p27和p21蛋白在早期喉癌及其切缘组织中的表达与局部复发的相关性研究

姚志源

作者单位:533000 广西百色市人民医院



p27和p21蛋白在早期喉癌及其切缘组织中的表达与局部复发的相关性研究

姚志源

作者单位:533000 广西百色市人民医院

【摘要】目的探讨p27和p21蛋白在早期喉癌及其切缘组织中的表达与局部复发的相关性。方法将手术治疗的68例喉癌病例作为研究对象，对喉癌及其切缘组织中p27和p21蛋白的表达水平采用免疫组化检测，分析其阳性表达率的差异性。收集患者临床资料并进行随访。结果p27在癌组织和切缘组织中的阳性表达率分别为41.18%和79.41%，差异具有统计学意义(P<0.05)。p21在癌组织和切缘组织中的阳性表达率分别为39.71%和22.06%，差异具有统计学意义(P<0.05)。p27和p21在喉癌组织的表达与分化程度及TNM分期无关(P>0.05)。随访2年，复发19例，复发率为27.94%。切缘组织中p27阳性表达患者的复发率显著低于阴性表达患者，p21阳性表达患者的复发率显著高于阴性表达患者(P<0.05)。结论p27和p21蛋白在喉癌组织和切缘组织中差异表达，联合检测早期喉癌及其手术切缘中p21和p27表达状态，对喉癌预后判断及治疗方案选择具有重要意义，值得推广应用。

【关键词】喉鳞状细胞癌；p27；p21；局部复发

(ThePracticalJournalofCancer,2015,30:662～664)

喉鳞状细胞癌(简称喉癌)是头颈部常见的恶性肿瘤之一，其发病率占全身恶性肿瘤的1%～5%，占头颈部恶性肿瘤的3.3%～8.1%[1]。细胞增殖周期的失调被认为在肿瘤的发生中具有重要作用，而细胞周期蛋白起着关键性作用。细胞周期蛋白主要通过调节激活的细胞周期素-细胞周期素依赖性激活酶复合体(cyclin-CDK复合体)的水平参与喉癌的发生发展[2-3]。p21和p27是细胞周期素依赖性蛋白激酶抑制因子(CDKIs)家族的重要成员，是细胞周期的负调控因子，在细胞周期调控中具有重要作用[4]。本文检测早期喉癌患者中病灶组织及其切缘组织中p27和p21蛋白的表达水平，并分析其与局部复发的关系。

1材料与方法

1.1一般资料

2002年1月-2014年1月于我院接受手术治疗、临床与病理资料齐全、术中留取了切缘标本的68例喉癌病例，病理检查结果均为早期鳞状细胞癌。患者术前为接受放化疗治疗，其中男性54例，女性14例；年龄45～76岁，平均(56.7±13.8)岁；TNM分期均为T1期，其中T1a期43例，T1b期25例；高分化15例，中分化35例，低分化18例;声门上型喉癌18例，声门型37例，声门下型13例。患者接受CO2激光手术切除标本，保留癌旁组织0.5 cm为手术切缘。

1.2方法

于术后2 h内完成标本取材，标本均经10%甲醛固定，梯度酒精脱水、石蜡包埋，备用。标本4 μm连续切片6～7张，行常规病理检查(HE，MASSON，PAS，PASM+MASSON)，采用高清晰度图文分析系统进行分析。采用Envision二步法进行p27和p21蛋白表达定位及半定量分析。严格按试剂盒说明书进行操作。标本经4 μm连续切片，置60 ℃烤箱60 min烤干。经二甲苯脱蜡，酒精梯度水化至蒸馏水。3%过氧化氢室温处理15 min，阻断内源性过氧化物酶，蒸馏水洗涤2 min，微波修复抗原10 min，滴加一抗：p27鼠抗人单克隆抗体和p21鼠抗人单克隆抗体，用PBS按1∶100稀释，每张切片滴加稀释的一抗50 μl，4 ℃孵育过夜。次日PBS冲洗切片3次，每次3～5 min。每张切片滴加二抗生物素化羊抗兔IgG 50 μl，在37 ℃恒温箱孵育30 min。PBS冲洗切片3次，每次3～5 min。每张切片滴加DAB 50 μl显色，苏木精复染，脱水，中性树脂封片。阴性对照以PBS缓冲液代替一抗。

