不同产地加工方法对太子参质量的影响

吴增光，冯 果，2* ，刘 文，李 玮，张建锋，张石宇，郑雪莹

(1．贵阳中医学院，贵州贵阳550002;2．天津中医药大学，天津300193)

太子参为石竹科植物孩儿参Pseudostellaria heterophylla(Miq．)Pax ex Pax et Hoffm．的干燥块根，具有益气健脾、生津润肺的功效，用于脾虚体倦、食欲不振、病后虚弱、气阴不足、自汗口渴、肺燥干咳［1］。现代研究发现，太子参含有氨基酸、多糖、苷类、磷脂类、环肽类、挥发油等多种有效成分［2－9］，具有心肌保护作用、增强机体免疫作用、抗氧化作用、镇咳、抗菌、抗病毒、抗应激、抗疲劳、降血糖等多种药理作用［10－16］。

产地加工是形成中药品质的重要环节，不同的加工方法对太子参中主要化学成分的影响不同，2010年版《中国药典》一部收载太子参的加工方法为“夏季茎叶大部分枯萎时采挖，洗净，除去须根，置沸水中略烫后晒干或直接晒干”［1］，各地尚有晒干法、烫后晒干法、蒸后晒干法、阴干法、烘干法等加工方法，太子参产地加工方法的优选亟需进一步研究。该研究以皂苷、多糖、氨基酸、水溶性浸出物、醇溶性浸出物为评价指标，采用综合评分法优选太子参的最佳产地加工方法，为太子参的产地加工及质量控制提供参考。

1 材料与方法

1．1 仪器 TU-1810PC型紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司)、AE/240型电子天平(上海梅特勒仪器有限公司)、AVY 220型电子天平(日本岛津)、SK 8210 HP型超声波清洗机(上海科导仪器有限公司)、干燥箱(中华人民共和国上海市仪器总厂)。

1．2 药材与试药 太子参鲜药材来源于贵州省施秉县太子参种植基地，经贵阳中医学院李伟副教授鉴定为石竹科植物孩 儿 参 Pseudostellaria heterophylla(Miq．)Pax ex Pax et Hoffm．的干燥块根;葡萄糖对照品(贵州迪大生物科技有限责任公司，批号GZDD-0774)、精氨酸对照品(贵州迪大生物科技有限责任公司，批号GZDD-0886，供含量测定用)、人参皂苷Rg1对照品(中国食品药品检定研究院，批号110703-201529，供含量测定用);其余试剂为分析纯，水为蒸馏水。

1．3 产地加工方法

1．3．1 阴干法。采太子参鲜药材，洁净后置阴凉通风处阴干。

1．3．2 晒干法。采太子参鲜药材，洁净后置太阳下晒干。

1．3．3 烘干法。包括2种:①采太子参鲜药材，洁净后及时置干燥箱内于40、60、80、100℃烘干;②采太子参鲜药材，洁净后分别放置1、2、3、4、5 d 后，于60 ℃烘干。

1．3．4 蒸法。包括2种:①太子参鲜药材蒸透后，分别置干燥箱内于40、60、80、100 ℃烘干;②太子参鲜药材蒸 10、15、20 min后于60℃烘干。

1．3．5 烫法。可分为3 种方法:①分别加4、6、8、10、12 倍量水烫透后，于60℃烘干。②加8倍量水烫3 min后分别于40、60、80、100 ℃ 烘干;③加 8 倍量水分别烫 5、9 min，于60℃烘干。

1．4 指标成分的提取

1．4．1 皂苷的提取。精密称取太子参粗粉1 g，加入10倍量水饱和正丁醇后，浸泡12 h，50℃下超声提取40 min，过滤至25 ml容量瓶中，加水饱和正丁醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。

