血清TWEAK与YKL-40联合检测对子宫内膜癌诊断价值的研究①

王丽娜，吴雅冬，徐春梅，李亚君

(佳木斯大学附属第一医院妇产科，黑龙江 佳木斯 154003)



血清TWEAK与YKL-40联合检测对子宫内膜癌诊断价值的研究①

王丽娜，吴雅冬，徐春梅，李亚君

(佳木斯大学附属第一医院妇产科，黑龙江 佳木斯 154003)

目的：探讨血清肿瘤坏死因子样凋亡微弱诱导剂(TWEAK)和人类软骨糖蛋白-39(YKL-40)联合检测在子宫内膜癌诊断中的应用价值。方法：采用双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)测定25例子宫内膜癌患者、25例子宫内膜增生患者及30例健康对照妇女血清TWEAK和YKL-40水平。以正常健康妇女TWEAK水平均数±1.96S(x±1.96S)作为上下临界值。YKL-40阳性标准值是以正常对照组95%可信区间值为上限。比较TWEAK和YKL-40在三组间的水平与阳性率差异。以及二者联合检测对诊断子宫内膜癌的敏感度和差异度。结果：(1)血清TWEAK含量在子宫内膜癌中的表达明显高于子宫内膜增生患者及健康对照患者。差异有统计学意义(P<0.05)。血清TWEAK含量诊断子宫内膜癌的敏感度和特异度分别为：73.34% 、83.75% 。(2)血清YKL-40含量诊断子宫内膜癌的敏感度和特异度分别为：67.71% 、80.03% 。较单独检测TWEAK敏感度低，特异度低。TWEAK和YKL-40联合检测敏感度为：81.7% 特异度为：82.19%，较单项检测TWEAK、YKL-40敏感度高，特异度较单项检测TWEAK低，高于单项检测YKL-40。结论：TWEAK可作为早期诊断子宫内膜癌的生物学标记物，TWEAK与YKL-40联合检测进一步提高了对子宫内膜癌的早期诊断。

TWEAK；YKL-40；子宫内膜癌；肿瘤标记物

子宫内膜癌(endometrialcarcinomaEC)是当今女性生殖系统主要的恶性肿瘤，在女性恶性肿瘤中所占的比例为：20%～30%[1]。发展中国家子宫内膜癌患者的5年生存率为75%，而发达国家病死率为82%，可见发展中国家子宫内膜癌发病率低于发达国家，但死亡率明显高于发达国家。研究发现EC发病与生活方式密切相关，地域不同发病率就不同。在西方国家发病率居于女性肿瘤之首，在我国占恶性肿瘤第二位，仅在宫颈癌之后[2]。近年来，国内外许多学者尝试寻求新的实验室检测指标，能在手术前给予更多的提示，以便术前作出更准确的判断。TWEAK是新近发现的一种肿瘤坏死因子(TNF)[3]。是由Chicheportiche[4]等从人的扁桃体及胎肝cDNA文库中所筛选出来的一条长约1.3kb和TNF家族成员相似的cDNA，是由200多个氨基酸组成的II型跨膜蛋白，其相对分子质量为27000[5]。经研究发现：肿瘤坏死因子样凋亡微弱诱导剂可以在多种肿瘤细胞中表达，且介导着不同的生物学活性，因此有望成为有效的早期诊断子宫内膜在的生物学标记物。本试验通过检测EC患者血清TWEAK的浓度变化，旨在探讨其在EC早期诊断中的价值及TWEAK与YKL-40联合检测对早期诊断子宫内膜癌的价值。

1 资料和方法

1.1 一般资料

选取佳木斯大学附属第一医院妇产科2013-03～2014-11住院收治的经病理检查确诊的子宫内膜癌患者25例，年龄35～82岁，平均55岁。及同期住院的子宫内膜增生患者25例，年龄18～55岁，平均43岁。门诊体检的健康妇女30例，年龄28～54岁，平均40岁。三组的血液标本作为血清对照。所有患者术前均未经放疗、化疗，无性激素服用史，否认肝炎、关节炎及近期感染史，且临床病理资料完整，实验前病人知情同并经医院伦理委员会批准。三组采血时均非月经来潮，三个组别的年龄差异没有统计学意义(P>0.05)。