1.3结果判定

每张切片随机抽取5个高倍镜下视野，计算阳性细胞百分数。每个视野各计数100个细胞，细胞质呈棕褐色或棕黄色为阳性细胞，根据染色程度与阳性细胞数进行判定，染色程度强、中、弱、阴性分别计为3、2、1、0分；阳性细胞数所占比例≥71%、31%～70%、6～30%、≤5%，分别计为3、2、1、0分；两项得分之和≥4分为阳性[5]。

1.4随访

采用电话或门诊随访的形式对68例患者每3个月随访一次，随访截止日期为2014年6月，对局部复发情况进行记录。

1.5统计学方法

统计分析所有资料采用SPSS 18.0进行分析处理，计数资料采用χ2检验，计量资料采用均数±标准差表示并行t检验。

2结果

2.1p27和p21在喉癌组织和切缘组织中的表达

p27和p21在喉癌组织和切缘组织中的阳性表达率均具有显著性差异(P<0.05)。见表1。

表1　p27和p21在喉癌组织和切缘组织中的阳性

2.2喉癌组织中p27和p21表达与临床病理参数的关系

p27和p21在喉癌组织表达与临床病理参数的关系见表2。结果显示，p27和p21在喉癌组织中的表达与分化程度及TNM分期无关(P>0.05)。

表2　p27和p21在喉癌组织表达与临床病理参数的关系(例，%)

2.3切缘组织中p27和p21表达与局部复发的关系

随访2年，复发19例，复发率为27.94%。p27和p21在切缘组织中表达与局部复发的关系见表3。结果显示，切缘组织p27阳性表达患者的复发率显著低于阴性表达患者，p21阳性表达患者的复发率显著高于阴性表达患者(P<0.05)。

表3　p27和p21在切缘组织表达与局部复发的关系

3讨论

目前，手术是治疗喉癌的主要措施，显微镜耦合CO2激光用于喉癌的治疗取得了良好的效果，避免了患者手术行喉裂开的痛苦，显著提高了患者的生活质量，但复发仍不可避免，且手术切缘是否安全与复发明显相关[6]。多数复发患者已失去手术机会，生存率低，预后差。

本组共纳入68例早期喉癌患者，2年内随访共19例复发，复发率为27.94%，表明术后病理学检查仍存在一定的局限性。肿瘤的异质性导致病理表现相似的患者术后预后差异较大[7]。因此，探讨肿瘤的生物学指标，寻找在肿瘤组织中与正常组织中差异表达的分子标记物，对临床研究具有重要的指导意义。本文检测喉癌组织及切缘组织中的p27和p21蛋白表达水平，发现p27在癌组织和切缘组织中的阳性表达率分别为41.18%和79.41%，其在喉癌组织呈低表达水平，具有显著性差异(P<0.05)；发现p21在癌组织和切缘组织中的阳性表达率分别为39.71%和22.06%，其在喉癌组织呈高表达水平，具有显著性差异(P<0.05)。刘宏侠等[2]报道称p27蛋白在喉癌、癌旁组织及喉良性病变中阳性率分别为43.5%、84.7%和89.9%，而p21蛋白阳性率分别为38.8%、21.2%和3.8%，与本文结果一致。

p27基因是一种细胞周期负性调控因子，属于抑癌基因家族，其表达水平的降低会导致细胞周期失调，S期细胞增多，DNA 合成增强，细胞过度增生。研究证实，p27在多种癌症中呈低表达水平，如胃癌、肺癌、前列腺癌和乳腺癌等[8]。p21基因属于CIP家族，可以通过细胞周期调控作用间接参与细胞凋亡，同时可直接导致细胞异化或恶变和正性调节细胞依赖性激酶功能[4]。国内外多项研究表明，p27蛋白表达的降低或缺失与不良预后密切相关，p21阳性表达与临床淋巴结分期、复发及较差的预后相关[2,4,9]。本研究发现，p27和p21在喉癌组织中的表达与分化程度及TNM分期无关(P>0.05)。切缘组织中p27阳性表达患者的复发率显著低于阴性表达患者，p21阳性表达患者的复发率显著高于阴性表达患者(P<0.05)，提示p27与喉癌复发率呈负相关，p21与喉癌复发率呈显著正相关。因此，p27和p21有望成为喉癌预后判断及治疗方案选择的重要标志物。

