A205B亚型伴抗-A1抗体致配血不合1例

董 磊，李双玉，李立新，安仕萍(天津市血液中心 300110)



·案例分析·

A205B亚型伴抗-A1抗体致配血不合1例

董 磊，李双玉，李立新，安仕萍(天津市血液中心 300110)

A205B亚型； 红细胞血型； 聚合酶链反应； 安全输血

输血已成为临床治疗疾病的重要手段,特别适用于急慢性出血性疾病、外伤出血等疾病的治疗。输血具有风险性，ABO错型输注会引起严重的溶血性输血反应，所以输血前进行正确的ABO血型定型是保证临床输血安全的重要手段[1]。作者在工作中发现1例交叉配血不合的患者血液标本，经血清学检查发现其血型正反定型不符合一般的血型表型规律。因此采用聚合酶链反应-序列特异性引物法(PCR-SSP)基因分型技术及血清学方法对该血液标本ABO血型进行了正确的鉴定,有效地指导了临床输血。现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 患者,女,62岁,2014年1月因子宫癌入住本市某医院,患者血红蛋白(Hb)42 g/L，申请输血。医院发现交叉配血不合，主侧出现弱凝集，送至本实验室进行检测。经询问医院及患者家属得知，该患者在40 d前曾输注AB型悬浮红细胞4 U。

1.2 仪器与试剂

1.2.1 血清学检查 正定型单克隆抗-A、抗-B、抗-AB购自上海血液生物制品公司(批号为20130612)；反定型A1细胞、B细胞、O细胞购自上海血液生物制品公司(批号为2014013003)；抗A1购自上海血液生物医药有限公司(批号为20131101)；抗-H购自上海血液生物医药有限公司(批号为20130922)；抗-D购自Bio-Rad公司(批号为2246170-00)；微柱凝胶配血卡购自Bio-Rad公司(批号为50531.83.07)；抗体筛查细胞购自 Sanquin公司(批号为8000197754)；DTS-6B离心机购自北京时代北利公司；ID-Incubator 37 SⅠ孵育器购自DiaMed公司；ID-Centrifuge 12 SⅡ离心机购自DiaMed公司。

1.2.2 序列特异性引物基因分型 DNA提取试剂盒购自北京天根生化科技有限公司(批号为M2023)；人类ABO血型-A亚型基因分型检测试剂盒购自天津秀鹏生物技术开发有限公司(批号为201312007)；人类ABO血型基因检测试剂盒购自天津秀鹏生物技术开发有限公司(批号为201318001)。

1.2.3 DNA电泳 DNA Mark DL2000 TaKaRa购自大连宝生物公司(货号为D501A)。

1.3 方法

1.3.1 ABO血型正反定型、Rh血型鉴定、吸收放散试验效价测定、抗体筛查均严格按照文献[2]方法进行操作。

1.3.2 基因组DNA提取及血型基因分型严格按照产品说明书提供的方法操作。PCR扩增体系为20 μL，循环参数为96 ℃ 2 min；96 ℃ 20 s，68 ℃ 60 s，5个循环；96 ℃ 20 s，65 ℃ 45 s，72 ℃ 30 s，10个循环； 96 ℃ 20 s，62 ℃ 45 s，72 ℃ 30 s，15个循环；72 ℃ 1 min。

1.3.3 DNA电泳 提取10 μL PCR扩增产物在2%琼脂糖凝胶上以220 V电压电泳30 min，在紫外灯下照相并观察电泳结果。

2 结 果

2.1 血清学鉴定结果 ABO血型鉴定结果(表1)显示患者血型正定型为非正常AB型，有可能为亚型；反定型A1细胞有弱凝集，提示患者血清中含有抗-A1抗体；RhD 阳性。

