DKK-3基因甲基化在胃癌病情及预后评估中的价值

孔繁静(湖北省荆州市第二人民医院消化内科 434000)



DKK-3基因甲基化在胃癌病情及预后评估中的价值

孔繁静(湖北省荆州市第二人民医院消化内科 434000)

目的 研究胃镜活检组织Dickkopf相关蛋白(DKK-3)基因甲基化在胃癌病情及预后评估中的价值。方法 采用甲基化特异性聚合酶链反应检测胃癌患者肿瘤组织、癌旁正常组织及健康人胃镜活检组织的DKK-3基因甲基化，比较不同临床病理因素中DKK-3基因甲基化的差异，分析3年生存率与DKK-3基因甲基化的关系。结果 观察组研究对象肿瘤组织DKK-3基因甲基化率显著高于癌旁正常组织和健康对照组研究对象正常组织，差异有统计学意义(P<0.05)，DKK-3基因甲基化率在癌旁正常组织和健康对照组研究对象正常组织差异无统计学意义(P>0.05)。观察组胃癌患者肿瘤组织中DKK-3基因甲基化率在性别、年龄、病变部位、肉眼形态、幽门螺杆菌感染和病理类型中差异无统计学意义(P>0.05)，在分化程度、肿瘤直径、淋巴结转移、远处转移和TNM分期中差异有统计学意义(P<0.05)。DKK-3基因甲基化胃癌患者3年生存率为23.8%，未甲基化胃癌患者3年生存率为52.6%，DKK-3基因甲基化胃癌患者3年生存率显著高于未甲基化患者，差异有统计学意义(P<0.05)。结论 胃癌患者胃镜活检组织DKK-3基因甲基化率越高则病情越重、预后越差，可作为胃癌病情及预后评估的标志物。

胃癌； 胃镜； Dickkopf相关蛋白； 病情； 预后

胃癌的发病机制与基因表达异常密切相关，其中甲基化导致抑癌基因表达沉默是目前研究的热点，有研究表明其可作为胃癌病情及预后评估的标志物[1-2]。Dickkopf相关蛋白3(DKK-3)具有抑制细胞增殖的作用,在越来越多的肿瘤中可检测到其表观遗传学改变[3]。本研究检测胃癌患者和健康人胃镜活检组织DKK-3基因甲基化，研究DKK-3基因甲基化在胃癌病情及预后评估中的价值，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 在研究选择2009年1月至2011年6月在本院胃镜检查的胃癌患者作为研究对象(观察组)，入选标准：(1)经症状体征、CT增强、胃镜和(或)手术切除标本病理学检查确诊为胃癌；(2)首次诊治患者，排除既往行手术、放疗和化疗及合并其他肿瘤。观察组研究对象80例，男46例，女34例；平均年龄(53.5±5.9)岁。另选择同期健康体检的80例健康人为对照(对照组)，男45例，女35例；平均年龄(53.2±5.4)岁。两组研究对象性别和年龄差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。

1.2 DKK-3基因甲基化检测 观察组胃癌患者取肿瘤组织和癌旁正常组织，对照组健康人取正常胃黏膜。采用甲基化特异性聚合酶链反应(PCR)检测观察组胃癌肿瘤组织和癌旁正常组织、对照组健康人胃黏膜DKK-3基因甲基化，采用Methyl Primer Express v1.0设计引物，引物序列见表1。PCR循环条件为：95 ℃预变性10 min，95℃变性45 s，63 ℃退火30 s，72 ℃延伸30 s，共28个循环，最后一轮72 ℃延伸8 min。最后PCR产物行琼脂糖凝胶电泳显影。

