道敏感性来发挥治疗作用；水溶性部位、水煎液部位具有明显的止泻作用，主要通过改善肠道运动功能异常从而达到治疗目的。

肠易激综合征(Irritable Bowel Syndrome，IBS)是一种以平滑肌功能紊乱为主要表现的原发性全身性慢性疾病，常有腹痛、腹胀、腹泻、便秘、肠鸣或腹泻与便秘交替等症状，并伴有明显的全身性神经官能症状。IBS依据粪便性状分为四个亚型：便秘型、腹泻型、混合型和不定型,我国以腹泻型较为多见[1]。IBS的患病率在亚太地区正在增加，特别是在发展中国家，目前报道的患病率北京为0.82%， 中国南方为5.7%，香港为6.6%，新加坡为8.6%，巴基斯坦为14%，台湾为22.1%，中国的研究发现使用罗马III标准诊断门诊患者IBS的患病率为15.9%[2]。IBS发病机理至今尚不明了，目前研究认为该病因多与精神因素、神经内分泌改变及肠道菌群失调等有关。

IBS属于中医“泄泻”、“腹痛”、“郁证”等范畴[3]。该病的主要病位在肝脾，亦涉及肾。脾胃为气机枢纽，寒热虚实皆可致其气机升降出入失调。IBS病程较长，初期发病多实，久病多虚，多呈本虚标实，虚实夹杂之特点，其中脾胃气虚，湿阻气滞是常见病机之一。不论是感受寒湿暑热之邪,直中脾胃,还是饮食不节,损伤脾胃,或是久病脾虚运不健,最终均导致脾胃气虚，气机不畅，水湿停滞而呈脾虚气滞湿阻之证，香砂六君子汤(《古今名医方论》卷一)功能益气健脾、燥湿行气，是治此证之常用方[4]。本实验通过观察香砂六君子汤对模型动物胃肠功能的影响，为临床应用该方治疗脾虚腹泻型IBS提供实验依据。

1 材料与方法 1.1 材 料 1.1.1实验动物:健康SD大鼠，SPF级，122只，雌性56只，雄性66只，体质量200±20g，健康KM种小鼠，清洁级，350只，雌雄各半，体质量20±2g，以上动物均由成都达硕生物科技有限公司提供，生产许可证号：SCXK(川)2008-24。

1.1.2试剂与药材:5-羟色胺(5-HT)ELISA试剂盒(美国R&D公司)；乌拉坦(德国进口，广州工业有限公司分装)；0.9%生理盐水(四川科伦药业股份有限公司)；墨汁；活性炭；醋酸。香砂六君子汤由红参、白术、茯苓、半夏、陈皮、炙甘草、砂仁、川木香共八味药组成；临床用法为水煎液口服，成用剂量为27g生药/60kg体重/d；香砂六君子汤水煎液、水溶性部位、正丁醇部位、乙酸乙酯部位均由成都中医药大学中药化学教研室提供。大黄、番泻叶均购于温江华康大药房。

1.1.3 仪器:一次性无菌导尿管(湛江市事达实业有限公司型号:双腔气囊标准型, 规格：12Fr 5-10mL 批号：201305E1)；5mL,手动均浆器；H2050R台式冷冻离心机(湘仪离心机仪器有限公司)；DH3600A电热恒温培养箱(天津市通利信达仪器厂)；MK3酶标仪(美国热电)；MK2洗板机(芬兰雷勃)；电子天平(北京赛多利斯有限公司)；KQ-700E型超声波清洗机(昆山市超声仪器有限公司)；微量移液器(热电上海公司)。

1.1.4供试药物制备:大黄水煎液的制备：称取大黄饮片200g，加纯净水2000mL，浸泡30min，武火煮沸，文火煎煮30min，过滤，将滤液浓缩至200mL，即得大黄药物浓度为1g/mL的大黄水煎液供试品。于4℃冰箱冷藏保存，给药前于37℃温育十分钟后充分摇匀。番泻叶水煎液的制备：称取番泻叶300g，加90℃左右纯净水1500mL，浸泡2h，武火煮沸，文火煎煮10min，过滤，将滤液浓缩至1000mL，即得药物浓度为0.3g/mL的番泻叶水煎液供试品。于4℃冰箱冷藏保存，给药前于37℃温育十分钟后充分摇匀。

