蜂蜜对急性酒精中毒大鼠的解酒作用研究

梁璐璐，王影姣，金小宝

(广东药学院基础学院/广东省生物活性药物研究重点实验室，广州 510006)

急性酒精中毒是指由于一次过量饮酒而引起的中枢神经系统由兴奋转为抑制的状态［1］，严重者可引起急性胃出血、急性胃炎、急性肝炎、高血压等甚至死亡。由于饮酒而引起的相关问题是仅次于心血管疾病、肿瘤的第三大公共卫生问题［2］，因此，研发解酒产品有很好的应用前景。《中国药典》［3］记载，蜂蜜可以“补中、润燥、止痛、解毒”。有文献报道，蜂蜜能够促进酒精的分解吸收和减轻饮酒带来的头痛症状［4］，很多解酒保健品中都添加了蜂蜜组分。但是，蜂蜜解酒的物质基础及其可能的作用机制尚未阐明。本研究拟探讨蜂蜜是否对急性酒精中毒大鼠具有解酒作用，并对其可能的作用机制进行初步探讨。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验动物 SPF 级雄性SD 大鼠，体质量为180—200g，由广州中医药大学(大学城)实验动物中心提供，合格证号SCXK (粤)2013-0020。屏障系统动物房，每笼放养4 只，每天接受12h 光照/12h 黑暗，光照周期为8:00—20:00，动物可以自行摄取标准饲料和清洁用水，适应性喂养3d 后启用。实验室室温控制在(22±3)℃，相对湿度为50%—70%。动物实验遵守国际实验动物伦理学要求。

1.1.2 药物与试剂 食用级无水乙醇、0.9%生理盐水(广州文睿科学仪器有限公司);冠生园纯净蜂蜜(上海冠生园蜂制品有限公司，批号170508M1);维卫康鼎久解酒口服液 (北京维卫康科技有限公司，批号20140417);乙醇检测试剂盒(BioAssay Systems，USA);ADH 试剂盒(南京建成生物公司，批号:20140417);ALDH 试剂盒(北京安迪华泰科技有限公司，批号:HTBX030);总蛋白试剂盒(南京建成生物公司，批号20140417)。

1.1.3 实验仪器 高速冷冻离心机(Centrifuge 5810R，德国Eppendorf);组织匀浆机(IKA-T10，德国IKA 公司);电热恒温水箱(金坛市精达仪器制造厂);分析天平(赛多利斯科学仪器北京有限公司);分光光度计(U-2900，日本HITACHI);450nm 酶标仪(ELX808，美国BioTek 公司)。

1.2 实验方法

1.2.1 动物分组 36 只SPF 级雄性SD 大鼠，适应性喂养3d 后均禁食不禁水13h，随机分为6 组:正常组(不做任何处理)、模型组(灌服生理盐水15mL/kg)、蜂蜜低浓度组(灌服5%蜂蜜15mL/kg)、蜂蜜中浓度组(灌服10%蜂蜜15mL/kg)、蜂蜜高浓度组(灌服20%蜂蜜15mL/kg)、阳性药物对照组(根据人与动物药物剂量换算灌服鼎久解酒口服液12.5mL/kg)，每组6 只。

1.2.2 模型构建及给药 本研究参考酒精中毒大鼠模型构建的方法［5］并加以改进，采用75%食用级无水乙醇按10mL/kg 一次性灌胃法构建急性酒精中毒大鼠模型。除正常组外，其余各组均以75%食用级无水乙醇按10mL/kg 灌胃大鼠，30min 后，各治疗组分别给药，模型组灌服生理盐水。

1.2.3 动物取材及标本处理 各处理组大鼠给药2.5h后腹主动脉取血并处死大鼠，立即剖取肝脏和胃，肝脏去包膜、胃去内容物后经预冷的生理盐水反复冲洗干净，用滤纸吸干、称重，冰浴下按1∶9 加入预冷的生理盐水，用自动组织匀浆机分别制成肝组织和胃组织匀浆。收集的全血静置1h 后2 500r/min 离心15min，取上清，-20℃冰箱保存，留作血清乙醇浓度检测。制备的10%肝组织匀浆3 000r/min 低温离心15min，取上清，-20℃冰箱保存，留作肝ADH、ALDH、总蛋白含量检测。制备的10%胃组织匀浆3 000r/min 低温离心15min，取上清，-20℃冰箱保存，留作胃ADH、ALDH、总蛋白含量检测。

1.2.4 检测指标 血清乙醇浓度，严格按照乙醇检测试剂盒说明书完成检测;肝ADH 和ALDH 活性，严格按照各试剂盒说明书完成检测，结果用肝组织蛋白含量校正;胃ADH 和ALDH 活性，严格按照各试剂盒说明书完成检测，结果用胃组织蛋白含量校正。

2 结果与分析

2.1 大鼠灌酒后一般形态表现

除正常组外，各实验组大鼠灌酒5min 后均相继出现后腹拖地，共济失调(步态不稳，困倦感，动作不协调)，尿失禁，侧卧，翻正反射消失(将大鼠背部向下，保持30s 不动)等醉酒症状，说明大鼠急性酒精中毒模型构建成功。