表1 MSP检测DKK-3基因甲基化引物序列

1.3 统计学处理 采用SigmaPlot12.0进行统计学分析。观察组胃癌患者DKK-3基因甲基化在不同临床病理因素中的差异采用χ2检验，检验水准α=0.05，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 DKK-3基因甲基化 观察组研究对象肿瘤组织中DKK-3基因甲基化42例，甲基化率为52.5%，癌旁正常组织中1例DKK-3基因甲基化，甲基化率为1.3%，对照组研究对象未检测到DKK-3基因甲基化，甲基化率为0.0%，观察组研究对象肿瘤组织DKK-3基因甲基化率显著高于癌旁正常组织和对照组研究对象正常组织，差异有统计学意义(P<0.05)，DKK-3基因甲基化率在癌旁正常组织和对照组研究对象正常组织差异无统计学意义(P>0.05)。

2.2 DKK-3基因甲基化与临床病理因素的关系 见表2。观察组胃癌患者肿瘤组织中DKK-3基因甲基化率在性别、年龄、病变部位、肉眼形态、Hp感染和病理类型中差异无统计学意义(P>0.05)；在分化程度、肿瘤直径、淋巴结转移、远处转移和TNM分期中差异有统计学意义(P<0.05)。肿瘤直径大、有淋巴结转移、有远处转移和TNM分期晚的患者DKK-3基因甲基化率显著高于肿瘤直径小、无淋巴结转移、无远处转移和TNM分期早的患者。

表2 不同临床病理因素中DKK-3基因甲基化差异(n)

续表2 不同临床病理因素中DKK-3基因甲基化差异(n)

2.3 DKK-3基因甲基化与3年生存率的关系 对观察组胃癌患者随访3年，DKK-3基因甲基化胃癌患者3年生存率为23.8%，DKK-3基因未甲基化胃癌患者3年生存率为52.6%，DKK-3基因甲基化胃癌患者3年生存率显著高于未甲基化患者，差异有统计学意义(P<0.05)。

3 讨 论

DKK-3基因属于Dickkopf家族成员，作为经典的Wnt信号传导通路拮抗因子，具有抑制细胞增殖的作用，在越来越多的肿瘤中发现其表观遗传学表达沉默与病情及预后密切相关[4]。甲基化是表观遗传学最常见的转录前调控机制，甲基化CG自身或结合甲基结合蛋白后可阻遏转录因子结合至基因启动子，从而抑制基因表达，是继基因突变、单核苷酸多态性后的研究热点[5]。杨子荣等[6]采用组织芯片检测胃癌中DKK-3基因表达，发现其表达水平显著低于健康人。基于基因表达法则，推测DKK-3的表观遗传学表达沉默可能与胃癌的发病机制、病情及预后紧密相关。本研究中观察组研究对象肿瘤组织中DKK-3基因甲基化42例，甲基化率为52.5%，癌旁正常组织中1例DKK-3基因甲基化，甲基化率为1.3%，对照组研究对象未检测到DKK-3基因甲基化，甲基化率为0.0%，观察组研究对象肿瘤组织DKK-3基因甲基化率显著高于癌旁正常组织和对照组研究对象正常组织，差异有统计学意义(P<0.05)；DKK-3基因甲基化率癌旁正常组织和对照组研究对象正常组织中差异无统计学意义(P>0.05)。这些证据证实DKK-3在胃癌中存在高甲基化表达沉默状态，推测其可能在胃癌的病情及预后评估中具有重要临床价值。

传统的用于评估胃癌病情及预后的常见指标有肿瘤分化程度和TNM分期，其中分化程度低表示肿瘤恶性程度高，TNM分期越晚预示预后越差，可客观准确地反映肿瘤的病情及预后[7]。本研究中，观察组胃癌患者肿瘤组织中DKK-3基因甲基化率在分化程度、肿瘤直径、淋巴结转移、远处转移和TNM分期中差异有统计学意义(P<0.05)，肿瘤直径大、有淋巴结转移、有远处转移和TNM分期晚的患者DKK-3基因甲基化率显著高于肿瘤直径小、无淋巴结转移、无远处转移和TNM分期早的患者。这些证据表明DKK-3基因甲基化与胃癌患者的病情密切相关，为临床胃癌病情评估提供客观科学的证据。进一步研究发现，DKK-3基因甲基化胃癌患者3年生存率为23.8%，DKK-3基因未甲基化胃癌患者3年生存率为52.6%，DKK-3基因甲基化胃癌患者3年生存率显著高于未甲基化患者，差异有统计学意义(P<0.05)，表明DKK-3基因甲基化的胃癌患者预后差于未甲基化患者。

