妥曲珠利对人工感染鸡柔嫩艾美尔球虫病的临床治疗试验

范建华，韦玉勇，俞燕，何友义，徐步*，卜仕金

(1.中国农业科学院家禽所，江苏扬州，225125；2.扬州大学，江苏扬州，225009；3.江苏威泰龙生物科技有限公司)



妥曲珠利对人工感染鸡柔嫩艾美尔球虫病的临床治疗试验

范建华1，韦玉勇1，俞燕1，何友义3，徐步1*，卜仕金2

(1.中国农业科学院家禽所，江苏扬州，225125；2.扬州大学，江苏扬州，225009；3.江苏威泰龙生物科技有限公司)

为比较、测定国内厂家生产的妥曲珠利可溶性对鸡球虫病的治疗效果，试验设计三个剂量组，并以德国拜耳公司生产的百球清作为药物对照，进行饮水治疗人工感染艾美尔球虫病，一日2次，连用3 d。结果表明，受试药物的高(0.75 g/L)、中(0.5 g/L)剂量组，能显著降低球虫病感染引起的死亡率、血便、盲肠病变，并提高相对增重率(P<0.05)。推荐国内厂家生产的妥曲珠利可溶性粉最佳临床治疗用法为：剂量0.5 g/L，连续饮水给药3 d。

妥曲珠利可溶性粉；鸡柔嫩艾美尔球虫病；临床疗效

鸡球虫病是当前养鸡业最常见的，也是危害较严重的疾病之一，特别是在平养式肉鸡中造成的危害更为显著，全世界每年因鸡球虫病造成的经济损失可高达数亿计美元[1]。目前用于鸡球虫病治疗的药物较多，其中三嗪类抗球虫药妥曲珠利，是目前用药浓度最低的一种抗球虫药，广谱、高效、低毒，可作用于球虫细胞的各个发育阶段，具有干扰球虫细胞核的分裂及线粒体的作用，广泛用于预防和治疗鸡球虫病[2]。妥曲珠利最早是德国拜耳公司于20世纪80年代开发的动物专用的抗球虫药物，商品名为百球清。我国1999年批准可引进原料药用于生产，21世纪初才有合成研究。目前国内兽用妥曲珠利主要有预混剂和饮水粉剂，然而许多厂家生产的妥曲珠利制剂要么是水溶性不好，要么是含量或稳定性不够[3]。国内将妥曲珠利成功制得10%钾盐可溶性粉剂，为进一步验证该制剂的鸡球虫病的防治效果，特进行如下临床治疗试验。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 药品 受试药：10%妥曲珠利可溶性粉，由国内某兽药厂提供。对照药：德国拜耳公司的百球清，5%妥曲珠利水溶液，推荐用法与用量为：混饮，每1 L饮水加本品1 mL，连用3 d。

1.1.2 试验虫株 柔嫩艾美耳球虫强毒株，由南京农业大学寄生虫病教研组惠赠。

1.1.3 主要试剂及培养基 重铬酸钾，胰蛋白酶，无水乙醇等均购自上海生工生物制剂有限公司。

1.1.4 试验动物 200只1日龄苏禽黄羽肉鸡，购自扬州翔龙禽业发展有限公司。在无球虫环境中饲养，饮水为清洁凉开水，试验前7d随机取粪便经显微镜观察，确认无球虫感染后作为试验用鸡。

1.2 方法

1.2.1 虫株复壮 试验前取柔嫩艾美耳球虫卵囊悬浮液，3000 r/min离心10 min，弃去上清，再用纯化水3000 r/min，10 min清洗3次，弃去上清，沉淀物即为纯化卵囊。攻毒前卵囊计数5×104/mL，并于9日龄选6只鸡，每只鸡口服0.5 mL。5 d后收集感染粪便，在自来水下反复冲洗，分别过60目、100目和260目滤筛，随后自然沉淀4～5 h，取上清用10倍体积的饱和生理盐水漂浮虫卵，再3000 r/min离心10 min，沉淀物按1:1加2.5%的重铬酸钾，在28 ℃的电热恒温箱孵育3 d。3 d后拿出室温保存，通过镜检观察为孢子化虫卵，方可用于攻毒虫株。

1.2.2 试验分组及处理 苏禽黄羽肉雏鸡饲喂至14日龄后，从中挑选180只体重均匀、健康鸡作为试验对象，随机分成6组，每组30只，单羽称量初始重。试验时，取以上孵育好的孢子化卵囊，于感染对照组和受试药物组每只鸡经一次性注射器灌服0.5 mL。攻毒后2 d，各试验组均出现不同程度的血便，部分鸡羽毛蓬松，采食量显著减少。攻毒后第3天开始给药，具体分组、攻毒给药情况见表1。

