叉头盒蛋白A1(FOXA1)在乳腺癌中的表达及其临床意义

田　多，汤　铜，钱　波，郑　璐，陈皖京，童婷婷

(安徽医科大学第二附属医院普外科，安徽 合肥　230601)

叉头盒蛋白A1(FOXA1)在乳腺癌中的表达及其临床意义

田多，汤铜，钱波，郑璐，陈皖京，童婷婷

(安徽医科大学第二附属医院普外科，安徽 合肥230601)

摘要：目的研究叉头盒蛋白A1(FOXA1)在良性乳腺肿瘤、乳腺癌及癌旁组织中的表达，以及与临床资料的相关性。方法采用免疫组织化学方法，检测54例乳腺癌、54例癌旁组织及20例良性乳腺肿瘤(10例纤维腺瘤和10例导管内乳头状瘤)中FOXA1的表达。分析FOXA1的表达与患者年龄、癌组织雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)、细胞增殖核抗原KI67、人类表皮生长因子受体2(HER2)、肿瘤分期、瘤体大小以及阳性淋巴结数等临床资料的关系。结果FOXA1在乳腺癌组织中的阳性率为68.5%(37/54)，癌旁组织中的阳性率为88.9%(48/54)，良性乳腺肿瘤中的阳性率为100%(20/20)，FOXA1在乳腺癌与癌旁组织间、乳腺癌与良性乳腺肿瘤间的表达差异有统计学意义(P<0.05)，而在癌旁组织与良性乳腺肿瘤间的表达差异无统计学意义(P>0.05)；FOXA1的表达与组织学分级、Ki67呈负相关，与ER、PR呈正相关；FOXA1表达在各近似分子亚型间、Luminal A亚型与非Luminal A亚型间、Luminal亚型与非Luminal亚型之间有差异性。结论乳腺癌组织中普遍表达FOXA1，Luminal A型中最高，提示FOXA1可能成为乳腺癌患者预后良好的标志物之一。

关键词:乳腺癌；癌旁组织；良性乳腺肿瘤；叉头盒蛋白A1(FOXA1)；Luminal A亚型

乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一，其发病具有明显的家族遗传倾向，与基因表达异常密切相关。临床上发现良性乳腺肿瘤如纤维腺瘤、乳管内乳头状瘤有可能发生恶变，具体的机制不明显，王红群等[1]通过回顾分析了536例乳腺癌的临床资料，并进行随访，认为良性乳腺疾病史可能是乳腺癌的病因之一。叉头盒蛋白A1(FOXA1)是转录因子叉头盒蛋白家族成员之一，既有ERa辅助激活因子的功能，又有辅助阻遏因子的功能[2-4]，在乳腺、肝脏、胰腺、膀胱、前列腺和肺等正常组织中均有表达，乳腺癌组织中FOXA1表达和分子分型相关[5-6]。FOXA1在良性乳腺肿瘤以及癌旁组织中的表达情况还未见报道。本研究检测FOXA1在良性乳腺肿瘤、癌组织以及癌旁组织中的表达，分析与临床资料的关系，探索其在乳腺癌发病过程可能的作用。

1资料与方法

1.1临床资料收集安徽医科大学第二附属医院病理科2013年1月至2014年4月经病理诊断确诊的乳腺浸润性导管癌组织标本54例。患者全部为女性，最小年龄36岁，最大年龄77岁，中位年龄48岁。54例患者全部行乳腺癌改良根治术，术前未进行过任何治疗。取同一乳腺癌患者的癌旁非恶性腺体组织作为癌旁组织，得癌旁组织标本54例，癌旁组织中乳腺结构正常，未见癌组织或炎症反应。另外收集20例良性乳腺肿瘤组织标本(导管内乳头状肿瘤标本10例、乳腺纤维腺瘤10例)。

1.2试剂FOXA1鼠抗人单克隆抗体购自美国abcam公司(ab55178)，Elivision试剂盒及DAB显色液均购自北京中山金桥生物技术有限公司。

1.3免疫组化采用Elivision二步法，FOXA1主要在细胞核着色，可以有轻微的细胞质着色。实验中应用已知阳性切片作为阳性对照，用磷酸盐缓冲液(PBS)代替一抗作为阴性对照。着色判断标准采用半定量法[5]，评分依据着色细胞的阳性比例及着色强度，在乳腺癌组织中依据癌细胞的着色百分比及强度，而在癌旁组织中则依据乳腺上皮细胞的着色百分比及强度，首先观察着色细胞的百分比(Percentage，P)：如无着色为0(P=1)，百分比在10%以下为1(P=1)，百分比在10%～20%之间为2(P=2)，百分比在20%～30%之间为3(P=3)，依此类推；其次观察着色细胞的强度(Intensity，I)：着色浅的定为1(I=1)，着色强的为3(I=3)，着色强度居中的为2(I=2)。应用P×I计算最后得分(Score，S)，S在0～3之间为FOXA1阴性，4～30之间为FOXA1阳性。从档案资料中提取ER、PR、Ki67及人类表皮生长因子受体(HER)2的表达情况。