1.2 实验方法

1.2.1 采集标本：取所选25例子宫内膜癌患者组手术前2～4d的血清作为标本，25例子宫内膜增生患者组同样也去治疗前的血清标本，而对照组取30例健康妇女门诊空腹体检时的肘静脉血5～7mL，将其采集的血样放在未加抗凝剂的真空采血管中。常温下静止30min，采集标本后将溶血标本剔除，封存在4℃的冰箱内封存。离心机离心(3000r/min)，离心后取上清液分别装在盛有聚丙烯的EP管内，存放于-80℃的冰箱内待测。

1.2.2 血清中TWEAK检测：采用酶联免疫吸附试验测定血清TWEAK水平，TWEAKELISA试剂盒( 美国R&D) ，按照说明书操作。

1.2.3YKL-40检测：采用(ELISA双抗体夹心法)检测，YKL-40ELISA试剂盒(武汉贝莱茵)，操作步骤详见说明书。

1.3 判断标准

采用双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)测定子宫良性疾病患者和子宫内膜癌患者血清中TWEAK的浓度,以正常健康妇女TWEAK水平均数±1.96S(±1.96S)作为上下临界值。血清YKL-40阳性标准值是以正常对照组的均值+2个标准差，即95%可信区间值上限值。

1.4 统计学方法

2 结果

2.1TWEAK水平及阳性率在子宫内膜癌组、子宫内膜增生组和健康体检组血清中对比，见表1。

表1 三组血清中TWEAK含量及阳性率的对比

如表1所示：在子宫内膜癌组，患者TWEAK血清含量明显比子宫内膜增生组和健康体检组高。(χ2=20.61，P<0.001)。然而在子宫内膜增生组和健康体检组之间差异无统计学意义。(χ2=0.53，P>0.05)。

2.2YKL-40含量及阳性率在子宫内膜癌组、子宫内膜增生组和健康体检组的对比，见表2。

表2 三组血清中YKL-40含量及阳性率的对比

2.3TWEAK、YKL-40联合检测阳性率在子宫内膜癌组、子宫内膜增生组和健康体检组比较，见表3。

表3 各组间血清TWEAK、YKL-40及两者联合

可见:TWEAK和YKL-40联合检测敏感度为：81.7% 特异度为：82.19%，与单独检测TWEAK、YKL-40相比较，二者联合检测敏感度更高。但特异度高于单项检测YKL-40,低于单项检测TWEAK。在内膜癌患者组中TWEAK和YKL-40单项检测比较的阳性率，差异是有统计学意义的(P<0.05)。同样，在内膜癌患者组中TWEAKYKL-40TEWAK+YKL-40三种检测放法比较差异有统计学意义(χ2=0.42，P<0.05)。内膜增生组中两种因子单独检测及联合检测均无统计学意义(P>0.05)。健康体检组TWEAK、YKL-40及两者联合三种检测方法阳性率比较差异无统计学意义(P>0.05)。

2.4 血清TWEAK、YKL-40在子宫内膜癌患者诊断中敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值及准确度的比较，见表4。

表4 清TWEAK、YKL-40在子宫内膜癌患者中诊断准确性的比较(%)

TWEAK及TWEAK+YKL-40诊断子宫内膜癌的特异度和敏感度有统计学意义。然而其阳性预测值及阴性预测值和准确度无统计学意义。

3 讨论

子宫内膜癌的确切的发病原因现在其实并不是很明确,很多早期患者并没有明显症状,仅在普查或常规做妇科检查时偶然被发现[6]。出现的症状大多表现为子宫出血、阴道排液等。围绝经期前后的不规则阴道出血是最主要的症状,通常被误认为是月经不调而未及时就诊,延误了最佳的治疗时机。因此早期诊断、早期治疗是恶性肿瘤患者改善预后的重要手段。