1.2 方 法 1.2.1脾虚腹泻动物模型:1.2.1.1实验分组及给药方法:本研究参照前期实验采用大黄泻下法复制小鼠脾虚腹泻模型[5]。小鼠适应性正常饲养2d，随机分为对照组、模型组及香砂六君子汤水煎液，水溶性部位，正丁醇部位和乙酸乙酯部位。除空白对照组外，灌胃给予浓度为1g /mL的大黄水煎液，给药体积0.5mL/只，连续8d；空白对照组给予同体积蒸馏水。最后一次灌胃大黄水煎液后1h，记录体重及稀便率。造模结束后第二天早上9点开始，各组连续灌胃给药7天，空白对照组与模型组给予同体积蒸馏水，本研究中小鼠给药体积均为0.2mL/10g。

1.2.1.2标本采集及处理:各组动物给药第6d，在给药后1小时再次记录稀便率，稀便率=(稀便次数/总便次数)×100%。记录完毕后禁食不禁水12h，最后一次给药前记录各组小鼠体重，最后一次给药后30 min灌胃10%碳末(2%CMC-Na配制成混悬液，0.5mL/只)，20min后颈锥脱臼处死小鼠，迅速解剖取出肠道，用直尺记录幽门至回盲部总长度和墨汁在肠道中推进的距离(幽门到墨汁推进前端的距离)。

1.2.1.3指标检测方法:计算推进率，推进率=推进距离/幽门至回盲部总长度×100%。同时取出胸腺与脾脏，称重，计算脏器系数，脏器系数=(脏器质量/终末体质量)×100%。

1.2.2 脾虚泄泻型肠易激综合征动物模型:1.2.2.1实验分组及给药方法: 本研究参照前期实验采用番泻叶及胶带束缚法复制大鼠脾虚泄泻型肠易激综合征模型[5]。健康大鼠随机分为正常对照组、模型组、香砂六君子汤水煎液，水溶性部位，正丁醇部位和乙酸乙酯部位。分别记录每只动物体质量，适应性正常饲养。实验开始时，第1周、第2周灌胃番泻叶水煎液(0.3g生药/mL,20mL/kg)，灌服完后即用宽棉线束缚前肩、前上肢、胸部，限制前上肢搔抓头面部，但不限制其活动，造成一定的应激刺激，束缚时间2 h/d；第3周：仅用宽棉线束缚前肩、前上肢、胸部，限制前上肢搔抓头面部，但不限制其活动，造成一定的应激刺激，束缚时间2 h/d。从造模第三周开始，解除束缚后即灌胃给予相应药物，正常对照组和模型组给予蒸馏水，连续7d，本研究中大鼠给药体积为1mL/100g。

1.2.2.2标本采集及处理:造模2周后，记录各组动物体重和肠道敏感性。重增长率=(给药后体重-造模后体重)/造模后体重×100%。肠道敏感性测定方法：测试前1d大鼠禁食不禁水24h，将导尿管沿大鼠肛门插入，深度约5cm，用棉线把导尿管和大鼠尾巴根部绑在一起，15min后待大鼠适应环境，用2.5mL注射器逐渐向导尿管内推注蒸馏水扩张肠道，分别记录引起大鼠背部拱起所需推注蒸馏水的体积阈值。5min后对每一阈值都重复进行测定，共测定3次，数据取平均值。最后一次给药前，再按上述方法记录每只动物的体质量和肠道敏感性。按1.2.1项下测推进率。股动脉血静置30min，3000 rpm离心10 min，取血清100μL，-20 ℃冰箱保存待测5-HT；剖取结肠组织，4℃生理盐水冲洗干净，称取0.5g，用生理盐水制成10%匀浆，3000rpm离心10min，取上清100μL，-20℃冰箱保存待测5-HT。

1.2.2.3指标检测方法:血清及结肠组织匀浆中5-HT的测定均采用 ELISA法，严格按照试剂盒测定方法测定。

2 结 果 2.1 对大黄致小鼠脾虚腹泻的健脾止泻作用 2.1.1对小鼠体重的影响:造模前，各组动物间体重无明显差异；连续灌胃8d大黄水煎液，空白对照组小鼠体重呈正常增长趋势；与空白对照组比较，其余各组小鼠体重均增长缓慢，甚至出现负增长，造模结束后各组体重均低于正常对照组；给药7天后，与模型组比较，各给药组动物体重增长均无明显差异。