根据肿瘤组织免疫组化ER、PR、HER2、Ki67的表达情况将乳腺癌分为4个近似分子亚型[7]：Luminal A亚型、Luminal B亚型、HER2过表达型、三阴型。

所用切片均由两名病理科医师镜下共同阅片，对FOXA1的表达情况进行着色判断。

1.4统计学方法所有数据应用SPSS 19.0统计软件包进行分析比较。采用卡方检验、Fisher确切概率法等进行率差别的显著性检验。P<0.05表示有统计学意义。

2结果

2.1FOXA1在乳腺癌组织、癌旁组织及良性乳腺肿瘤组织中的表达免疫组化结果显示， FOXA1的表达主要定位于细胞核，呈弥漫分布的棕黄色颗粒，强弱不等。FOXA1在乳腺癌组织、癌旁组织和良性乳腺肿瘤组织中均有表达，但表达程度各不相同(见图1和图2)。癌组织中FOXA1的阳性率为68.5%(37/54)，癌旁组织中FOXA1的阳性率为88.9%(48/54)，而良性乳腺肿瘤中FOXA1的阳性率为100%(见表1)。统计学分析显示：FOXA1在乳腺癌组织中的的阳性表达率明显低于在癌旁组织中的阳性表达率，其差异有统计学意义(P<0.05)；FOXA1在乳腺癌组织中的阳性表达率明显低于在良性乳腺肿瘤中的表达率，其差异有统计学意义(P<0.05)；FOXA1在癌旁组织中的阳性表达率与在良性乳腺肿瘤中的阳性表达率之间差异无统计学意义(P>0.05)。

表1　在乳腺癌组织、癌旁组织及良性乳腺肿瘤中的表达

图1FOXA1在乳腺癌及癌旁组织中表达

图2FOXA1在良性乳腺肿瘤中的表达

2.2乳腺癌组织中FOXA1的表达与临床参数的关系结果如表2，FOXA1的表达与ER、PR、组织学分级、NPI及Ki67密切关联(P<0.05)，而与年龄、临床TNM分期、瘤体大小、淋巴结转移、HER2、脉管及组织侵犯关联性不大，无统计学意义(P>0.05)。

表2　54例乳腺癌组织中FOXA1与临床资料的关系/例

2.3乳腺癌各近似分子亚型中FOXA1的表达情况FOXA1在Luminal A亚型中的阳性率为86.4%(19/22)，在Luminal B亚型中的阳性率为80.0%(4/5)，在HER2过表达型中的阳性率为70%(7/10)，在三阴型中的阳性率为41.2%(7/17)。Luminal A亚型中FOXA1表达最高，三阴型表达最低，各型表达差异有统计学意义(P<0.05)。且FOXA1在Luminal A亚型与非Luminal A亚型(B亚型、HER2过表达型和三阴型)、Luminal亚型(A亚型和B亚型)与非Luminal亚型(HER2过表达型和三阴型)间的表达差异有统计学意义(P<0.05)。见表3。

表3　FOXA1在各近似分子亚型中的表达情况

3讨论

人类FOX家族包含100多个成员，以拥有进化保守性的110个氨基酸的DNA结合区域为特征，FOXA1就是转录因子FOX家族中的一员。目前认为，在乳腺肿瘤的发生过程中有转录因子FOXA1的参与。本研究对良性乳腺肿瘤组织、乳腺癌组织及癌旁组织中FOXA1进行检测，比较其表达水平的差异，发现在恶性肿瘤组织中FOXA1的表达量明显低于癌旁组织中的表达量，而在良性乳腺肿瘤中FOXA1的表达量为100%。可以看出在癌变过程中FOXA1的表达呈下降趋势，进一步显示FOXA1与乳腺癌的发病有关，提示FOXA1表达缺失可能参与乳腺癌的发生发展。FOXA1在乳腺癌发展中的确切作用尚有争议。有研究认为FOXA1乳腺癌初期阶段起促进作用[3,8-9]，在乳腺癌发展阶段起抑制作用[10-12]。近来有学者研究认为FOXA1在乳腺癌(尤其是ER阳性乳腺癌)中的表达与良好预后相关[5-6,13-16]，本实验观察了乳腺浸润性癌中FOXA1的表达与各项临床资料的关系，结果发现FOXA1的表达与ER、PR等各项临床公认的的预后良好指标呈正相关，间接显示了FOXA1与临床预后良好相关，支持FOXA1是一个预后良好的标志物。