表1 患者血型鉴定结果

注：+表示阳性，-表示阴性。

2.2 抗体筛查试验 患者血清与(Ⅰ号、Ⅱ号和Ⅲ号)抗筛细胞在盐水介质和卡式凝胶中均不反应，未检出不规则抗体。

2.3 吸收放散试验及效价测定 将患者红细胞用生理盐水洗涤5次，取压积红细胞分别与抗-A、抗-B血清等体积混匀，放置在4 ℃冰箱吸收1 h，每15分钟混匀1次。抗-A效价由1∶128降为1∶64，抗-B效价由1∶128降为0。再将吸收后的红细胞加等体积生理盐水，放置在56 ℃水浴箱中，每20秒混匀1次，放散10 min。检测放散液中抗-A效价为1∶8，抗B效价为1∶2。试验同时以正常AB型红细胞作对照。试验结果显示患者红细胞A抗原吸收力弱，放散力强，符合ABO亚型的基本特征。取患者血清与A1红细胞等体积混合，放置在4 ℃冰箱吸收1 h，每15分钟混匀1次，吸收后的血清与A1细胞、O细胞均无反应；56 ℃放散后，其放散液与A1细胞呈弱阳性(+)反应，证明患者血液中含有抗-A1抗体。

图1 人类ABO血型基因检测试剂结果

2.4 基因分型鉴定结果 人类ABO血型基因检测试剂结果为A205B亚型(图1)，人类ABO血型-A亚型基因分型检测试剂结果为A205(图2)。

注：MARKER 片段大小从上至下分别为1 000、700、500、400、300、200、100 bp。

图2 人类ABO血型-A亚型基因分型检测试剂结果

3 讨 论

ABO血型是人类输血、器官移植、遗传多态性分析最为重要的红细胞血型系统，常见有A、B、O、AB 4种表型,人群中也发现有一定数量的ABO亚型的存在，主要表现为抗原减弱或在血型鉴定中正反定型不一致[3]。A型含有最多的亚型，包括A1、A2、A3、Ax、Aend、Am等[4]。向东等[5]报道了上海地区最常见的亚型为A2和A2B，虽然ABO亚型在人群中的频率不高，但由于临床检测人群数量较大，因此在临床实际工作中常会遇到ABO亚型引起的血型定型或配血困难。22%～35%的A2B亚型血清中有抗-A1抗体，该抗体大多数情况下无临床意义，只有在37 ℃有反应的抗-A1抗体，才考虑具有临床意义[6]。

在该例患者血型研究中，血清学试验提示患者血清中含有抗-A1抗体，该抗体在37 ℃具有生物活性，可以造成红细胞血型正反定型不符以及交叉配血不合。经吸收放散试验及DNA基因分型试验确定该患者血型为A205B亚型，建议临床为其输注O型RhD阳性的洗涤红细胞，患者输血后无不良反应发生。

因此对于ABO亚型患者的输血治疗方案[7]，输注红细胞时应尽量选择O型洗涤红细胞；输注血浆或冷沉淀应选择AB型或亚型对应的正常血型；输注血小板应选择亚型对应的正常血型。增加输血前常见ABO亚型的筛选[8]，可以避免不规则ABO抗体的漏检，降低输血反应发生的风险，提高临床输血治疗效果。

[1]许志远，王涛.北京地区献血人群ABO亚型研究[J].北京医学,2013,35(8):712-714.

[2]李勇，马学严.实用血液免疫学血型理论和实验技术[M].北京：科学出版社，2006：341-479.

[3]林甲进,朱碎永.A2B亚型分子机制研究及其家系分析[J].中华检验医学杂志,2013,36(3):261-262.

[4]郎兴莹,尹建平.ABO血型基因研究进展[J].中国输血杂志,2010,23(12):1078-1082.

[5]向东,刘曦,郭忠慧，等.上海地区中国人群中ABO亚型的研究[J].中国输血杂志,2006,19(1):25-26.

[6]高峰.输血与输血技术[M].北京：人民卫生出版社，2003：65.

[7]孙晓琳,关晓珍,于洋，等.36例ABO血型亚型检测及血清学分析[J].临床输血与检验,2012,14(3):215-217.

[8]马红丽,刘红冰,许秀荣.输血前开展A2/A2B亚型和Rh弱D血型检测的临床意义[J].临床血液学杂志,2011,24(12):707-708.

10.3969/j.issn.1672-9455.2015.01.061

B

1672-9455(2015)01-0142-02

2014-04-09

2014-06-22)