2.1.2 对小鼠胸腺和脾腺指数的影响:大黄所致的小鼠脾虚腹泻模型，自行恢复一周后，模型组胸腺指数和脾脏指数与空白对照组无明显差异。给药后，与模型组相比较，各药物组对胸腺指数及脾脏指数均无明显影响。

2.1.3 对小鼠稀便率及肠推进的影响:造模后,与空白对照组比较，模型组小鼠稀便率明显增加(P<0.01)，说明采用1g/mL大黄水煎液连续灌胃8天制备小鼠脾虚腹泻模型是成功的；给药后，与模型组比较，D高剂量组、D中剂量组、C高剂量组能明显降低小鼠稀便率(P<0.01)，其余各受试药物组脾虚腹泻小鼠稀便率无明显影响；与造模后(给药前)比较，给药物组稀便率均有所降低，说明停止给与大黄后小鼠腹泻有自行恢复的趋势。与空白对照组比较，模型组小鼠肠推进距离变长，推进率明显增加，可能是脾虚腹泻所致；D高剂量组、D中剂量组均能明显降低脾虚小鼠的肠推进距离和推进率(P<0.05)，改善肠道的运动功能。结果见表1。

表1 香砂六君子汤提取部位对小鼠健脾止泻的影响(±s，n=10)

注：ABCD分别代表香砂六君子汤乙酸乙酯部位、正丁醇部位、水溶性部位、水煎液(下同)；与空白对照组比较,△P<0.05,▲P<0.01(下同)；与模型组比较,◇P<0.05,◆P<0.01(下同)；与本组造模后(给药前)比较,□P<0.05,■P<0.01(下同)

2.2 对脾虚泄泻型肠易激综合征大鼠的影响

2.2.1 对大鼠体重的影响:造模前各组动物间体重无明显差异。造模2周后，对照组大鼠体重正常增长，模型组及各给药组大鼠体重均显著下降。给药1周后，与模型组比较，B高剂量组体重增长率显著增加；B 中剂量组体重增长率有增加趋势；与本组造模后(给药前)比较，给药后除D高剂量组、D中剂量组，各组体重均有所增加，D组体重呈负增长。B能明显促进大鼠体重的恢复，A、C部位对大鼠体重无明显影响，D部位大鼠体重有继续减轻趋势。

2.2.2对大鼠肠道敏感性及肠推进变化的影响:造模前，各组动物肠道敏感性无明显差异。造模2周后，各组动物肠道敏感性均高于空白组及本组造模前水平，但均无显著性差异(P>0.05)。给药后，与模型组比较，A高剂量组、A中剂量组、B中剂量组肠道敏感性体积阈值明显增加，肠道敏感性降低(P<0.05)；与本组给药前比较，A高剂量组、A中剂量组、B高剂量组、B中剂量组肠道敏感性体积阈值明显增加，肠道敏感性降低(P<0.05)。其余各给药组对肠道敏感性阈值无明显影响。与空白对照组相比较，模型组大鼠肠推进距离明显变长，推进率明显增加(P<0. 05)，可能是脾虚腹泻所致，与大黄致小鼠脾虚腹泻模型实验结果一致；给药后，与模型组相比，D 高剂量组、D 中剂量组肠推进率明显降低(P<0. 01)，其余各药物组对肠推进率均无明显影响。结果见表2。

表2 香砂六君子汤提取部位对IBS大鼠肠道敏感性、肠推进的影响(±s,n=8)

2.2.3对大鼠血清及结肠5-HT水平的影响:与空白对照组比较，模型组血清5-HT含量明显升高(P>0.05)；给药后，与模型组比较，D高剂量组血清5-HT含量明显降低(P<0.05)，其余各给药组血清5-HT含量均无明显改变。与空白对照组比较，模型组结肠组织5-HT含量明显升高(P<0.05)；给药后，与模型组比较，各给药组结肠组织5-HT含量均无明显改变，但B给药组有降低结肠组织5-HT的趋势。结果见表3。

表3 香砂六君子汤对IBS大鼠血清及结肠组织5-HT水平的影响(±s,n=8)

