HE4在子宫内膜癌患者血清中的表达及其与各临床病理参数的关系

杨胜晗，王蕾香，韩春薇

近年来，子宫内膜癌的发病率逐渐上升，严重威胁着妇女的健康和生命。尽管大部分子宫内膜癌患者早期可通过组织活检而被确诊，但是仍有许多患者，临床症状不明显，就诊时已是晚期。目前子宫内膜癌最常用的诊断方法为诊断性刮宫，但这种方法对疾病的临床分期意义不大，难以指导治疗和预测预后，肿瘤标志物的检测可以弥补这一缺陷。人附睾蛋白4(human epididymis gene product 4，HE4)基因的cDNA 最早由Kirchhoff 等［1］从人的附睾中克隆得到，可编码HE4 蛋白。目前有许多研究已经证明HE4 与人类卵巢腺癌的发生、发展及预后密切相关［2-5］，近来研究［6-9］表明HE4 在子宫内膜癌中高表达。本实验应用化学发光微粒子免疫分析法(CMIA)检测正常子宫内膜、子宫内膜不典型增生、子宫内膜癌患者血清HE4 表达情况，分析血清HE4 水平与子宫内膜癌的病理类型、临床分期、病理学分级、肌层浸润深度及盆腔淋巴结转移情况的关系，探讨HE4 在子宫内膜癌发生发展中的作用，为子宫内膜癌的早期诊断、指导临床治疗及预测预后寻找新的分子生物学依据。

1 资料与方法

1.1 资料 选取2010年3月－2010年12月在蚌埠医学院第一附属医院妇科肿瘤科及三院妇产科住院手术治疗的15例正常子宫内膜患者，10 例子宫内膜不典型增生患者，40 例子宫内膜癌患者。正常子宫内膜组:年龄32～54 岁，共15例。其中子宫肌瘤7 例、子宫内膜息肉2 例、卵巢浆液性囊腺瘤3 例、功能失调性子宫出血3 例。子宫内膜不典型增生组:年龄35～57 岁，共10 例。其中轻度子宫内膜不典型增生3例，中度及重度子宫内膜不典型增生7 例。子宫内膜癌组:年龄33～72 岁，共40 例。按国际妇产科联盟(FIGO)手术病理－分期:Ⅰ期18 例，Ⅱ期9 例，Ⅲ期8 例，Ⅳ期5 例;组织学分级:高分化23 例，中分化10 例，低分化7 例;肌层浸润深度≤1/2 者28 例，肌层浸润深度＞1/2 者12 例;术后证实无淋巴结转移者21 例，有淋巴转移者8 例，未做淋巴结清扫者11例;子宫内膜样腺癌32 例，透明细胞癌3 例，浆液性乳头状癌3 例，腺鳞癌2 例。

1.2 方法(1)主要仪器和试剂:①化学发光微粒子免疫分析仪ARCHITECT－i2000(美国雅培公司生产);②HE4 试剂盒(美国雅培公司生产);③HE4 定标液(美国雅培公司生产);④HE4 标准品(美国雅培公司生产，批号:88K00909)。(2)实验步骤:术前抽取患者肘静脉血3 ml，置于未加抗凝剂的试管中，无需处理，立即送检。实验开始前，将标本放入标记编号的玻璃试管内，3 000 转/min，离心5 min，将吖啶酯类专利衍生物示踪剂和HE4 抗体包被的类磁微粒子放入ARCHITECT－i2000 化学发光微粒子免疫分析仪试剂仓相应位置，将待测标本排序后放入反应仓，i2000SR 全自动免疫发光检测仪自动检测HE4 浓度。(3)质量控制:每批做高、中、低值质量控制。