乳腺癌是一类具有高度异质性的肿瘤，在病理组织形态、对治疗的反应及预后等方面均存在显著的个体差异。其研究发展到今天，以临床特征和病理特点为基础的传统乳腺癌分型已不能适应现代肿瘤诊治的需要.近几年，以基因表达谱和分子生物学特征为基础提出的乳腺癌分子分型,开始逐渐走上历史舞台。2000年Perou等[17]对65例乳腺癌的8 102个基因进行分析，最先报道了乳腺癌的分子分型，包括：管腔型、基底细胞样型、HER2过表达型和正常乳腺样型。但基因芯片技术不适用于临床工作，为了解决这一问题，2011年，St Gallen公识提出，认可临床中以免疫组化技术替代分子技术进行近似的分子分型，以指导治疗选择。根据ER、PR、HER2及Ki67的免疫组化结果将乳腺癌分为4各近似分子亚型：Luminal A型(ER/或PR+，HER2-，Ki-67<14%)、Luminal B型(1：ER+或PR+HER2-，Ki-67<14%；2：ER+或PR+，HER2+)、HER2过表达型(ER-、PR-、HER2+)、三阴型(ER-、PR-、HER-)。不同的分子亚型，其临床预后明显不同，其中Luminal A型预后较好，Luminal B型次之，Her2过表达型和三阴型预后较差，因此临床上有必要识别出乳腺癌中预后较好的约占一半以上的Luminal亚型，已便后续个体化治疗。本研究中，显示FOXA1的表达与Luminal A亚型相关，FOXA1在Luminal A亚型与非Luminal A亚型之间、Luminal亚型与非Luminal亚型之间、各分子亚型之间差异明显，有统计学意义，和Badve等[5-6,10]乳腺癌的研究结果一致，认为FOXA1可以作为Luminal A亚型的一个标记物。提示FOXA1是一个临床上鉴别Luminal A亚型的候选标志物。

FOXA1在良性乳腺肿瘤中的阳性率为100%，在乳腺癌组织中明显下降，而预后最差的三阴乳腺癌中表达最低。故提示FOXA1表达缺失可能参与乳腺癌的发生发展，而其在乳腺癌中的表达提示预后良好。有学者认为FOXA1表达的缺失也许意味着ER的功能从传统的ER-FOXA1-estrogen通路变为ER-生长因子激动的信号通路，从而出现对内分泌治疗的抵抗[18]。研究发现增强FOXA1表达和活性的药物可能有助于维持ER阳性肿瘤对雌激素敏感，从而有利于患者生存并阻止转移进展，将这些药物与抗雌激素药物联合应用可能有助于阻止这些肿瘤进展到不依赖雌激素的状态[2]。Horimoto等[19]研究显示FOXA1低表达与Luminal亚型中HER2阴性的乳腺癌患者对新辅助化疗敏感相关，故认为FOXA1可以作为该类患者是否行新辅助化疗的标志物。进一步研究乳腺癌中FOXA1表达缺失的原因，可能有助于了解乳腺癌的发病机制，为乳腺癌的预后判断和治疗可能提供新的思路。

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Analysis of Forkhead-box A1(FOXA1) Expression in Breast Cancer

and Its Clinical Significance

TIAN Duo，TANG Tong，QIAN Bo，et al

(TheSecondHospitalofAnhuiMedicalUniversity,Hefei230601,China)

Abtract:ObjectiveTo study the expression of Forkhead-box A1(FOXA1 ) in benign breast tumor,breast cancer and tumor adjacent tissue and the correlations between the results and clinical parameters.MethodsThe expressions of FOXA1 in 54 specimens of breast cancer,54 specimens of tumor adjacent tissues and 20 specimens of benign breast tumor(10 specimens of breast fibroadenoma and 10 specimens of intraductal papilloma) were detected by immunohistochemistry.And the relationships between the clinical parameters including patient's age,estrogen receptor(ER),progesterone receptor(PR),nuclear-associated antigen Ki67,Human epidermal growth factor receptor-2(HER2),the stage of breast cancer,tumor size and the percentage of involved lymph nodes were analyzed.ResultsThe expression of FOXA1 was observed in 68.5%(37/54) of the 54 breast carcinoma specimens,while in 88.9%(48/54)of 54 tumor adjacent tissues specimens and in 100%(20/20) of 20 benign breast tumor specimens.There was signifcant difference between the group of breast cancer and the group of tumor adjacent tissue,and between the group of breast cancer and the group of benign breast tumor(P<0.05),but there was no difference between the group of tumor adjacent tissue and the group of benign breast tumor(P>0.05).The expression of FOXA1 in breast cancer was correlated negatively with histological grade and Ki67，but there was a positive correlation with ER and PR.The expression of FOXA1 had difference between luminal and non-luminal subtype,and between luminal subtype A and non-luminal subtype A.ConclusionThe expression of FOXA1 in breast cancer is widespread,and highest in Luminal subtype A,which suggests that FOXA1 may be a useful marker for breast cancer patients with good prognosis.

Key words:breast cancer;tumor adjacent tissues;benign breast tumor;FOXA1;Luminal subtype A

(收稿日期：2015-03-02，修回日期：2015-04-02)

通信作者：汤铜，男，主任医师，硕士生导师，研究方向：甲状腺和乳腺肿瘤，E-mail:tt20164@126.com

基金项目：安徽省自然科学基金项目(No 1308085QH152)

doi:10.3969/j.issn.1009-6469.2015.09.016