胃腺癌组织CXCL10与CXCR3的表达及意义

张巍巍，孟欣颖，马春红，王涛，马健，周长宏

(青岛市市立医院东院区，山东 青岛 266071 1 干部保健科； 2 消化内科)



胃腺癌组织CXCL10与CXCR3的表达及意义

张巍巍1，孟欣颖2，马春红1，王涛2，马健2，周长宏2

(青岛市市立医院东院区，山东 青岛 266071 1 干部保健科； 2 消化内科)

目的 探讨胃腺癌组织中CXC趋化因子配体10 (CXCL10)及CXC趋化因子受体3(CXCR3)的表达及临床意义。方法 胃腺癌及癌旁组织标本各50例，对照胃组织标本20例，应用免疫组化SP方法检测3种胃组织中CXCL10、CXCR3的表达，并评估胃腺癌组织中CXCL10、CXCR3的表达与临床病理特征间的关系及两者之间的相关性。结果 胃腺癌组织中CXCL10和CXCR3的表达强度明显高于癌旁组织和对照胃组织(χ2=8.24～22.69，P<0.05)；癌旁组织和对照胃组织中两者的表达强度差异无显著性(P>0.05)。胃腺癌组织中CXCL10的表达与肿瘤TNM分期有关(χ2=7.07，P<0.05)。CXCL10与CXCR3在胃腺癌组织中的表达水平呈正相关(rs=0.546，P<0.01)。结论 CXCL10及CXCR3在胃腺癌发生、发展中具有一定促进作用。

CXC趋化因子配体10；CXC趋化因子受体3；胃肿瘤；病理学,临床

胃癌是我国最常见的恶性肿瘤之一，其5年生存率低，发现时大部分已有浸润和转移[1]，因此，早期诊断胃癌已成为当今研究的焦点。近年的研究结果显示，趋化因子及其受体与肿瘤免疫、转移密切相关。本研究通过检测胃腺癌及癌旁组织中CXC趋化因子配体10(CXCL10)及CXC趋化因子受体3(CXCR3)的表达，进一步探讨其在胃癌发生、发展中的作用。现将结果报告如下。

1 材料与方法

1.1材料及其来源

2011年1月—2012年1月，我院普外科手术切除并经病理证实的胃腺癌及癌旁组织标本各50例，其中男37例，女13例，平均年龄62.5岁。病人留取标本前未经过任何治疗。另外选取年龄、性别和胃癌病人相匹配的健康查体人员胃镜检查胃组织标本20例，其中男13例，女7例，平均年龄61.0岁，均经胃镜病理检查证实为轻度、非活动性慢性非萎缩性胃炎，幽门螺杆菌检查均为阴性。所有组织经甲醛固定，石蜡包埋后制成5 μm厚的石蜡切片待检。本研究经青岛市市立医院伦理委员会批准，所有病人均签署了知情同意书。

1.2研究方法

采用免疫组织化学SP法分别检测3种组织中CXCL10及CXCR3的表达。石蜡切片经二甲苯脱蜡，梯度脱水，于体积分数0.03的H2O2中室温下孵育15 min；浸入0.01 mol/L的枸缘酸盐缓冲液(pH6.1)中，微波抗原修复；以体积分数0.10的非免疫性牛血清蛋白封闭，分别加入一抗(1∶200兔抗人CXCL10单克隆抗体、1∶200兔抗人CXCR3单克隆抗体，均购自北京博奥森生物技术有限公司)，于37 ℃温箱中孵育1 h；加入通用型免疫组化二抗(购自福建迈新生物技术有限公司)，37 ℃温箱孵育10 min；DAB显色，苏木精复染，二甲苯透明，中性树胶封片。以PBS替代一抗作为阴性对照。

1.3结果判定

细胞膜及细胞质中出现淡黄色至棕黄色的颗粒，为CXCL10、CXCR3阳性染色。在显微镜下随机选取5个视野(200倍)，按照染色细胞数目的多少及其染色深浅来进行评分[2]。①根据显微镜视野中阳性细胞着色深浅计分：细胞不显色为0分，浅黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分。②根据显微镜视野中阳性细胞所占的比例评分：阳性细胞在所有细胞中所占比例<15%为0分，15%～25%为1分，26%～75%为2分，≥76%为3分。两项积分乘积评定结果，其中0分为“-”；1～3分为“+”；4～6分为“”；7～9分为“”。