1.3 统计学方法 所有数据采用SPSS17.0 软件处理，计量资料用±s 的形式表示，因组间方差不齐，组间均数比较采用秩和检验。以P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 HE4 在正常子宫内膜、子宫内膜不典型增生、子宫内膜癌患者血清中表达情况 正常子宫内膜组血清HE4 范围为(27.7～84.0)pmol/L，均值为(40.3 ±16.2)pmol/L;子宫内膜不典型增生组血清HE4 范围为(41～83)pmol/L，均值为(54.7 ±18.5)pmol/L;子宫内膜癌组血清HE4 范围为(33.9～1040.9)pmol/L，均值为(120.2 ±195.6)pmol/L。子宫内膜癌组HE4 水平较正常子宫内膜组高，差异具有显著性(Z=－3.444，P=0.01);子宫内膜癌组血清HE4 水平较子宫内膜不典型增生组高，差异无统计学意义(Z =－0.845，P =0.398);子宫内膜不典型增生组血清HE4 水平较正常子宫内膜组高，差异无统计学意义(Z=－1.859，P=0.063)。见表1。

2.2 血清HE4 水平与子宫内膜癌患者各临床病理参数的关系 血清HE4 水平与子宫内膜癌的年龄，组织分级及病理类型无关(Z =－1.671，P =0.095＞0.05;Z =－1.569，P =0.117＞0.05;Z=－1.155，P =0.248＞0.05)，而与手术－病理分期，肌层浸润深度及淋巴结转移密切相关(P＜0.05)。Ⅰ－Ⅱ期患者血清HE4 的均值为(67.76 ±57.37)pmol/L，Ⅲ－Ⅳ期患者血清HE4 的均值为(310.14 ±362.06)pmol/L，Ⅰ－Ⅱ期患者血清HE4 水平明显低于Ⅲ－ Ⅳ期患者(Z =－2.583，P=0.01＜0.05);深肌层浸润的患者血清HE4 的均值为(335.35 ±355.15)pmol/L，浅肌层浸润的患者血清HE4 的均值为(62.09 ±30.02)pmol/L，深肌层浸润的患者血清HE4水平明显高于浅肌层浸润的患者(Z =－2.500，P =0.012＜0.05)。有淋巴结转移的患者血清HE4 的均值为(437.36 ±413.90)pmol/L，无淋巴结转移的患者血清HE4 的均值为(74.36 ±63.94)pmol/L，有淋巴结转移的患者血清HE4 水平明显高于无淋巴结转移的患者(Z =－3.088，P =0.002＜0.05)。见表2。

表1 3 组患者血清HE4 水平(pmol/L，±s)

表1 3 组患者血清HE4 水平(pmol/L，±s)

组别例数HE4HE4范围正常子宫内膜组1540.32 ±16.1627.7～84.0子宫内膜不典型增生组 1054.73 ±18.4941.1～83.2子宫内膜癌组40120.16 ±195.6633.9～1040.9

表2 血清HE4 水平与子宫内膜癌患者各临床病理参数的关系(pmol/L，±s)

表2 血清HE4 水平与子宫内膜癌患者各临床病理参数的关系(pmol/L，±s)

临床病理参数例数HE4 水平Z 值P值年龄(岁):≤501156.57 ±26.43－1.671 0.095＞5029150.69 ±232.61手术－病理分期:Ⅰ－Ⅱ2767.76 ±57.37－2.583 0.010Ⅲ－Ⅳ13310.14 ±362.06组织学分级:高23118.75 ±162.29－1.569 0.117中低17125.46 ±230.00肌层浸润:≤1/22862.09 ±30.02－2.500 0.012＞1/212335.35 ±355.15淋巴转移:有8437.36 ±413.90－3.088 0.002无2174.36 ±63.94病理类型:子宫内膜样腺癌32113.17 ±187.99－1.155 0.248其他类型8150.16 ±239.97