3 讨 论 香砂六君子汤为治脾胃气虚，湿阻气滞之IBS的常用方。研究表明，香砂六君子汤总体具有健脾止泻的作用。对脾虚腹泻型IBS小鼠的研究发现，水煎液高剂量与中剂量以及水溶性部位高剂量均能降低IBS小鼠的稀便率；水煎液高剂量与中剂量均能降低IBS小鼠的肠推进距离和推进率，具有一定的止泻作用。对脾虚腹泻型IBS大鼠的研究发现，正丁醇部位高剂量能使IBS大鼠体重增加，乙酸乙酯部位高剂量与中剂量以及正丁醇部位中剂量均可以使IBS大鼠的肠敏感性降低，水煎液高剂量与中剂量能使大鼠的肠推进率降低，改善IBS大鼠的肠道功能异常。

5-HT是广泛存在于中枢神经系统和胃肠道的一种单胺类神经递质，能够在外周参与胃肠动力调节，其在肠易激综合征发病机制中的作用备受关注。本实验研究了风芍六君子汤对IBS大鼠血清及结肠的5-HT水平的影响做了一定的研究。研究发现水煎液部位可以使血清5-HT含量明显降低；正丁醇部位有降低结肠组织5-HT的趋势。

综上所述，香砂六君子汤可能通过止泻，降低肠道敏感性和肠推进率，降低血清及结肠中5-HT的水平等多个环节的作用发挥治疗肠易激综合征的作用。结合前期香砂六君子汤化学成分研究发现香砂六君子汤的化学成分主要有黄酮类、内酯类、香豆素类等，黄酮类对消化系统具有一定的治疗作用这可能是香砂六君子汤治疗脾虚腹泻型肠易激综合征的物质基础。这对于明确香砂六君子汤的治疗机制以及研发治疗肠易激综合征新型中药具有重要意义。

[1] 邬美萍.中药治疗腹泻型肠易激综合征的临床疗效观察[C].现代消化及介入诊疗,2007,12(2):110-112.

[2] Eamonn Quigley,Michael Fried,K.A. Gwee,so and on. WGO Global Guideline IBS[M].China: World Gastroenterology Organization,2009:3.

[3] 靳 娅,余国扬.“肠康冲剂”治疗肠易激综合征60例临床观察[J].江苏中医学报,2010,21(8):26.

[4] 戴 云.肠易激综合征辨治举隅[J].广西中医药,2007,30(1):47.

[5] 李柏群,陈绍成,彭 腾,等.风芍六君子汤治疗脾虚腹泻型肠易激综合征的药效学研究[J].中成药,2012,34(11):2229-2233.

(收稿2015-01-11；修回2015-02-26)

Pharmacodynamics of Xiangsha Liujunzi decoction on spleen deficiency diarrhea type lrritable bowel syndrome

Chengdu University of Traditional Chinese Medicine

(Chengdu 610075) Zhu Jie Wang Ping Peng Teng et al

Objective :To observe the effect of Xiang Sha Liu Jun Zi decoction and its different extract on spleen deficiency diarrhea type irritable bowel syndrome.Methods:The rat model of spleen deficiency diarrhea was established by using rhubarb,and observe the effect of tested decoction that alvine pushing rate of mice and its defecation.Senna and belt bound was used to cope the rat model of spleen deficiency diarrhea type lrritable bowel syndrome,and explore bowel sensitivity,alvine pushing rate,the content of 5-HT in serum and colon tissue. Results:Xiang Sha Liu Jun Zi decoction and its extract may improve the symptoms of spleen deficiency diarrhea type Irritable bowel syndrome. Conclusions:The ethyl acetate extract and the n-butanol extract of Xiang Sha Liu Jun Zi decoction may regulate the bowel sensitivity.The water-soluble extract and decoction may anti diarrhea obviously.

Irritable bowel syndrome/ traditional Chinese medicine therapy Xiang Sha Liu Jun Zi Tang/therapeutic uses

*四川省教育厅重点课题(10ZA095)

肠易激综合佂/中医药疗法 香砂六君子汤/治疗应用

R574

A

10.3969/j.issn.1000-7369.2015.05.051

成都市科技局科技攻关项目(12GGYB346SW-001)

成都中医药大学校基金重点课题(ZRZD201101)

△通讯作者