TWEAK是一种分泌性蛋白质，其结构高度保守,在人和鼠TWEAK的受体结合区有93%的氨基酸同源性[7]，并有着极其丰富的活性。比如它可以促进新生血管的生成，并起着调节免疫反应的作用[8～10]。它还可以诱导血管内皮生长因子(VEGF)和IL-8的生成[11]。大量研究表明：TWEAK可以在多种肿瘤细胞中表达，且介导着不同的生物学活性，因此有望成为有效的早期诊断子宫内膜在的生物学标记物。本研究显示：子宫内膜癌患者TWEAK阳性率和含量远远高于健康对照组和内膜增生组，表明TWEAK可以作为检测子宫内膜癌的新兴肿瘤标记物。我们通过本实验的可以得出结论：认为血清TWEAK与YKL-40均是子宫内膜癌的肿瘤标记物，且二者联合检测对子宫内膜癌的早期诊断、进一步评估及完善预后等多方面具有重大意义，将对子宫内膜癌的早期筛查奠定重要的实验基础。

[1]JemalA,BrayF,CenterMM,etal.Globalcancerstatistics[J].CACancerJClin，2011，61:69-90

[2]佟丽波,王晶.KLK7蛋白及E-钙黏蛋白在子宫内膜癌中的表达及意义[J].黑龙江医药科学，2013，36(4):16-17[3]BurklyLC,MichaelsonJS,HahmK,etal.TWEAKingtissuere-modelingbyamultifunctionalcytokine:roleofTWEAK/Fn14path-wayinhealthanddisease[J].Cytokine, 2007,40(1):1-16

[4]ChicheporticheY，BourdonPR，XuH，etal.TWEAK，anewsecretedligandinthetumornecrosisfactorfamilythatweaklyinducesapoptosis[J].JBiolChem，1997，272(51)：32401-32410

[5]WileySR，CassianoL，LoftonT，etal.AnovelTNFreceptorfamilymemberbindsTWEAKandisimplicatedinangiogenesis[J].Immunity，2001，15(5)：837-846

[6]赵冬梅,佟丽波,卢北燕,等.Bcl-2和Cox-2在子宫内膜癌中的表达[J].黑龙江医药科学，2009，32(5):24-25

[7]LynchCN,WangYC,LundJK,etal.TWEAKinducesan-giogenesisandproliferationofendothelialcells[J].JBiolChem,1999,274(13):8455-8459

[8]KimSH,KangYJ,KimWJ,etal.TWEAKcaninducepro-inflam-matorycytokinesandmatrixmetalloproteinase-9inmacrophages[J].CircJ, 2004,68(4):396-399

[9]KamijoS,NakajimaA,KamataK,etal.InvolvementofTWEAK/Fn14interactioninthesynovialinflammationofRA[J].Rheumatol-ogy(Oxford), 2008,47(4):442-450

[10]DonohuePJ,RichardsCM,BrownSA,etal.TWEAKisanendothe-lialcellgrowthandchemotacticfactorthatalsopotentiatesFGF-2andVEGF-Amitogenicactivity[J].ArteriosclerThrombVascBiol,2003,23(4):594-600

[11]HosokawaY,HosokawaI,OzakiK,etal.Proinflammatoryeffectsoftumournecrosisfactor-likeweakinducerofapoptosis(TWEAK)onhumangingivalfioblasts[J].ClinExpImmunol, 2006,146(3):540-549

王丽娜(1987～)女，黑龙江哈尔滨人，在读硕士研究生。

吴雅冬(1968～)女，黑龙江佳木斯人，硕士，副主任医师，硕士研究生导师。E-mail：531188918@qq.com。

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1008-0104(2015)03-0066-02

2014-12-01)