广东佛山地区儿童地中海贫血基因型分析

林业辉 潘志伟 周杏 宋春林

（1.佛山市妇幼保健院儿科；2.佛山市妇幼保健院中心实验室，广东 佛山 528000）

地中海贫血（地贫）是由于一种或多种珠蛋白肽链合成受阻或完全抑制，导致血红蛋白成分组成异常，而引起的慢性溶血性贫血，属于一种常染色体不完全显性遗传病。佛山地处珠三角腹地，亦是地贫高发地区，为探讨本地区地贫基因型的分布特征，本文对来我院就诊和体检的部分儿童进行地贫基因检测分析，现报告如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选择2009年1月至2011年7月在我院儿科住院部、门诊和儿童保健科就诊和体检的儿童平均红细胞体积（MCV）＜82fl者。

1.2 仪器和试剂（1）Sysmex XT－2000i全自动血细胞分析仪：日本希森美康公司生产，XT－2000i所用测定试剂由该公司提供。（2）CR 扩增仪：美国BioRad 公司生产的icycler扩增仪（或美国ABI公司生产的2720 扩增仪），DNA 抽提试剂盒、α地贫基因诊断试剂盒和β地贫基因诊断试剂盒由深圳亚能生物技术有限公司提供，电泳所需0.8% 琼脂糖凝胶等为自配。

1.3 方法（1）MCV 测定：使用Sysmex XT－2000i全自动血细胞分析仪对全部受检儿童进行血细胞分析。（2）基因诊断：对经血细胞分析MCV＜82fl者用无菌EDTA 抗凝管抽取静脉血2mL；采用DNA快速提取试剂盒提取DNA，再用α地贫基因诊断试剂盒，以缺口PCR（gap－PCR）为原理的单管多重PCR（M－PCR）进行α地贫基因检测；同时用β地贫基因诊断试剂盒，以反向点杂交芯片法进行β地贫基因检测。具体步骤按说明书进行操作。

1.4 统计学处理 采用SPSS 17.0 统计软件。计数资料用率表示，不同组间率或构成比的比较用χ2检验。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 儿童地贫的检出率 血细胞分析MCV＜82fl者1 341例，其中男896例，女445例，年龄0～14岁。确诊地贫848例，男544例（60.7%），女304例（68.3%），男、女检出率差异有统计学意义。其中α地贫471例，检出率35.1%；β地贫377例，检出率28.1%。不同年龄段儿童地贫检出率不同，婴儿期（＜1岁）地贫检出率54.6%（339／621），幼儿期（～3岁）地贫检出率63.7%（314／493），学龄前期（～7岁）地贫检出率81.7%（143／175），学龄期（～14岁）地贫检出率100%（52／52），儿童地贫检出率随着年龄增长而逐渐增高（P＜0.01）。

2.2 地贫患儿的基因型和基因频率（1）α地贫患儿的基因型和基因频率：本反应体系可扩增出长度约为1.8、2、1.6和1.3kbp的4个条带，分别代表人类α珠蛋白基因（即正常人）、3.7缺失型、4.2缺失型、SEA组缺失型的扩增产物。阴性对照管无扩增产物，阳性对照管出现长度约为1.3和1.8kbp组的2组个条带，分别为－SEA缺失型和正常α珠蛋白基因扩增的产物。本组资料471例α地贫患儿中，以－SEA基因最组常组见，占75.3%（389组个组等组位组基组因）；－α3.7组基组因和－α4.2基因分别占17%（88组个等位基因）和7.7%（40组个组等组位组基组因）。并组以－SEA／αα组基组因组型组多组见，占73.2%（345例）；其次为αα／－α3.7基因型，占12.5%（59例）；此外还有－SEA／－α3.7基因型占5.5%（26例），αα／－α4.2基因型占4.2%（20例），－SEA／－α4.2基因型占3.8%（18例），－α3.7／－α4.2组基组因组型组占0.4%（2例），－α3.7／－α3.7基因型占0.2%（1例）。（2）β地贫患儿的基因型和基因频率：在377例β地贫患儿中检出11种突变基因，共401个等位基因，居前5位的突变基因依次组为：CD41－42组占40.2%（161组个）、IVS－2－654占24.5%（98个）、CD17占15.5%（62组个）、β－28占8.5%（34个）、CD71－72占4.2%（17个）；其他的突变基因组还组有：CD26（10组个）、CD43（6组个）、β－29（5个）、CD27－28（3组个）、IVS－1－1（3组个）、CD14－15（2个）。共有23组种基因组型，包组括11组种杂合组子（93.6%），分别为：CD41－42（144例）、IVS－2－654（91例）、CD17（53例）、β－28（28例）、CD71－72（13例）、CD26（7例）、CD43（6例）、CD27－28（3例）、β－29（3例）、IVS－1－1（3例）和CD14－15（2例）；9种双重杂合子（4.5%），分别为：CD41－42／CD26（3例）、IVS－2－654／β－28（3例）、CD41－42／CD17（2例）、CD41－42／CD71－72（2例）、CD41－42／β－28（2例）、IVS－2－654／CD41－42（2例）、CD17／β－29（1例）、CD71－72／β－28（1例）和CD71－72／β－29（1例）；3种纯合子（1.9%），分别为：CD17／CD17（3例）、CD41－42／CD41－42（3例）和IVS－2－654／IVS－2－654（1例）。