综上所述，p27和p21蛋白在喉癌组织和切缘组织中差异表达，联合检测早期喉癌及其手术切缘中p21和p27表达状态，对喉癌预后判断及治疗方案选择具有重要的指导意义，值得推广应用。

参考文献

[1]常利红，黎景佳，杨新明，等.上皮钙黏蛋白表达与喉癌淋巴结转移和预后的关系〔J〕.中国耳鼻咽喉头颈外科，2014,21(6)：299-303.

[2]刘宏侠，梁振，孙玉满.p27和p21蛋白在早期喉癌及其切缘组织中的表达与局部复发的关系〔J〕.诊断病理学杂志，2014,21(5)：283-289.

[3]Nakagawa Y，Ohira M，Kubo N，et al.Tumor budding and E-cadherin expression are useful predictors of nodal involvement in T1 esophageal squamous cell carcinoma 〔J〕.Anticancer Res,2013,33(11):5023-5029.

[4]贺红艳.P27和P21在喉鳞状细胞癌中的表达〔J〕.中国热带医学，2013,13(3)：360-362.

[5]孙玉满，杨俊泉，曹渤海，等.早期喉癌手术阴性切缘组织中PCNA、COX-2表达与肿瘤局部复发的关系〔J〕.临床与实验病理学杂志，2014,30(4):408-414.

[6]刘宏侠，梁振，孙玉满，等.早期喉癌手术切缘组织 p53和 c-myc表达与局部复发的关系〔J〕.诊断病理学杂志，2014，21(1)：23-24.

[7]邱亚双，周慧芳.HIF-1α和VEGF在喉癌中的表达及其与血管生成的关系〔J〕.临床耳鼻咽喉头颈外科杂志，2014,28(6)：389-393.

[8]Zhao D,Besser AH,Zhou W,et al.Cytoplasmic p27 promot-es epithelial-mesenchymal transition and tumor progression via Twist1 upregulation 〔J〕.Cancer Research,2014,74(19 Supplement):1145.

[9]Fischer CA，Jung M，Zlobec I.Co-overexpression of p21 and Ki-67 in head and neck squamous cell carcinoma relative to a significantly poor prognosis 〔J〕.Head Neck，2011，33(2)：267-273.

(编辑：甘艳)

Correlation between Local Recurrence and p27,p21 Protein Expression in Laryngeal

Carcinoma and Its Surgical Margins

YAOZhiyuan.BaisePeople'sHospital,Baise,533000

【Abstract】ObjectiveTo investigate the correlation between local recurrence and p27,p21 protein expression in laryngeal carcinoma and its surgical margins.Methods68 cases of patients after operation were detected for p27,p21 protein expression in laryngeal carcinoma and its surgical margins using immunohistochemical method.Clinical data of all patients were collected and follow-up was made.Resultsp27 protein positive expression rate in laryngeal carcinoma and its surgical margins were 41.18% and 79.41%,respectively,presenting lower expression level in laryngeal carcinoma,there had significant difference (P<0.05).p21 protein positive expression rate in laryngeal carcinoma and its surgical margins were 39.71% and 22.06%,respectively,presenting higher expression level in laryngeal carcinoma,there had significant difference (P<0.05).p27,p21 protein expression and differentiation were not related with TNM stage(P>0.05).During 2-year follow-up,19 cases showed recurrence,account for 27.94%.Recurrence rate of patients with p27 positive expression was significantly lower than that of patients with p27 negative expression.Recurrence rate of patients with p21 positive expression was significantly higher than that of patients with p27 negative expression (P<0.05).Conclusionp27,p21 protein expression have significantly difference between laryngeal carcinoma and its surgical margins.Combined detection of p27,p21 protein is important in evaluating prognosis and treatment method and it is worthy of clinical application.

【Key words】Laryngeal squamous cell carcinoma;p27;p21;Local recurrence

(收稿日期2014-09-17修回日期 2015-03-25)

中图分类号：R739.65

文献标识码：A

文章编号：1001-5930(2015)05-0662-03

DOI：10.3969/j.issn.1001-5930.2015.05.010