目前基因与胃癌病情及预后均为对手术切除的病理标本检测，其最大不足为无法在术前提供客观证据，因此能在术前评估病情及预后的分子标志物具有重要意义[8]。胃镜活检组织与传统病理标本相比，能在术前提供分子水平的证据，加上其标本取得手段简单方便，因此具有更广泛的临床价值。

[1]Chen R,Zhuge X,Huang Z,et al.Analysis of SEMA3B methylation and expression patterns in gastric cancer tissue and cell lines[J].Oncol Rep,2014,31(3):1211-1218.

[2]Liu J,Zhu X,Xu X,et al.DNA promoter and histone H3 methylation downregulate NGX6 in gastric cancer cells[J].Med Oncol,2014,31(1):817-821.

[3]陶累累.Wnt信号通路拮抗因子DKK-3在肿瘤中的研究进展[J].临床肿瘤学杂志，2012，17(8)：752-755.

[4]李振华，高小林，于秀月，等.多基因甲基化检测在尿路上皮癌中作用的研究[J].中国医科大学学报，2013，42(7)：648-652.

[5]陆海一，林兰，刘继斌.拮抗Wnt信号通路的CpG岛甲基化表型在肝癌预后中的临床价值[J].现代检验医学杂志，2013，28(6)：22-25.

[6]杨子荣，董卫国，樊利芳，等.组织芯片检测Dickkopf-3在胃癌中的表达及临床意义[J].中华消化杂志，2009，29(8)：571-573.

[7]王来奎，曾和平，李桢.老年及中青年患者胃癌临床表现及预后对比观察[J].山东医药，2013，53(18)：43-45.

[8]叶琼，涂焕平，蒋义，等.Endoglin和脾酪氨酸激酶在胃癌组织中的表达及意义[J].中华实验外科杂志，2013，30(2)：227-228.

Value of DKK-3 gene methylation for evaluating disease condition and prognosis in gastric cancer

KONGFan-jing

(DepartmentofGastroenterology,JingzhouMunicipalSecondPeople′sHospital,Jingzhou,Hubei434000,China)

Objective To study the value of Dickkopf-related protein-3(DKK-3) gene methylation by gastroscopy biopsy for evaluating the disease condition and prognosis in gastric cancer.Methods The methylation specific PCR was used to detect the DKK-3 gene methylation by gastroscopy biopsy in gastric cancer tissue,paracancerous normal tissue and healthy controls.The DKK-3 methylation rates were compared among different clinicopathological factors.Results The DKK-3 methylation rate in the tumor tissues of the observation group was significantly higher than that in the paracancerous normal tissues of the observation group and the healthy contol group,the differences were statistically significant(P<0.05).The DKK-3 methylation rates had no statistical differrences in the gender,age,lesion position,gross morphology,Hp infection and pathological type in the cancerous tissue of the observation group,but the differences in the differentiation degree,caner diameter,lymph node metastasis,distant metastasis and TNM staging were statisticlly significant(P<0.05).The 3-year survival rate was 23.8% in the gastric cancer patients with DKK-3 methylation and 52.6% in the patients without DKK-3 methylation,which indicated that the 3-year survival rate in the patients with DKK-3 methylation was significantly lower than that without DKK-3 methylation,the difference was statistically significant(P<0.05).Conclusion The higher the DKK-3 methylation rate by gastroscopy biopsy,the poor the prognosis,so DKK-3 methylation may serve as the marker for evaluating the disease condition and prognosis.

gastric cancer; gastroscopy; DKK-3; disease condition; prognosis

孔繁静，女，本科，主治医师，主要从事消化内科疾病的诊治。

10.3969/j.issn.1672-9455.2015.09.029

A

1672-9455(2015)09-1253-03

2014-11-05

2015-01-15)