3 讨论

地贫属于常染色体单基因遗传性疾病，具有高度的遗传异质性和明显的地理分布特征。本病临床表现为不同程度的溶血性贫血，重型患者常出现严重溶血性贫血，往往未成年即已夭折；轻型患者可无临床症状，极易漏诊。因此，有必要开展地贫基因的检测和监控，指导合理婚配，防止地贫基因蔓延。

本研究对1 341例血细胞分析MCV＜82fl儿童进行地贫基因检测，诊断α地贫471例，检出率为35.1%，诊断β地贫377例，检出率为28.1%，α地贫和β地贫检出率均明显高于文献［1－3］报道。这可能与本资料先通过对就诊和体检儿童进行血细胞分析筛查，对MCV＜82fl者才进行地贫基因检测，因此导致地贫患儿相对集中，而检出率增高。本资料显示，随着年龄增长地贫基因检出率逐渐增高，学龄期儿童检出率达100%，提示随着年龄增长，MCV降低（＜82fl）作为地贫的预测指标越可靠（P＜0.05）。这主要与婴幼儿时期MCV 值降低除受地贫影响外，亦受缺铁性贫血的影响，幼儿期以后缺铁性贫血的发生率显著下降，因此对MCV 值的影响也明显降低，故而推断MCV＜82fl作为年长儿地贫的预测指标较婴幼儿更可靠。

引起我国α地贫的基因类型主要有3种：（1）右侧缺失型（－α3.7）；（2）左侧缺失型（－α4.2）；（3）东南亚缺失型（－SEA）。我国南方以－SEA基因型最常见。本研究471例α地贫患儿基因分析结果显示，东南亚缺失型占主导地位，占75.3%，约是－α3.7和－α4.2两基因总和组的3组倍，右组侧组缺组失组型（－α3.7）是组左组侧组缺组失组型（－α4.2）的2.2倍，与黄钰君等［4］报道结果相似。本地区儿童α地贫基因型以标准型（－SEA／αα）最为常见（占73.2%），与广州和珠海等地相似［1，5］。目前，我国已发现34种β地贫突变类型，南方β地贫突变基因型居前5 位的分别是CD41－42，IVS－2－654，β－28，CD17和CD71－72［6］。本研究377例β地贫患儿共检出11种突变基因类型，与广州、茂名和南宁等地相似［2，7－8］，高组于组国组内组其组他组地组区［5，9］。本组资组料组显组示居前5位突变基因类型占所有检出的92.9%。共检出的β组地贫基因型23组种，其中杂合子11组种（93.6%），双组重组杂组合组子9组种（4.5%），纯组合组子3组种（1.9%）。11组种杂合子临床上均表现为轻型β组地贫，纯合子和部分双重杂合子表现为重型，部分双重杂合子表现为中间型。

综上所述，佛山地区α地贫基因缺失以东南亚缺失型占主导地位，基因型以标准型（－SEA／αα）多见。β地贫以轻型杂合子多见，而重型β地贫较少，主要见于纯合子和部分双重杂合子。地贫是本地区高发的地方性遗传病，有必要对MCV＜82fl的儿童人群常规进行基因诊断，并建立本地区的地贫基因网络档案库，为计生部门采取有效措施防止重型地贫患儿的出生和地贫基因的蔓延提供参考依据。

［1］温柏平，樊茂，代宏剑，等.昆明地区儿童地中海贫血筛查和基因诊断分析［J］.中国当代儿科杂志，2011，13（2）：104－106.

［2］黄金文，黄瑞洪.540例地中海贫血初筛试验阳性患者基因诊断结果分析［J］.中国实验诊断学，2014，18（11）：1871－1872.

［3］叶立新，甘文彬，潘天祥.东莞地区新生儿地中海贫血筛查结果分析［J］.中外医疗，2014（15）：140－141.

［4］黄钰君，伍绍国，区小冰，等.儿童地中海贫血的发生率及发病基因分析［J］.中国优生与遗传杂志，2007，15（6）：28－31.

［5］田文芳，唐喜军，易素芬.广东省珠海地区α和β地中海贫血基因突变类型研究［J］.检验医学与临床，2011，8（12）：1487－1488.

［6］范联，林业辉，周杏，等.佛山地区地中海贫血基因型的调查研究［J］.中华全科医学，2013，11（4）：593－620.

［7］唐玉芬，谭满胜，聂俊玮.广东省茂名地区地中海贫血基因型分析［J］.分子诊断与治疗杂志，2014，6（3）：187－190.

［8］李东明，玉晋武，韦媛，等.南宁地区14 096例儿童地中海贫血筛查与基因诊断分析［J］.中国小儿血液与肿瘤杂志，2013，18（6）：259－263.

［9］姚秀云，张渝美，秦蓁子，等.重庆市汉族儿童β－地中海贫血的分子流行病学研究［J］.中华儿科杂志，2013，51（7）：518－522.