1．4．2 多糖的提取。精密称取1 g用10 ml蒸馏水浸泡24 h，超声提取2次，每次30 min，过滤，弃去残渣，合并滤液浓缩，用95%乙醇静置沉淀，过滤得到沉淀，将沉淀溶于丙酮中充分洗涤静置过夜，沉淀再次溶于无水乙醇中充分洗涤静置，待沉淀完全后将沉淀物置水浴锅中加热干燥，得到太子参多糖粗品。

1．4．3 氨基酸的提取。取太子参粉末0．05 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加70%乙醇25 ml，超声处理45 min，放冷，摇匀，滤过，收集续滤液，即得供试品溶液。

1．5 指标成分的含量测定

1．5．1 皂苷的含量测定。

1．5．1．1 对照品溶液的制备。精密称取人参皂苷Rg1对照品15 mg于10 ml容量瓶中，加入少量甲醇溶解并定容，即得1．5 mg/ml的对照品溶液。

1．5．1．2 线性关系考察。精密吸取标准溶液 0．2、0．4、0．5、0．6、0．8、1．0 ml，分别置于 10 ml具塞试管中，以1 ml甲醇作为空白，于沸水浴下挥去溶剂，精密加入5%的香草醛冰醋酸溶液(用前临时配制)0．2 ml和高氯酸0．8 ml混匀，密塞。置60℃水浴中加热15 min后取出，用流水冷却。然后精密加入冰醋酸5 ml，摇匀，于560 nm波长处测定吸光度，以吸光度值为纵坐标、浓度为横坐标，绘制标准曲线。

1．5．1．3 样品测定。按“1．4．1”制备供试品溶液，精密吸取供试品溶液0．3 ml，显色后于紫外可见分光光度计测定吸光度，计算其含量。

1．5．2 多糖的含量测定。

1．5．2．1 对照品溶液的制备。精密称取葡萄糖对照品1．36 mg，置于10 ml容量瓶中加水定容至刻度，摇匀即得浓度为0．136 mg/ml的葡萄糖对照品溶液。

1．5．2．2 线性关系考察。分别精密吸取 0．2、0．4、0．6、0．8、1．0、1．2 ml葡萄糖标准溶液于试管中，依次加入蒸馏水使终体积为2．0 ml，蒸馏水作空白对照。各管加入苯酚试液0．5 ml，摇匀，再滴加浓硫酸各 4．0 ml，沸水浴 15 min，取出放至室温，于490 nm处测定吸光度。以吸光度值为纵坐标、浓度为横坐标，绘制标准曲线。

1．5．2．3 样品测定。按“1．4．2”制备供试品溶液，精密吸取供试品溶液1．0 ml，显色后于紫外可见分光光度计测定吸光度，计算其含量。

1．5．3 氨基酸的含量测定。

1．5．3．1 对照品溶液的制备。精密称取精氨酸对照品5．02 mg置于10 ml容量瓶中加水至刻度，摇匀即得浓度为0．502 mg/ml精氨酸对照品溶液。

1．5．3．2 线性关系考察。精密吸取对照品溶液 0．5、1．0、1．5、2．0、2．5、3．0 ml于 10 ml量瓶中，加水至同体积，依次加入醋酸-醋酸钠缓冲液(pH=5．4)2．0 ml和3%茚三酮乙二醇溶液2．0 ml，沸水浴15 min，取出，加50%异丙醇至刻度，摇匀;另以3．0 ml水为空白，同法操作。在570 nm处测定吸光度，以吸光度值为纵坐标、浓度为横坐标，绘制标准曲线。

