H5亚型禽流感(Re-4+Re-5株)疫苗对不同禽群的免疫效果比较

陈 华 （山东省畜牧兽医信息中心 山东 济南 250032）

陈 静* 田夫林 王贵升 王苗利 孙圣福 马慧玲 孔祥华 李玉杰 徐 鸿 蔺晓月

（山东省动物疫病预防与控制中心 山东 济南）

禽流感典型病毒粒子呈球形状，直径80～120nm，平均为100nm[1]。特别是某些毒株初次分离时，常呈丝状，丝状体长短不一，长者可达数微米，但经鸡胚和细胞培养物连续传代后可变为球形[2]。禽流感(Avian influenza, AI)是禽流行性感冒的简称，它是指由禽流感病毒引起的一种动物传染病，常发生在禽，有时也发生在低等哺乳类动物，至今在人仅有偶发病例。其主要症状表现为从亚临床感染到轻重度的呼吸道感染，产蛋下降甚至严重致死性疾病，其严重程度取决于病毒毒株以及被感染禽的种类，日龄和有无并发症等因素。其中H5和H7:两个血清型可以引起高致病性禽流感(HPAI)，以传播快、发病快、死亡率高为特征，常可导致感染鸡群的全军覆没，造成严重的经济损失，被世界动物卫生组织(OIE)列为A类烈性传染病，并被列入国际卫生武器公约动物类传染病名单[3]。中致病性的主要指H9N2和 H6N8亚型毒株，其他的毒株均为低的、非致病性的。禽流感病毒不仅会给养禽、畜牧业带来灾难性的破坏，而且对公共健康也构成了严重威胁。因此，禽流感的危害已引起世界各国普遍关注。尤其自1997年香港发生高致病性禽流感后，禽流感感染人不断增多，我国内地近来人群中也出现了禽流感病死病例，流行范围不断扩大，给全球的养禽业市场造成很大冲击，同时给人类安全造成巨大威胁。

禽流感病毒是单股负链分节段的RNA病毒，属于正黏病毒科(Orthomyxoviridae)。正黏病毒科有5个属，即甲型流感病毒属(Influenza virus A)、乙型流感病毒属(Influenza virus B)、丙型流感病毒属(Influenza virus C)、索戈托病毒属(Thogoto virus)[4]和传染性鲑鱼贫血症病毒属(Isa-virus)[5]。根据其病毒核蛋白(NP)和基质蛋白(mS)抗原性的不同，可分为A、B、C 3个血清型[6]。A型流感病毒根据其致病力的不同，分为高致病性病毒(HPAIV)、中致病病毒(mPAIV)和低(或者不)致病病毒(LPAIV)3种[7]。禽流感分为非致病性、低致病性、高致病性禽流感三大类，前两类发病症状较轻，对养禽业造成的影响相对较小，属于温和性禽流感，而高致病性禽流感一旦暴发，发病率和死亡率很高，给养禽业造成毁灭性打击，同时危害人类生命安全[8]。本病主要为接触传染，水平传播，其发病受季节的影响，但又不完全受季节的限制，热冷应激常常是诱发本病的重要因素[9]。

禽流感的临床症状与病毒毒力、环境因素、并发感染有关，也与鸡的品种、鸡的年龄、鸡的性别密切相关，因而其临床表现是极不一致的[10]。鸡群常突然发病。流行初期的急性病例可不出现任何症状而死亡。病鸡表现精神沉郁，羽毛蓬乱，不愿走动；食欲减退或废绝；眼睑浮肿，冠、髯肿胀、青紫、出血、坏死；眼结膜充血，分泌物增多；鼻分泌物同时增多，常使病鸡摇头甩颈。病鸡有不同程度的呼吸道症状，咳嗽、喇鼻，打喷嚏，有喘呜音等。病鸡出现或不出现下痢；下痢者，以黄绿色、绿色稀便为主，稀便中常常伴有似血样桔红色条块物(常被误认为球虫)，尿酸盐增多。病鸡腿鳞青紫或呈紫色，有出血点；皮肤常有出血斑点。有的病鸡出现似神经症状的惊厥现象。产蛋鸡产蛋率明显下降，蛋壳褪色，出现畸形蛋、软皮蛋、砂壳蛋等，蛋壳表面胶质层内常出现大量干红斑点，以薄壳蛋为主，极易破碎。

我国从2004年起，在全国开始对存栏的禽类进行强制免疫，是预防控制禽流感流行的重要举措。在大面积集中免疫的情况下，由于候鸟和水禽在禽流感传播中具有很重要的角色，而且病毒也不断发生抗原飘移和抗原突变，其影响免疫的因素较多，免疫后抗体产生水平仍然需要进行监测和分析，从而为以后的强制免疫工作和禽流感防治工作提供有益的参考。

1 材料和方法

1.1 试验材料

1.1.1 主要试剂 鸡红细胞悬液；疫苗(国内某企业生产的H5亚型禽流感(Re-4+Re-5株)疫苗)。

1.1.2 主要耗材及仪器 96孔“V”形微量反应板、定量移液器(25μl)、滴头、微型振荡器、恒温箱、离心机等。

1.2 试验方法

1.2.1 H5亚型禽流感(Re-4+Re-5株)疫苗对肉鸭的免疫效果检测 选择1个规模化肉鸭养殖场，每场随机挑选20只肉鸭，8日龄首免H5亚型禽流感(Re-4+Re-5株)疫苗，颈部皮下注射，0.3ml/只；27日龄二免该疫苗，颈部皮下注射，0.5ml/只。分别于首免之前、首免后14d及二免后14d，采集血清通过HI试验进行H5亚型禽流感抗体检测。