1.4统计学分析

采用SPSS 17.0软件进行统计学分析， 计数资料组间比较采用χ2检验，相关性采用Spearman相关分析，以P<0.05为差异有显著性。

2 结 果

2.1CXCL10、CXCR3在各组织中的表达

CXCL10及CXCR3主要表达于胃癌组织中的胃癌细胞以及胃癌组织浸润的单个核细胞的细胞膜及细胞质。在癌旁组织和对照胃组织，CXCL10及CXCR3主要表达于间质的单个核细胞的细胞膜及细胞质。胃癌组织中CXCL10和CXCR3的表达强度均明显高于癌旁组织和对照胃组织(χ2=8.24～22.69，P<0.05)，癌旁组织和对照胃组织中两者的表达强度差异无显著性(P>0.05)。见表1。

表1 各组织中CXCL10、CXCR3的表达(例)

2.2胃腺癌组织CXCL10、CXCR3表达与临床病理特征的关系

CXCL10表达与肿瘤分期有关(χ2=7.07，P<0.05)；CXCR3表达与胃癌TNM分期有一定关系，但差异无显著性(P>0.05)。两者与病人年龄、性别、分化程度等无关(P>0.05)。见表2。

2.3胃腺癌组织CXCL10与CXCR3表达相关性

相关分析显示，CXCL10与CXCR3的表达水平呈正相关(rs=0.546,P<0.01)。

表2 胃腺癌组织中CXCL10、CXCR3表达与临床病理特征间的关系(例)

临床病理特征nCXCL10-～+ ～ CXCR3-～+ ～ 年龄(岁) ≥602712151215 <6023815914性别 男3715221423 女135876分化程度 中高分化2611251115 低分化249151014TNM分期 Ⅰ期+Ⅱ期2615111412 Ⅲ期+Ⅳ期24519717

3 讨 论

趋化因子是一类对不同靶细胞具有趋化和诱导功能的小分子多肽物质，根据其N末端4个保守半胱氨酸残基的前两个C间是否含有其他氨基酸，将它们分为4个亚族：CXC类、CC类、CX3C类、C类。趋化因子受体是介导趋化因子行使功能的G蛋白耦联的7次跨膜型受体超家族，根据与其特异性结合的相应配体而命名。CXCL10由LUSTER等[3]从活化的U937细胞株的基因表达产物中筛选出来，而CXCR3 是CXCL10的惟一受体。CXCL10与CXCR3结合后可引起钙离子内流，从而激活磷脂酰肌醇3激酶和丝裂原活化蛋白激酶，参与细胞的生长、分化、凋亡、分布、炎症反应及肿瘤的生长和转移等多种病理生理过程[4-5]。CXCL10和CXCR3在胃癌中的作用鲜见报道。

本文研究结果显示，在胃癌组织中CXCL10和CXCR3的表达水平均明显高于癌旁组织和对照胃组织，提示在胃癌发生过程中CXCL10 和CXCR3均具有促进作用。何甜等[6]研究结果显示，胃癌组织中CXCL10蛋白的阳性表达率明显高于慢性非萎缩性胃炎和癌前病变组组，表明CXCL10在胃黏膜的发育、演变过程中起一定的作用，与本研究的结果相近。CXCR3在胃癌中的作用还未见文献报道。CXCR3(+)细胞的减少会导致胃癌局部微环境呈现免疫抑制状态[7]，并且CXCR3与肿瘤转移和较差的预后有关[8-9]。这些结果提示，CXCR3在肿瘤的发生发展过程中起一定的促进作用。结合本文的研究结果，提示CXCR3在胃癌的发生中也具有促进作用。

本研究结果还显示，CXCL10的表达水平与胃癌的临床分期有关，即在晚期肿瘤中，CXCL10的表达水平明显高于早期肿瘤，表明CXCL10对胃癌的进展也具有促进作用。CXCR3表达水平虽与胃癌临床分期有一定的相关性，但无统计学意义，这点值得关注。CXCR3分为CXCR3A和CXCR3B亚型，CXCR3B较CXCR3A在氨基端的胞外区长52个氨基酸残基，这种结构的差异导致了两者生物学功能的差异，即CXCR3A主要发挥促进肿瘤生长和转移的作用，而CXCR3B的作用则相反。WU等[10]对前列腺癌的研究结果显示，CXCR3A的表达增强及CXCR3B表达的下调开启了促进前列腺癌细胞转移和侵袭的信号途径。在一项关于卵巢癌的研究中也有类似报道[11]。本研究显示CXCR3与胃癌临床分期的相关性无统计学差异，或与未对CXCR3进行分型有关，这一点值得深入研究。

本研究结果还显示，胃腺癌组织中CXCL10的表达水平与CXCR3的表达水平呈正相关。这点尚未见相关的文献报道。这提示，CXCL10是通过与CXCR3相结合发挥其生物学作用，两者在胃癌的发生、发展过程中呈协同作用。

综上所述，CXCL10与CXCR3在胃癌的发生、发展过程中发挥了促进作用，两者呈协同效应。对CXCL10和CXCR3在胃癌中作用的深入研究，将为研发针对CXCL10-CXCR3反应轴的分子靶向治疗奠定基础。

[1] 郝建波,张劲峰,罗波,等. 胃癌阴性淋巴结微转移的检测及意义[J]. 青岛大学医学院学报, 2012,48(6):495-497,499.