表1 试验鸡分组及处理表

1.2.3 疗效评价

1.2.3.1 临床观察 用药期间每天观察各组鸡的临床症状，记录发病及死亡前况。对病死鸡进行剖检并进一步作病原学鉴定、分析，判定是否死于球虫病。停药后继续观察7 d。

1.2.3.2 存活率及增重 实验结束时分别统计各组间鸡只存活数及试验始末增重情况。存活率=(组内存活鸡数/ 组内原总鸡数)×100%,相对增重率=(试验组相对增重 / 健康对照组相对增重)×100%。

1.2.3.3 血便计分 试验期间逐日观察各组间鸡粪便变化情况，及时记录血便出现时间和肉眼观察最严重时的血便百分率。0分，100%不带血；1分，不足25%的粪便带血；2分，25%～50%的粪便带血；3分，51%～75%的粪便带血；4分，76%～100%的粪便带血。

1.2.3.4 OPG 试验期末随机采各组间鸡粪便1 g，溶于10倍超纯水中混匀稀释后，用血球计数板在显微镜下进行球虫卵囊计数，即为OPG。当OPG为0～0.1时，卵囊值为0；当OPG为0.11～1.0时，卵囊值为1；当OPG为1.1～1.9时，卵囊值为10；当OPG为2.0～5.9时，卵囊值为20；当OPG为6.0～10.9时，卵囊值为30；当OPG大于11时，卵囊值为40。

1.2.3.5 盲肠病变计分 盲肠病变计分按照Johnson和Reid[4]等5分制计分方法计分。0分为未见病变；1分为盲肠内容物正常，但内有少量散在血斑，肠壁未见增厚；2分为盲肠内容物有少量血液粘液，肠壁增厚，有多处血斑；3分为盲肠内容物有多处血液粘液，盲肠萎缩，内容物少；4分为盲肠内极度充满血液或严重溃疡，直至直肠部。病变值=每组鸡平均病变计分×10。

1.2.3.6 抗球虫卵囊指数 (ACI)根据Merck公司方法计算。ACI=(相对增重率+存活率)×100-(病变值+卵囊值)。ACI<120为试验药物无效；ACI=160～180间，为药效良好；ACI>180为药物高效。

1.2.4 试验数据统计分析 所有试验数据用Excel整理，用SPASS17.0统计软件中的 One—way ANOVA方法对各组数据进行统计分析。

2 结果与分析

2.1 试验鸡临床症状观察人 工接种毒后第3天，除健康对照组外，各组别均有少数鸡出现精神不振，食欲减退，羽毛蓬松，拉白色稀粪或鱼肠样血红色粪便。随机取阳性对照组1只鸡进行剖检，可见盲肠肿大，如拇指大小，内有液状或部分凝固的血液，黏膜面有大量出血点及出血斑，从浆膜面看非常明显，外观为暗红色瘀点，其它组织器官无肉眼可见病变。进一步对盲肠粘液进行病原分离、鉴定，微观镜下可见有球虫虫卵，说明此次人工感染球虫试验模型成功。此后10 d内(用药3 d，继续观察期7 d)又对各试验组临床症状进行了统计，结果显示治疗组较感染对照组和健康对照组有明显改善，具体见表2。

表2 各试验组试验观察期内临床症状结果表

注：“+”数量越多，表示良好程度高，“—”表示临床症状较差；血便计分是10天内观测的结果平均取值

2.2 各试验组鸡存活情况及增重 试验鸡共养了28 d，试验期末对各笼组单羽进行称重，并对照初始重进行了相对增重率及料肉比统计，结果显示除感染对照组有显著差异外(P<0.05)，其它各组间均无统计学意义(P>0.05)。同时根据表3数据又进一步对存活率进行了统计，统计结果也进一步表明了药物治疗组确实对球虫引起的肉鸡死亡有较好的控制。具体各组别鸡只存活情况及增重情况见表3。

表3 各试验组试验鸡存活率及相对增重率结果表

注：栏内同列不同上标字母表示差异显著(P<0.05)，反之差异不显著(P>0.05)，下表同

2.3 各试验组总体药效评价 试验期内，拜耳百球清和10%妥曲珠利高、中剂量组ACI值分别为187.02、182.07、182.60，均超过了180，说明受试药物高、中剂量组和药物对照组对球虫病引起的血便、盲肠病变、球虫虫卵等均有较好的防治效果，属高效药物。具体结果详见表4。

表4 各试验组药效总体评价结果表

3 小结

本次试验选用苏禽黄羽中速生长型肉鸡作为试验模型，于14日龄灌服艾美尔球虫强毒孢子化卵囊。结果显示，感染后第3天鸡开始出现精神症状及血便，对感染对照组鸡盲肠取样检测，经实验室病原分离、鉴定，确定实属球虫感染所致，证明此次人工造病成功，为进一步开展药物临床治疗试验奠定了良好基础，也为其它单位开展鸡球虫人工攻毒试验的方法设计提供了较好的参考和依据。

