老年原发免疫性血小板减少症患者治疗前后T淋巴细胞亚群的临床研究

孙媛媛 谢 军 鲍扬漪 李玉芝

老年原发免疫性血小板减少症患者治疗前后T淋巴细胞亚群的临床研究

孙媛媛 谢 军 鲍扬漪 李玉芝

目的 检测老年原发免疫性血小板减少症(ITP)患者治疗前后T淋巴细胞亚群的动态变化，探讨其在ITP发生发展中的作用。方法采用流式细胞术测定ITP患者治疗前后及正常对照组外周血T淋巴细胞亚群的水平。结果ITP患者治疗前后T淋巴细胞绝对值、CD3+、CD4+、CD8+、CD4+CD25+T淋巴细胞比例及CD4+/CD8+比值分别为(0.83±0.16)vs(1.74±0.36)、(71.71±1.07)%vs(72.69±1.35)%、(41.78±0.71)%vs(42.46±1.20)%、(29.67±0.97)%vs(28.56±1.75)%、(8.76±0.56)%vs(9.39±1.26)%、(1.42±0.07)vs(1.49±0.13)，CD8+T淋巴细胞比例治疗后显著降低，其余均显著升高，差异有统计学意义(P<0.05)。结论T淋巴细胞亚群的异常改变，破坏自身免疫，与病情相关，可指导临床治疗，并作为评估预后的参考指标。

免疫性血小板减少症；T淋巴细胞亚群；调节性T淋巴细胞

原发免疫性血小板减少症(immune thrombocytopenia,ITP)是一种获得性自身免疫性出血性疾病，多发于儿童和育龄期妇女，但60岁以上老年人是继上述人群之后的又一高发人群[1]。该病主要由体液和细胞免疫介导的血小板过度破坏和血小板生成不足所致。为探讨老年ITP患者T淋巴细胞免疫功能的变化，本文检测36例老年ITP患者外周血T淋巴细胞亚群在病程中的变化，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 收集2012年1月至2014年10月我科初诊的36 例ITP患者(ITP组)，男女各18例，年龄60～85岁，平均73.24岁，治疗前血小板计数为(2～27)×109/L。患者诊断及疗效判断参照美国成人免疫性血小板减少症实践指南及中国专家共识[2]。ITP组中，32例均为经地塞米松(40 mg/次，1次/d，连用4 d)冲击治疗有效者，剩余4例为激素治疗无效者。对照组30例随机选自同期健康体检人群，男女各15 例，年龄60～83岁，平均71.56岁，血小板计数均≥100×109/L。

1.2 检测方法

1.2.1 试剂与仪器 流式细胞分析仪FACSCalibur型购自美国BD公司，T淋巴细胞亚群试剂即鼠抗人单克隆抗体CD3-FITC/CD45-Percp/CD4-APC/CD8-PE/CD25-PE由美国BD公司提供。

1.2.2 T淋巴细胞亚群测定 采集ITP组患者治疗前及治疗后5～7天时晨起空腹静脉血2 mL，EDTA抗凝，相同方法采集对照组外周血2 mL。取50 μL外周血分别加入鼠抗人单克隆抗体CD3-FITC、CD45-Percp、CD4-APC、CD8-PE、CD25-PE 20 μL，室温避光孵育20 min，再加入溶血素450 μL，室温避光孵育10 min，用PBS洗涤2次，重悬细胞上FACSCalibur流式细胞仪检测。

2 结果

2.1 两组治疗前外周血T淋巴细胞亚群检测比较 ITP组治疗前T淋巴细胞绝对值及CD3+、CD4+、CD8+T淋巴细胞比例分别为(0.83±0.16)×109/L、(71.71±1.07)%、(41.78±0.71)%、(29.67±0.97)%，CD4+/CD8+T淋巴细胞比值为(1.42±0.07)；相应地，对照组外周血T淋巴细胞亚群分别为(1.61±0.27)×109/L、(72.63±1.61)%、(42.73±1.75)%、(28.93±1.70)%、(1.48±0.13)。治疗前，ITP组T淋巴细胞绝对值、CD3+、CD4+T淋巴细胞比例低于对照组，CD8+T淋巴细胞比例高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)；CD4+/CD8+T淋巴细胞比值低于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 两组治疗前外周血T淋巴细胞亚群检测

2.2 ITP患者治疗前后外周血T淋巴细胞亚群检测比较 ITP患者经地塞米松冲击治疗后，T淋巴细胞绝对值、CD3+、CD4+、CD8+T淋巴细胞比例分别为(1.74±0.36)×109/L、(72.69±1.35)%、(42.46±1.20)%、(28.56±1.75)%，CD4+/CD8+T淋巴细胞比值为(1.49±0.13)，治疗后T淋巴细胞绝对值、CD3+T淋巴细胞、CD4+T淋巴细胞均明显升高，CD8+T淋巴细胞明显降低，CD4+/CD8+T淋巴细胞比值显著升高，差异有统计学意义(P<0.05)。见表2。