2.2 蜂蜜对急性酒精中毒大鼠血清乙醇浓度的影响

与正常组相比，模型组大鼠血清乙醇浓度极显著升高(P＜0.01)，说明急性酒精中毒大鼠造模成功。与模型组比较，蜂蜜低、中浓度组大鼠血清乙醇浓度均显著降低(P＜0.05)，蜂蜜高浓度组大鼠血清乙醇浓度极显著降低(P＜0.01)。与阳性药物对照组相比，蜂蜜各处理组大鼠血清乙醇浓度明显升高(P＜0.01) (表1)。此结果表明，蜂蜜可降低急性酒精中毒大鼠血清中的乙醇含量，但效果不及阳性药物对照组。

表1 大鼠血清乙醇浓度(±s，n=6)

表1 大鼠血清乙醇浓度(±s，n=6)

注:与正常组相比:# P＜0.01;与模型组相比:* P＜0.05，＊＊P＜0.01;与阳性药物对照组相比:△P＜0.01

2.3 蜂蜜对急性酒精中毒大鼠肝、胃组织中的ADH 的影响

与模型组比较，蜂蜜中、高浓度组大鼠肝组织ADH活性极显著升高(P＜0.01)，蜂蜜低浓度组大鼠胃组织ADH 活性显著升高(P＜0.05)，蜂蜜中、高浓度组大鼠胃组织ADH 活性极显著升高(P＜0.01)。与阳性药物对照组相比，蜂蜜低浓度组大鼠肝组织ADH 活性显著降低(P＜0.05)，蜂蜜中、高浓度组大鼠肝组织ADH活性降低，但无统计学差异(P ＞0.05)。蜂蜜各浓度组胃ADH 活性均极显著减低(P＜0.01)(表2)。此结果提示，蜂蜜能升高急性酒精中毒大鼠肝组织和胃组织ADH活性水平，但升高的水平不及阳性药物对照组。

表2 大鼠肝、胃组织ADH 活性(±s，n=6)

表2 大鼠肝、胃组织ADH 活性(±s，n=6)

注:与模型组相比，* P＜0.05，＊＊P＜0.01;与阳性药物对照组相比，△P＜0.05，△△P＜0.01

2.4 蜂蜜对急性酒精中毒大鼠肝、胃组织中的ALDH的影响

与模型组比较，蜂蜜低浓度组肝组织ALDH 活性显著升高(P＜0.05)，蜂蜜中、高浓度组肝组织和胃组织ALDH 活性极显著升高(P＜0.01)。与阳性药物对照组相比，蜂蜜各浓度组大鼠肝ALDH 活性降低，但无统计学差异(P ＞0.05)，蜂蜜低浓度组大鼠胃ALDH 活性极显著降低(P＜0.01)，蜂蜜中、高浓度组大鼠胃ALDH活性升高，但无统计学差异(P ＞0.05) (表3)。此结果提示，蜂蜜能升高急性酒精中毒大鼠肝组织和胃组织ALDH 活性水平，但部分浓度的蜂蜜组升高水平不及阳性药物对照组。

表3 大鼠肝、胃ALDH 活性(±s，n=6)

表3 大鼠肝、胃ALDH 活性(±s，n=6)

注:与模型组相比，* P＜0.05，＊＊P＜0.01;与阳性药物对照组相比:△P＜0.01

3 讨论

解酒药物的核心是降低血液中乙醇及其代谢产物的浓度而减轻其对各器官的损伤。进入体内的酒精大部分由ADH 氧化为乙醛，乙醛由ALDH 转化为乙酸，再经三羧酸循环，最后氧化成二氧化碳和水排出体外［6］。ADH 和ALDH 主要分布在肝脏和胃中，是酒精代谢的关键酶［7，8］。本研究结果表明，蜂蜜可以通过提高肝组织和胃组织中ADH 和ALDH 活性从而降低急性酒精中毒大鼠血清乙醇浓度，具有较好的解酒作用。乙醛是导致醉酒不适以及肝损伤的主要物质［9］，肝脏中ALDH 的活性升高直接导致乙醛在肝脏中的量减少，说明蜂蜜具有潜在的护肝功效，可作为解酒护肝产品的原材料进一步研究。

蜂蜜成分复杂，含有碳水化合物、蛋白质、矿物质、维生素、有机酸、黄酮、酚酸、酶等200 多种化学物质［10］，具有抑菌、抗氧化和抗炎等活性，对治疗创伤、烧伤、胃溃疡等疾病具有一定的疗效［11，12］。众多研究发现，蜂蜜中的糖类、黄酮类和酚酸类［13-18］化学物质是其主要起作用的生物活性成分。目前已知我国传统解酒草药葛根和葛花中的主要解酒有效成分为黄酮类物质［19，20］，但尚不知道蜂蜜中的何种有效生物活性成分导致这种解酒作用。因此，蜂蜜中的有效解酒成分需要进一步研究。

4 结论

本文通过构建急性酒精中毒SD 大鼠模型，探讨了蜂蜜的解酒作用及其可能的作用机制，结果表明，蜂蜜可通过提高肝组织和胃组织中ADH 和ALDH 活性从而降低急性酒精中毒大鼠血清乙醇浓度，有较好的解酒作用。

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