1．5．3．3 样品测定。分别取各样品按“1．4．3”制备供试品溶液，精密吸取供试品溶液1．0 ml，显色后于紫外可见分光光度计测定吸光度，计算其含量。

1．5．4 浸出物的测定。

1．5．4．1 水溶性浸出物。按2010年版《中国药典》附录XA水溶性浸出物测定方法(热浸法)对样品进行测定，计算水溶性浸出物的量。

1．5．4．2 醇溶性浸出物。按2010年版《中国药典》附录XA醇溶性浸出物测定方法(热浸法)对样品进行测定，计算醇溶性浸出物的量。

1．6 产地加工方法的优选 该试验采用多指标综合评分法［17］优选太子参的产地加工方法，以皂苷、多糖、氨基酸、水溶性浸出物、醇溶性浸出物含量为评价指标，且含量都是越高越好。因此在数据处理时引用一个综合指标“隶属度”，即指标隶属度=(指标值－指标最小值)/(指标最大值－指标最小值);根据各成分在太子参中的重要性，考虑到皂苷和多糖各占30%、氨基酸占20%、水溶性浸出物和醇溶性浸出物各占10%的权重，综合分数=皂苷隶属度×30%+多糖隶属度×30%+氨基酸隶属度×20%+水溶性浸出物隶属度×10%+醇溶性浸出物隶属度×10%，满分为1．00，计算各样品的综合评分值。

2 结果与分析

2．1 含量测定方法学考察结果

2．1．1 皂苷含量。以吸光度值为纵坐标、浓度为横坐标，绘制标准曲线，皂苷含量的回归方程为:A=29．088C－0．017 6，相关系数r=0．999 5，表明人参皂苷Rg1在0．01 ～0．16 mg/ml范围内线性关系良好;皂苷含量测定的精密度试验、稳定性试验、重复性试验的 RSD 分别为0．8%、1．2%、1．7%，均小于 3%;加样回收率试验，其平均回收率为98．66%，RSD为2．8%。

2．1．2 多糖含量。以吸光度值为纵坐标、浓度为横坐标，绘制标准曲线，多糖含量的回归方程为:A=5．378 3C－0．159 3，相关系数r=0．999 2，表明葡萄糖在0．041 8 ～0．251 0 mg/ml范围内线性关系良好;多糖含量测定的精密度试验、稳定性试验、重复性试验的RSD 分别为0．87%、0．94%、2．16%，均小于3%;加样回收率试验，其平均回收率为98．66%，RSD为2．06%。

2．1．3 氨基酸含量。以吸光度值为纵坐标、浓度为横坐标，绘制标准曲线，氨基酸含量的回归方程为:A=11．493C－0．041 9，相关系数r=0．9994，表明精氨酸在0．0251 ～0．1506 mg/ml范围内线性关系良好。氨基酸含量测定的精密度试验、稳定性试验、重复性试验的 RSD 分别为 0．09%、1．75%、2．61%，均小于3%;加样回收率试验，其平均回收率为100．02%，RSD为1．3%。

2．2 综合评分法优选最佳产地加工方法 按“1．5”项下各评价指标的含量测定方法对各样品的指标成分进行测定，并按“1．6”项下方法计算其综合评分值。从表1可得出，1号样品的产地加工方法为阴干法，综合评分值为0．401 5;2号样品为晒干法，综合评分值为0．657 1;3～12号样品为烘干法，其8号样品的综合评分值最高，为0．662 9;13～19号样品为蒸法，其19号样品的综合评分值最高，为0．746 4;20～30号样品为烫法，其24号样品的综合评分值最高，为0．601 6。在不同的产地加工方法中，以综合评分值的大小排序，从大到小的顺序为蒸法(0．746 4)﹥烘干(0．662 9)﹥晒干(0．657 1)﹥烫法(0．601 6)﹥阴干(0．401 5)，表明太子参的最佳产地加工方法为蒸法，蒸法的最佳工艺为取太子参鲜药材，蒸20 min，于60℃烘干。

表1 不同产地加工方法对太子参药材质量的影响(n=3)

3 讨论

太子参中皂苷类成分容易受生物活性酶的影响;多糖类成分难溶或不溶于水，但容易被水解成低聚糖、单糖;氨基酸类成分易溶于水，且热稳定性差，长时间加热会导致成分的损失。故不同产地加工方法对太子参药材的质量有较大的影响，在产地加工过程中，应尽快灭活新鲜太子参中的酶的活性，严格控制干燥温度和时间是太子参产地加工的关键技术所在，也是影响太子参质量的主要因素。

