膀胱尿路上皮癌组织MAD2的表达及其意义

孟庆荣，孙立江

(青岛大学附属医院泌尿外科，山东 青岛 266003)



膀胱尿路上皮癌组织MAD2的表达及其意义

孟庆荣，孙立江

(青岛大学附属医院泌尿外科，山东 青岛 266003)

目的 探讨膀胱尿路上皮癌(BUC)组织中有丝分裂阻滞缺陷蛋白(MAD2)的表达及其与膀胱癌病理分级、临床分期和预后的关系。方法 采用免疫组化方法(SP法)检测47例BUC组织和12例正常膀胱黏膜组织中MDA2的表达，并分析MDA2表达与BUC病理分级、分期和肿瘤复发的关系。结果 BUC组织中MAD2阳性表达率明显高于正常膀胱黏膜组织，差异有显著性(χ2=13.68，P<0.01)。高级别和浸润性BUC组织中MAD2的阳性表达率明显高于低级别和浅表性BUC组织(χ2=12.25、4.33，P<0.05)，复发BUC组织中MAD2阳性表达率与初发BUC组织比较差异无显著性(P>0.05)。MAD2高表达组病人中位生存期明显短于MAD2低表达组，差异有统计学意义(P=0.048)。结论 MAD2可作为BUC诊断的一个重要的免疫标记抗体，其检测可为BUC恶性程度的判定、预后分析及临床治疗提供有效的依据。

膀胱肿瘤；有丝分裂阻滞缺陷蛋白;免疫组织化学

膀胱肿瘤是泌尿生殖系统常见的恶性肿瘤，是一种直接威胁病人生存的疾病。全世界范围内膀胱肿瘤在男性和女性人群中都有较高的发病率[1-3]。在我国，膀胱肿瘤是泌尿生殖系统最常见的肿瘤，其发病率、死亡率均居泌尿系统肿瘤首位,而且近年来有不断增长的趋势[4]。组织学角度上，膀胱癌大多数为膀胱尿路上皮癌(BUC)，约占90%，并且无论采取经尿道膀胱肿瘤电切术还是膀胱全切术治疗，术后都有一定的复发，且每次复发，肿瘤的恶性程度都会升高，肿瘤转移的概率也显著升高。因此，寻求新的肿瘤诊断、治疗及预后判断指标有重要意义。有丝分裂阻滞缺陷蛋白2(MAD2)是有丝分裂检查点的重要关卡蛋白，其作用是准确识别纺锤体微管与染色体动粒的连接，从而保证染色体得以正常分离[5]。MAD2异常表达将会导致细胞有丝分裂的错误进行，导致肿瘤的发生[6]。目前多项研究表明，MAD2异常表达与子宫内膜癌、结直肠癌和前列腺癌等肿瘤的发生密切相关[7-9]。但MAD2在膀胱肿瘤组织表达及其意义目前尚未完全阐明。本研究采用免疫组织化学方法检测BUC组织中MAD2表达，分析其与BUC临床病理因素的关系。

1 资料和方法

1.1一般资料

2005年12月—2012年12月，选择在我院就诊、有完整临床资料、手术前均未行放化疗、手术后病理诊断为BUC组织标本47例，男35例，女12例；年龄40～78岁，平均54岁。另取同期开放手术膀胱切开取石或膀胱全切而获得的15例正常膀胱组织作为对照组。47例膀胱癌病人均获随访，随访时间18～102个月，平均62个月，死亡22例，健在23例，失访2例。

1.2主要试剂

兔抗人MAD2多克隆抗体购自Abcam公司(ab97777)，稀释度为1∶50，4 ℃保存；EliVisionTMplus试剂盒购自迈新生物技术有限公司，包括试剂A聚合物增强剂、酶标抗兔复合物及DAB显色液。

1.3MAD2表达检测

采用免疫组化染色方法(SP法)检测，按试剂盒说明书要求进行操作，DAB显色，苏木精对比染色，中性树胶封片。以动物血清及1×PBS代替一抗作为阴性对照。

1.4结果判定

以细胞胞质和(或)胞核出现黄色或棕黄色颗粒为MAD2阳性表达。每张切片随机选择10个高倍视野(10×40)进行观察，按照阳性细胞数占视野中总细胞数的百分比分为4级[10]。所有切片均由病理科两位主治医师采用双盲计分法评定结果。

2 结 果

2.1MAD2在不同临床分期、不同分化和初复发BUC组织中的表达情况

BUC组织MAD2阳性表达率为72.3%(34/47)，高于正常膀胱黏膜组织的8.3%(1/12)，二者比较差异有显著性(χ2=13.68，P<0.01)。MAD2的阳性表达率随膀胱癌组织的分化程度降低而增加，差异有显著性(χ2=12.25，P<0.01)。MAD2的阳性表达率随临床分期的增加而升高，差异有显著意义(χ2=4.33，P<0.05)。MAD2在初发和复发膀胱癌组织中的阳性表达率分别为70.0%和85.7%，差异无显著性(P>0.10)。见表1。