[1] 段波峰,郑维,唐梅徕,等. CXCR3/CXCL10在乳腺癌中的表达及临床意义[J]. 中国医师杂志, 2011,13(10):1305-1308.

[3] LUSTER A D, UNKELESS J C, RAVETCH J V. Gamma-interferon transcriptionally regulates an early-response gene containing homology to platelet proteins[J]. Nature, 1985,315(621):672-676.

[4] 孟欣颖,周长宏. IP-10和CXCR3与消化系统肿瘤[J]. 胃肠病学和肝病学杂志, 2012,21(5):488-490.

[5] VERBEKE H, HANNELIEN V, GEBOES K, et al. The role of CXC chemokines in the transition of chronic inflammation to esophageal and gastric cancer[J]. Biochim Biophys Acta, 2012,1825(1):117-129.

[6] 何甜,唐慧,郭强,等. 趋化因子10在慢性非萎缩性胃炎、胃癌癌前病变及胃癌中的表达及意义[J]. 重庆医学, 2014,43(4):388-390.

[7] OHTANI H, YOSHIE O. Morphometric analysis of the ba-lance between CXCR3+ T cells and FOXP3+ regulatory T cells in lymphocyte-rich and conventional gastric cancers[J]. Virchows Arch, 2010,456(6):615-623.

[8] MURAKAMI T, KAWADA K, IWAMOTO M, et al. The role of CXCR3 and CXCR4 in colorectal cancer metastasis[J]. Int J Cancer, 2013,132(2):276-287.

[9] MA X, NORSWORTHY K, KUNDU N, et al. CXCR3 expression is associated with poor survival in breast cancer and promotes metastasis in a murine model[J]. Mol Cancer Ther, 2009,8(3):490-498.

[10]WU Q, DHIR R, WELLS A. Altered CXCR3 isoform expression regulates prostate cancer cell migration and invasion[J]. Mol Cancer, 2012,11:3.

[11]FURUYA M, YONEYAMA T, MIYAGI E, et al. Differential expression patterns of CXCR3 variants and corresponding CXC chemokines in clear cell ovarian cancers and endometriosis[J]. Gynecol Oncol, 2011,122(3):648-655.

(本文编辑 厉建强)

EXPRESSION OF CXCL10 AND CXCR3 IN GASTRIC ADENOCARCINOMA AND ITS SIGNIFICANCE

ZHANGWeiwei,MENGXinying,MAChunhong,WANGTao,MAJian,ZHOUChanghong

(Department of Gastroenterology, Qingdao Municipal Hospital, Qingdao 266071, China)

ObjectiveTo study the expression and clinical significance of CXCL10 and CXCR3 in gastric adenocarcinoma (GAC).MethodsFifty GAC samples, 50 paracancerous samples and 20 gastric tissue samples were collected for this study. The expressions of CXCL10 and CXCR3 in these three gastric tissues were detected using immunohistochemical SP method. The correlation between the expressions of CXCL10 and CXCR3 in gastric cancer tissues and clinical pathology was analyzed.ResultsThe expression intensity of CXCL10 and CXCR3 in gastric cancer tissue was significantly higher than that of the adjacent cancer tissue and control gastric tissue (χ2=8.24-22.69,P<0.05). No significant difference was noted between the expression intensity of adjacent cancer tissue and the control gastric tissue (P>0.05). The expression of CXCL10 in gastric cancer was related with the tumor TNM staging (χ2=7.07,P<0.05). The level of expression of CXCL10 was positively correlated with CXCR3 in gastric cancer (rs=0.547,P<0.01).ConclusionCXCL10 and CXCR3 play a certain role in the occurrence and development of gastric adenocarcinoma.

CXC chemokine ligand 10; CXC chemokine receptor 3; stomach neoplasms; pathology, clinical

2014-05-28;

2014-09-16

张巍巍(1979-)，女，博士，主治医师。

周长宏(1963-)，女，主任医师，硕士生导师。

R735.2

A

1008-0341(2015)01-0021-03