多成分、多指标控制中药材质量已成为发展新趋势，是中药现代化发展进程中的必然要求。该研究以太子参皂苷、多糖、氨基酸、水溶性浸出物、醇溶性浸出物作为指标成分，采用综合评分法对太子参的产地加工方法进行优选，所优选出的方法科学合理，其加工工艺简单、耗时短、加工出的药材色泽和品质好，综合评分值较高，使太子参的质量从源头上得到了控制。该产地加工方法的优选对企业及药农的规模化、产业化加工太子参药材具有一定的指导意义。

［1］国家药典委员会．中华人民共和国药典:2010年一部［S］．北京:中国医药科技出版社，2010:62－63．

［2］钟方晓，彭广．山东太子参氨基酸和微量元素分析［J］．时珍国医国药，1997，8(3):223 －224．

［3］刘训红，阚毓铭，王玉玺，等．太子参多糖的研究［J］．中草药，1993，24(3):119－121．

［4］王吉星，徐绥绪，邱峰，等．太子参化学成分的研究［J］．中草药，1992，23(6):331，336．

［5］TAN N H，ZHOU J，CHEN C X，et al．Cyclopeptides from the roots of Pseudostellaria heterophylla［J］．Phytochemistry，1993，32(5):1327 －1330．

［6］MORITA H，KAYASHITA T，TAKEYA K，et al．Cyclic peptides from higher plants，Part 15．Pseudostellarin H，a new cyclic octapeptide from Pseudostellaria heterophylla［J］．JNat Prod，1995，58(6):743 －947．

［7］MORITA H，KAYASHITA T，TAKEYA K，et al．Crystal and solution forms of a cyclic heptapeptide，pseudostellarin D［J］．Tetrahedron，1995，51(46):12539－12548．

［8］马阳，侯娅，邹立思，等．不同种质太子参核苷类成分QTRAP LC-MS/MS 分析［J］．中药材，2015，38(4):711 －714．

［9］刘义宁，易骏，陈体强．太子参挥发油化学成分研究［J］．时珍国医国药，2009，20(1):50 －51．

［10］徐雪琴，龙全江，赵剑．太子参化学成分、药理作用与产地加工技术研究［J］．现代中药研究与实践，2014，28(4):73 －75．

［11］龚祝南，王峥涛，余国奠，等．8个不同产地太子参对脾虚及免疫功能的影响［J］．中药材，2004，24(4):281 －282．

［12］刘维俊，黄光才，李汉宝，等．太子参补益作用机理的探讨［J］．南京部队医药，1992(5):51－58．

［13］SHENG R，XU X X，TANG Q，et al．Polysaccharide of Radix Pseudostellariae improves chronic fatigue syndrome induced by poly I:C in mice［J］．Evid Based Complement Alternat Med，2011，8(4):1 －10．

［14］ZHANGCL，ZHENGX X．Effects of polysaccharides from Pseudostellaria heterophylla on exercise endurance capacity and oxidative stress in forced swimming rats［J］．Sci Res Essays，2011，6(11):2360 －2365．

［15］PANG W，LIN S，DAI Q，et al．Antitussive activity of Pseudostellaria heterophylla(Miq．)Pax extracts and improvement in lung function via adjustment of multi－ cytokine levels［J］．Molecules，2011，16(4):3360 －3370．

［16］姚先梅，段贤春，吴健，等．太子参多糖对实验性糖尿病大鼠血糖、血脂代谢和肾脏病理的影响［J］．安徽医药，2014，18(1):23 －26．

［17］陈会英，周衍平．综合评分法的改进与应用［J］．农业系统科学与综合研究1996，12(1):37 －41．