2.2MAD2表达与生存期的关系

生存曲线分析显示，MAD2低表达组病人的中位生存时间为78个月(四分位数间距72～84个月)，而高表达组病人中位生存时间为50个月(四分位数间距35～75个月)，MAD2高表达组病人的生存期明显短于MAD2低表达组病人，差异有统计学意义(P=0.048)。见图1。

表1 不同临床分期、不同分化BUC组织MAD2表达(例)

图1 MAD2表达与生存期的关系

3 讨 论

现代分子生物学和细胞遗传学研究表明，染色体不稳定(CIN)是大部分恶性肿瘤的一项特征，被视为肿瘤发生发展和肿瘤异质性的发动机。随着CIN分子机制研究的不断深入，已证明一些维持染色体稳定性的分子出现异常表达或者出现遗传变异，能导致恶性肿瘤的发生，比如纺锤体检查点蛋白的异常表达。纺锤体检查点基因编码的蛋白包括MAD和BUB等，其中MAD2是关键成分[11]。目前研究证实，酵母和哺乳动物细胞中MAD2的异常表达与CIN的发生密切相关。

MAD2表达异常与多种肿瘤的发生关系密切。WANG等[12]研究显示，结直肠癌组织中MAD2 表达明显高于腺瘤和正常黏膜组织。李爱香等[13]研究结果显示，子宫内膜癌组织中MAD2高表达。本文免疫组化检测结果显示，BUC组织MAD2阳性表达率明显高于正常膀胱黏膜，差异有统计学意义，提示MAD2表达与BUC发生密切相关；高级别和浸润性BUC组织中MAD2阳性表达率明显高于低级别和浅表性BUC，二者比较差异有统计学意义，提示MAD2蛋白在一定程度上可以反映肿瘤细胞的侵袭能力；复发BUC病人中MAD2阳性表达率与初发BUC病人相比差异无显著性， 提示MAD2不是BUC复发的高危因素；MAD2高表达病人的生存期短于MAD2低表达病人。CHOI等[14]报道，MAD2高表达与BUC不良进展有关。提示MAD2异常表达在BUC发生发展中可能起作用。

肿瘤的发生发展是多因素、多基因共同作用的结果， 包括原癌基因的激活，抑癌基因的失活、突变，以及凋亡基因的失调等，它们可使细胞的增殖失去控制而转化为恶性细胞。MAD2异常表达可导致CIN的发生，进而发展为肿瘤。MAD2高表达可能通过上述机制促进BUC的发生发展。

纺锤体检查点能监控染色体着丝点与微管联接，确保姐妹染色单体精确分离，从而维持遗传稳定性。近年来，纺锤体检查点蛋白在肿瘤发生发展中的作用日益受到重视，研究表明，微管抑制剂(紫杉醇、长春碱类)等抗肿瘤药物通过纺锤体启动了有丝分裂灾变、凋亡等通路而使肿瘤细胞死亡，达到治疗肿瘤的目的。纺锤体检查点表达上调或下调与抗肿瘤药物的作用机制有关。近年来对MAD2的研究也越来越多，本研究结果表明BUC组织MAD2高表达，并且与病理分级、临床分期及生存周期有关，因此，MAD2对判断膀胱肿瘤的侵袭转移、制定治疗方案及预后判断具有重要意义。然而，检查点功能失调及MAD2的异常表达导致癌症发生的机制尚不完全明确，相信随着对纺锤体检查点及其上游调控机制和下游通道的不断深入研究，MAD2可能成为一种识别恶性肿瘤高风险人群的标记物，并有望成为治疗恶性肿瘤的一个新靶点。

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(本文编辑 黄建乡)

EXPRESSION OF MAD2 IN BLADDER UROTHELIAL CARCINOMA AND ITS CLINICAL SIGNIFICANCE

MENGQingrong,SUNLijiang

(Department of Urology, The Affiliated Hospital of Qingdao University Medical College, Qingdao 266003, China)

ObjectiveTo investigate the expression of Mitotic arrest deficient protein 2 (MAD2) in bladder urothelial carcinoma (BUC) and its association with the pathological grade, clinical stage and prognosis of the cancer.MethodsThe expression of MAD2 in 47 cases of BUC and 12 cases of normal bladder membrane was detected by using immunohistochemical staining, the association of MDA2 with the grade, stage and recurrence of BUC was analyzed.ResultsThe rate of positive MAD2 expression in BUC was higher than that in normal bladder (χ2=13.68,P<0.01), that in high-grade and invasive BUC was higher than that in low-grade and superficial BUC (χ2=12.25,4.33;P<0.05). However, the difference of positive expression of MAD2 between recurrent and primary BUC was not significant (P>0.05). Median survival time in patients with higher expression of MAD2 was obviously shorter than those with low expression of MAD2, the difference was statistically significant (P=0.048).ConclusionMAD2 may be used as an important marker in the diagnosis of bladder urothelial carcinoma. The detection of MAD2 provides an effective basis in judging the malignant degree, predicting prognosis and clinical therapy of this malignancy.

bladder neoplasms; mitotic arrest deficient protein 2; immunohistochemistry

2014-04-25;

2014-07-25

陈伟民(1968-)，男，主治医师。

R737.14

A

1008-0341(2015)01-0036-03