球虫病多发于高热、潮湿季节，临床许多药物治疗效果不明显的主要原因是，球虫的卵囊难以彻底治根和治疗药物的耐药性问题。尽管目前最有效当属妥曲珠利等三嗪类抗球虫药，但在感染最严重时期，绝非单一药物所能控制，所以本次试验治疗期选择在感染初始的第3天，以治疗兼顾预防作为本次试验的最佳方案。

从本次试验结果来看，药物治疗组均显示有效，且受试药物的高、中剂量组和药物对照组对治疗鸡球虫病疗效显著(P<0.05)。按照当量换算，这与EMEA曾报道妥曲珠利按75mg/L，连用2d，对治疗肉鸡艾美尔球虫疗效相当。国内冯秀娟[5]、王海珍[6]等也有类似药用效果报道。本次试验同时显示，各治疗组尽管对球虫感染期肉鸡的增重及料肉比有一定的改善作用，但试验结果未显示差异显著(P>0.05)，这与国内孙燕[7]、高荣琨[8]的试验结果略有差异。

结合以上试验结果及临床治疗实际成本，建议该10%妥曲珠利可溶性粉按0.5g/L的剂量饮水给药，连用3d，能有效治疗鸡柔嫩艾美尔球虫病感染。

[1] 张善芳,王海军,芮艺,等.浅谈鸡球虫病的防治[J].家畜生态学报,2006,27(6):240-243．

[2] 林洋, 张涛, 班曼曼, 等． 三嗪类抗球虫药的研究进展[J]. 河南畜牧兽医，2014,35(7)：240-243．

[3] 张萍, 季辉, 江善祥, 等. 鸡球虫防治过程中容易出现的问题[J]. 草业与畜牧，2011，(3)：36-37．

[4]JohnsonJ,ReidWM.Anticoccidialdrugs：lesinscoirngtechniquesinbatteryandfloor-panexperiments[J]．Expparasitol，1970，28：3036．

[5] 冯秀娟.妥曲珠利毒性及抗鸡球虫效果研究[D]．南京：南京农业大学，2005.

[6] 王海珍．复方抗球虫药物研制与疗效试验[D]．太原：山西农业大学，2008．

[7] 孙燕,单虎,史雪萍,等.妥曲珠利对肉鸡生长性能和免疫机能的影响[J].中国兽医杂志, 2013, 48(12): 17-19.

[8] 高荣琨, 钱锐, 赵昕, 等. 复方妥曲珠利缓释微囊的药效试验[J].山西农业大学学报自然科学版, 2013, 33(1): 54-58.

[9] 李莎, 韩利方, 黄甜,等.妥曲珠利治疗鸡球虫病用药方案的优化[J].中国动物传染病学报, 2011, 19(6): 36-39.

[10]宋宏晓,王天奇,闫文朝,等.癸氧喹酯与妥曲珠利抗斯氏艾美耳球虫洛阳分离株效果比较[J]. 黑龙江畜牧兽医, 2014, 11:49.

[11]岳良平, 温福利, 周维, 等. 妥曲珠利对仔猪生长及球虫感染的影响[J].动物医学进展,2014, 35(5):127-131.

[12]王慧珍, 刘雅红, 沈祥广, 等. 妥曲珠利-地克珠利复方溶液对鸡球虫病的疗效和安全性评价[J]. 广东农业科学, 2013, 40(18): 105-107.

(编 辑：侯向辉)

Clinic Treatment Test of Toltrazuril Soluble Powder on Chicken Eimeria Tenellaby Artificial Inducement

FAN Jian-hua1, WEI Yu-yong1,YU yan1, HE You-yi3, XU Bu1*,BU Shi-jin2

(1.Poultrylnstitute，ChineseAcademyofAgriculturalSciences,Yangzhou,Jiangsu225125，China;2.YangzhouUniversity,Yangzhou,Jiangsu225009，China; 3.JiangsuWeitailongBiologicalTechnologyCo.,Ltd,Taizhou,Jiangsu225000，China)

To study the effects of toltrazuril soluble powder produced by a domestic manufacturer on curing chicken eimeriatenella infected artificially, the experiment was designed 3 drug dosage groups, and toltrazuril from Bayer company as a drug control. All tested drugs administered by drinking water twice a day, for 3 days. The results showed the high dosage group(0.75 g/L), the middle(0.5 g/L)and the drug control group had distinguished effects on reducing death, bloody stool, lesions of the appendix, and increasing weight gain rate (WGR) (P<0.05). Accordingly, the dosage of 0.5 g/L Toltrazuril soluble powder from the manufacturers was recommended as the best usage by continuous drinking water administration for 3 days.

toltrazuril soluble powder；eimeriatenella；clinical effect

范建华，从事兽医药理和青理学研究及新兽药研发。

徐步。E-mail: bu-xu@yahoo.com

2015-06-08

A

1002-1280 (2015) 08-0024-04

S859.796