3 讨论

子宫内膜癌是女性生殖系统常见的恶性肿瘤之一，目前有关子宫内膜癌确切病因及发病机制尚不清楚，多数学者认为是遗传信息的改变，在内分泌因素及外界环境因素的共同作用下逐渐演变的结果。尽管早期子宫内膜样腺癌(Ⅰ型)预后较好，但晚期及特殊类型的子宫内膜癌(Ⅱ型)预后很差。晚期及复发性子宫内膜癌的平均生存时间仅12 个月，即使给予辅助治疗，仍不能提高中位生存时间［10］。目前诊断性刮宫是妇科一项常用的、重要的辅助诊断方法，也是目前子宫内膜癌最有价值的诊断手段，但是无法准确评估病变范围，因此不能有效的指导治疗。而且由于它是盲目性操作，对一些小的或位于宫角的病灶，可能会出现漏诊或诊断过度［11］，不适用于大批量患者的筛查。经济可靠无创的血清肿瘤标志物的检测不仅用于疾病筛查、早期诊断、鉴别诊断、疗效判定、预测预后，而且还是随诊的重要指标，人附睾蛋白4(human epididymis gene product 4，HE4)是一种新型的肿瘤标志物，属于乳清酸性4－二硫化中心(WFDC)蛋白家族，具有疑似胰蛋白酶抑制剂的特性［12-13］。HE4 位于染色体20q12－13.1，基因全长为12 kD 左右，基因编码一段长度为13 kD 的蛋白，但在其成熟的糖基化形式时，此蛋白大概为20～25 kb，并且包括含有两个WFDC 结构域的一条单链［14］。但近来研究表明HE4 在部分恶性肿瘤的早期诊断及病情监测方面具有重要的临床价值，所以成为当今肿瘤分子生物学的研究热点之一。本研究中HE4 在正常子宫内膜、子宫内膜不典型增生、子宫内膜癌患者血清中均有不同程度的表达，表明HE4 蛋白并非肿瘤特异性蛋白。Li J 等［15］研究证明HE4 在子宫内膜异位症患者和健康人血清中均有不同程度的表达，张海荣等［16］报道HE4 在子宫腺肌症患者和子宫肌瘤患者血清中表达有所不同。尽管HE4 蛋白并非肿瘤特异性蛋白，但是本研究中HE4 水平在正常子宫内膜、子宫内膜不典型增生、子宫内膜癌患者血清中表达逐渐升高，且子宫内膜癌组HE4 水平明显高于正常子宫内膜组(Z=－3.444，P =0.01＜0.05)，因此提示HE4 与子宫内膜癌的发生有关。先前研究已经证实子宫内膜不典型增生是子宫内膜癌的癌前期病变，其癌变率为33%［17］，HE4 表达增高是否能促进不典型增生的子宫内膜向内膜癌转化，或者说是子宫内膜癌的高危因素?我们认为是值得深入探讨的问题。

本实验中血清HE4 水平与子宫内膜癌的手术－病理分期，肌层浸润深度及淋巴结转移密切相关(P＜0.05)。子宫内膜癌的期别越晚，血清HE4 水平越高，Ⅰ－Ⅱ期患者血清HE4 水平明显低于Ⅲ－Ⅳ期患者(Z =－2.583，P =0.010＜0.05);深肌层浸润的患者血清HE4 水平明显高于浅肌层浸润的患者(Z=－2.500，P =0.012＜0.05);有淋巴结转移的患者血清HE4 水平明显高于无淋巴结转移的患者(Z =－3.088，P=0.002＜0.05)，即随着临床病期进展、组织浸润和淋巴结转移，HE4 基因表达水平升高，因此我们可以推测HE4与子宫内膜癌的发展密切相关。关于HE4 在子宫内膜癌患者血清中高表达的原因至今仍不明了。赵莹珺等［18］在HE4基因转录水平进行了研究，阐明了HE4 基因的转录活性主要是由转录因子Sp1 与位于－71 和－48 的Egr－1 位点结合所介导。先前研究已证实Sp1 是一个普遍存在的转录因子［19］，可以受到某些组织特异性因子的调控，这些因子可以通过与Sp1 形成复合物的形式，促进或阻碍Sp1 与其识别位点的结合，从而实现启动子调控的组织特异性［20］。本实验中HE4 在子宫内膜癌患者血清中高表达，我们可以推测Sp1 可能受到子宫内膜癌组织特异性因子的影响，引起了HE4 基因转录活性的异常，使得其在子宫内膜癌患者血清中高表达。

总之，HE4 蛋白作为一种新型的肿瘤标志物正引起越来越多研究者的关注，其在肿瘤发生、发展及预后方面的作用正不断被发现。但是有关HE4 蛋白的作用机制，作用细节及受调节的因素等研究甚少，还有很多功能仍然没有被发现，HE4与子宫内膜癌的发生、发展、浸润、转移、复发的关系，尚需要进一步探讨。

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