微小RNA－222参与非小细胞肺癌发病的作用机制研究*

毛凯平， 沈 毅， 谭 林

(1.山东省青岛市市立医院胸外科， 山东 青岛 266000 2.青岛大学医学院附属医院胸外科， 山东 青岛 266000)

肺癌是临床较为常见的恶性肿瘤之一。有文献提示NSCLC约占肺癌的80%，是肺癌高发类型。21世纪初期，有相关研究报道首次提出微小核糖核酸(microRNA、miRNA)表达水平的异常与肿瘤进展存在一定的相关性［1，2］。此后也有大量研究报道证实，微小核酸在肿瘤的产生与进展过程中起到重要的影响作用，目前已有研究证实miR－21在肝癌、甲状腺头状癌等恶性肿瘤中表达水平有明显提升，同时与肿瘤分级表现呈明显正相关表现，但临床上对miRNA－222与NSCLC 的研究报道较少［3，4］。基于此，为进一步分析微小RNA－222参与NSCLC发病的作用机制，本研究对100例NSCLC病理标本进行了研究，现整理报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料:收集自2011年1月至2013年12月我院经手术切除的100例非小细胞肺癌病理标本作为研究对象，同时采集所有病例癌旁肺组织，所有纳入研究对象术后均经病理检查证实为NSCLC，且术前未接受靶向治疗、放疗及化疗。其中男70例，女30例;年龄38～81 岁，平均年龄(58.6±1.4)岁;腺癌 46 例，鳞癌54例;肿瘤分期:I期38例，Ⅱ期47例，Ⅲ期15例;分化程度:低分化33例，中、高分化67例;肿瘤直径＞3cm者60例，≤3cm 40例;淋巴结转移65例。

1.2 方法:采用qRT－PCR法对100例病例标本微小RNA－222表达水平进行检测。采用Trizol试剂提取病理标本中总RNA，以U6小RNA作为参考依据，以相对CT值表示检测值。严格按照试剂操作说明进行检测。术后0.5h内获得患者病理标本，清除被污染瘤细胞后，采用液氮速冻后，放置于－80℃环境下保存待测。提取病理组织RNA，后实施cDNA逆转录。

1.3 统计学方法:采用SPSS19.0统计学软件对上述数据进行处理，计量资料采用均数±标准差(±s)表示，以P＜0.05为差异有显著统计学意义。

2 结 果

2.1 NSCLC组织及癌旁肺组织中微小RNA－222表达水平对比:NSCLC病理组织中miRNA－222相对表达值为(20.12±6.37)，明显高于癌旁肺组织中表达量，两者对比差异显著(P＜0.05)，如表1。

表1 NSCLC组织及癌旁肺组织中微小RNA－222表达水平对比(±s)

表1 NSCLC组织及癌旁肺组织中微小RNA－222表达水平对比(±s)

组别 n miRNA－222相对表达值NSCLC 组织 100 20.12±6.37癌旁肺组织 100 17.84±6.23 t－2.774 P － ＜0.05表2 NSCLC患者临床病理特征与miRNA－222表达水平关系(x±s)病理特征 n miRNA－222相对表达值t P病理类型腺癌 46 20.72±6.77 0.613 ＞0.05鳞癌 54 19.06±7.04肿瘤分期I+Ⅱ期 85 19.72±6.82 2.782 ＜0.05Ⅲ期 15 20.45±6.56分化程度低分化 33 21.26±6.55 2.066 ＜0.05中、高分化 67 18.71±7.11肿瘤直径＞3cm 60 19.53±6.39 1.014 ＞0.05≤3cm 40 20.73±6.56淋巴结转移有65 21.37±6.28 2.363 ＜0.05无35 18.49±7.05

2.2 NSCLC患者临床病理特征与miRNA－222表达水平关系:病理类型与肿瘤直径长度与NSCLC患者病理组织中miRNA－222表达量并无明显意义(P＞0.05);但肿瘤分期、分化程度及淋巴结转移等因素均与组织miRNA－222 相对表达水平相关(P＜0.05)，如表2。

3 讨 论

伴随着人类基因组计划研究的开展，超过99%的基因组非编码序列引起了医学领域的广泛关注，其中以miRNA为代表［5］。miRNA是单链小分子 RNA中的一种，常见于高等哺乳动物、病毒、植物中。早在20世纪90年代初期有研究者发现首个非编码RNA以来，截止到21世纪初期目前已发现miRNA超过500种，可能调节基因组中超过30%的基因编码［6］。当前认为miRNA主要作为人体基因表达的负调控因子，参与细胞的凋亡及增值过程，影响细胞分化及代谢功能，但目前临床上对其确切的生物功能及靶点尚未明确。有相关文献提示，miRNA可作为癌基因、抑癌基因参与肿瘤的进展过程［7］。其中miRNA－222主要位于人体染色体的脆性部分，目前已证实在肝癌患者的基因中有较高的表达，有明显的癌基因作用［8］。

有研究通过基因芯片检测方法得出结论，在非小细胞肺癌患者病理组织中有超过40种miRNA基因存在异常表达现象，其中miRNA－222表达水平升高比较明显。有学者对不吸烟肺癌患者病理组织中检出miRNA－222水平呈过高表达。本组研究中，NSCLC组织中miRNA－222表达水平明显高于癌旁肺组织，与早期研究报道内容一致，证实miRNA－222存在癌基因作用。但早期部分研究并未对miRNA－222表达水平与NSCLC患者的发病及作用机制展开研究。本组研究结果提示，NSCLC患者肿瘤分期、分化程度及淋巴结转移等因素均与miRNA－222表达水平存在一定的相关性，提示NSCLC患者组织中miRNA－222高表达水平可能预示患者预后水平较差或肿瘤进展。

［1］ 王欢，翁国星，陈智群，等.早期非小细胞肺癌组织中miR－106a的表达变化及意义［J］.山东医药，2010，50(22):51～52.

［2］ 杨育才，刘晶，万里，等.miRNA－192对非小细胞肺癌A549/DDP细胞顺铂耐药性的影响［J］.临床肿瘤学杂志，2014，09(6):481～485.

［3］ 兰海，林丛尧，袁宏银，等.miR－21调控非小细胞肺癌细胞增殖和凋亡的机制研究［J］.中华肿瘤杂志，2011，33(10):742～746.

［4］ 俞辰逍，段卫明，周新文，等.LyGDI在非小细胞肺癌细胞A549中的辐射抗性机制研究［J］.中华放射医学与防护杂志，2014，34(6):411～414.

［5］ 于筱舟，魏枫，闫帆，等.非小细胞肺癌组织中低表达microRNA表达谱［J］.中国肿瘤临床，2014，11(5):291～295.

［6］ Wormald PJ.The aggernasi cell:the key to understanding the anatomy of the frontal recess［J］.Otolaryngol Head Neck Surg，2011，129:497～507.

［7］ Choi BI，Lee HJ，Han JK，et al.Detection of hypervascular nodular hepatocellur carcinomas:value of triphasic helical CT compared with iodized oil CT［J］.AJR，2010，157(2):219～224.

［8］ Khan M A，Com BS CS，BRUNT EM，et al.Position emission tomography scanning in the evaluation of hepatocellular carcinoma［J］.Ann Nucl Med，2009，14(2):121～126.