1.2.2 H5亚型禽流感(Re-4+Re-5株)疫苗对肉鸡的免疫效果检测 选择1个规模化肉鸡养殖场，每场随机挑选20只肉鸡，8日龄首免H5亚型禽流感(Re-4+Re-5)疫苗，颈部皮下注射，0.3ml/只；27日龄二免该疫苗，颈部皮下注射，0.5ml/只。分别于首免之前、首免后14d及二免后14d，采集血清通过HI实验进行H5亚型禽流感抗体检测。

2 结果与分析

2.1 H5亚型禽流感(Re-4+Re-5株)疫苗对肉鸭的免疫效果检测

表1 H5亚型禽流感(Re-4+Re-5株)疫苗对肉鸭的免疫效果 (%)

由表1可知，对于免疫之前没有母源抗体的肉鸭，通过免疫H5亚型禽流感(Re-4+Re-5株)灭活疫苗，在首免后14天鸭群均产生了针对Re-4和Re-5的抗体，二免后抗体水平明显高于首免，但是免疫合格率都不高于70%，针对Re-4和Re-5的抗体平均效价均低于4log2，达不到农业部的抗体保护要求。首免和二免后14d，肉鸭对Re-4和Re-5的免疫应答反应不一致，Re-4抗体水平明显高于Re-5抗体水平，提示肉鸭对Re-4的免疫应答反应强于对Re-5的免疫应答。

2.2 H5亚型禽流感(Re-4+Re-5株)疫苗对肉鸡的免疫效果检测

表2 H5亚型禽流感(Re-4+Re-5株)疫苗对肉鸡的免疫效果 (%)

由表2可知，对于体内存在较低母源抗体水平的肉鸡，通过免疫H5亚型禽流感(Re-4+Re-5株)灭活疫苗，在首免后14天鸡群针对Re-4和Re-5的抗体水平均有所下降，但针对Re-4的抗体合格率却由15%上升到40%，而针对Re-5的抗体合格率则由10%降为0。二免后抗体水平明显高于首免，针对针对Re-4和Re-5的平均抗体水平分别达到了7.75log2和8.9log2，且每个个体的抗体效价均不低于4log2，免疫合格率均达到100%，均达到农业部的抗体保护要求。研究表明低水平的母源抗体能够影响H5亚型禽流感(Re-4+Re-5株)灭活疫苗免疫后在短期内(首免后14天)抗体水平的升高。二免后，整个鸡群的抗体水平有较大提高，Re-4、Re-5的免疫抗体效价分别提高了5.45log2、8.65log2，免疫合格率可达到100%，表明H5亚型禽流感(Re-4+Re-5株)灭活疫苗加强免疫后能够在肉鸡群产生很好的免疫保护，且鸡群对Re-4的免疫应答早于Re-5。

3 讨论

（1）从免疫家禽的种类来看，鸡的免疫效果最好，而鸭和鹅等水禽的免疫抗体水平较低。推测可能有两方面的原因：一是山东省养鸡的规模化程度和管理水平较高，免疫比较到位，而目前水禽养殖的规模化程度不高，放牧或半放牧的饲养方式，免疫难度大，免疫效果难以保证；二是目前我国使用的禽流感疫苗的种毒主要是针对鸡的防疫，没有水禽专用疫苗，可能影响到在鸭和鹅等水禽中的免疫效果。（2）针对我国使用的禽流感疫苗可能影响到在鸭和鹅等水禽中的免疫效果这一推测，本研究选择了商品肉鸭和商品肉鸡进行同样的免疫程序来比较二者的免疫抗体水平。试验结果表明目前使用的H5亚型禽流感(Re-4+Re-5株)灭活疫苗对肉鸡的免疫保护效果显著高于肉鸭。对于没有母源抗体的肉鸭，加强免疫H5亚型禽流感(Re-4+Re-5株)灭活疫苗后，虽然抗体水平明显高于首免，但是个体免疫合格率都不高于70%，针对Re-4和Re-5的抗体平均效价均低于4log2，达不到农业部的抗体保护要求，而肉鸡加强免疫H5亚型禽流感(Re-4+Re-5株)灭活疫苗后针对Re-4和Re-5的抗体水平均达到8log2左右，免疫合格率均达到100%。（3）通过抗体检测也可以发现，首免和二免后14d，肉鸭体内产生的针对Re-4的抗体水平明显高于Re-5抗体水平，表明肉鸭对Re-4的免疫应答反应明显强于对Re-5的免疫应答。同时，首免14d后，虽然肉鸡体内的针对Re-4和Re-5的抗体平均效价均略低于免疫前，但针对Re-4的抗体合格率却由15%上升到40%，而针对Re-5的抗体合格率则由10%降为0，表明鸡群对Re-4的免疫应答早于Re-5。（4）研究表明，研制针对不同家禽专用的H5亚型禽流感疫苗已经成为解决生产中提高水禽流感抗体合格率的迫切需求。

4 结论

（1）使用H5亚型禽流感(Re-4+Re-5株)灭活疫苗免疫鸡、鸭、鹅等不同家禽，对鸡的免疫抗体合格率明显高于鸭、鹅等水禽的免疫抗体合格率。（2）加强免疫H5亚型禽流感(Re-4+Re-5株)灭活疫苗可使鸡群达到100%免疫抗体合格率，但鸭群的免疫抗体合格率不理想。

[l]Elster C, Larsen K, GagnoJ, et a1.Influenza virus m 1 Protein binds to RNA through its nuclear localization signal[J].J chen viml, 1997, (78): 1589-1596.

[2]Baker AT, Varghese JN, Laver WG, et al.Three dimensional structure of neuraminidase of subtype N9 from an avian influenza virus[J].Roteins, 1987, 2(2): 111-117.