表2 ITP患者治疗前后外周血T淋巴细胞亚群检测

2.3 ITP患者治疗前后CD4+CD25+T淋巴细胞数量比较 对照组患者CD4+CD25+T淋巴细胞占T淋巴细胞的比例为(9.52±1.02)%，而ITP患者为(8.76±0.56)%，两组差异有统计学意义(P<0.05)。经过地塞米松治疗后，ITP组患者CD4+CD25+T细胞比例增加至(9.39±1.26)%，较治疗前显著升高，差异有统计学意义(P<0.05)。

2.4 ITP 患者治疗前后血小板数比较 ITP患者治疗前血小板计数为为(10.58±8.79)×109/L，治疗后为(70.43±22.38)×109/L，治疗前后血小板计数差异有统计学意义(t=17.41，P<0.05)。治疗有效的32例患者中，T淋巴细胞亚群恢复接近正常，而治疗无效4例的患者T淋巴细胞亚群无变化。

3 讨论

ITP是以外周血血小板数目减少、寿命缩短、骨髓巨核细胞代偿性增多合并成熟障碍为表现的自身免疫性疾病。ITP的发生不仅存在B淋巴细胞异常, 也存在T淋巴细胞的异常[3]，T、B淋巴细胞共同参与了ITP的发病。ITP是一种免疫介导的血小板减少综合征，发病机制不明，主要与T淋巴细胞及B淋巴细胞异常、巨核细胞成熟障碍及血小板破坏加速等方面有关[4]。T 淋巴细胞介导的免疫反应参与了ITP的发病，机体免疫功能紊乱是ITP发病的主要原因[5]。

ITP患者体内存在着多种异常T淋巴细胞，其中包括CD4+T淋巴细胞降低，并促进自身反应性B淋巴细胞增殖，产生抗血小板抗体，进而破坏血小板。大多数ITP患者血清中血小板表面包被抗体增加，CD8+T淋巴细胞可通过细胞毒性作用将其破坏。因此，T淋巴细胞是体液与细胞免疫的重要环节，CD4+/CD8+T淋巴细胞比值的动态平衡是维持免疫环境稳定的中心环节，王厚才等[6]认为T 淋巴细胞异常导致B淋巴细胞激活可能是ITP真正的发病机制。

本研究显示ITP患者的确存在着T淋巴细胞亚群的异常改变，与ITP患者治疗前相比正常组的T淋巴细胞绝对值、CD3+、CD4+、CD4+CD25+T淋巴细胞亚群比例及CD4+/CD8+T淋巴细胞比值均有不同程度下降，而CD8+T淋巴细胞比例显著增高，充分说明了T淋巴细胞亚群功能和比例失衡，T淋巴细胞免疫调节机制的紊乱，在ITP的发生发展过程中起重要作用[7]。地塞米松治疗有效的患者出现T淋巴细胞绝对值、CD3+、CD4+、CD4+CD25+T淋巴细胞数量及CD4+/CD8+T淋巴细胞比值升高及CD8+T淋巴细胞数量下降，提示地塞米松抑制了T淋巴细胞抗原的表达，对CD8+T淋巴细胞的抑制更为明显。随着免疫功能紊乱的纠正，T淋巴细胞绝对值、CD3+、CD4+、CD4+CD25+、CD8+T淋巴细胞水平恢复正常，血小板水平亦逐渐恢复，与相关研究一致[8]。由此得出，纠正异常的T淋巴细胞功能，对ITP的治疗可能有帮助。

因此，通过检测患者的外周血淋巴细胞亚群变化，可以对治疗ITP疾病的疗效观察和预后发展趋势做出相应的判断[9]。T淋巴细胞亚群的水平可作为评估患者病情、指导治疗、判断预后的指标，有助于明确发病机制，对患者治疗方案的选择具有指导意义[10]。老年ITP患者有其特殊性，基础疾病多，脏器功能差，对常规治疗的反应差。随着对ITP免疫学发病机制研究的深入，通过检测患者的外周血淋巴细胞亚群变化，对治疗ITP疾病的疗效观察和预后发展趋势做出相应的判断，更好地运用免疫手段来治疗疾病，调节淋巴细胞亚群平衡可能成为治疗ITP的新途径。

[1] Segal JB,Powe NR.Prevalence of immune thrombocytopenia：analyses of administrative data[J].J Thromb Haemost,2006,4(11):2377-2383.

[2] 中华医学会血液学分会血栓与止血学组.成人原发免疫性血小板减少症诊断与治疗中国专家共识(2012年版)[S].中华血液学杂志,2012,33(11):975-977.

[3] Rodeghiero F,Stasi R,Gemsheimer T,et al.Standardization of terminology, definitions and outcome criteria in immune thrombocytopenic purpura of adults and children: report from an international working group [J].Blood,2009,113(11):2386-2393.

[4] 张红,刘庆华,田芳.急慢性特发性血小板减少性紫癜患者外周血淋巴细胞亚群的表达[J].中国实用医药,2014,27(9):26.

[5] Provan D,Stasi R,Newland AC,et al.International consensus report on the investigation and management of primary immune thrombocytopenia[J].Blood,2010,115(2):168-186.

[6] 王厚才.免疫性血小板减少性紫癜发病的免疫机制[J].国际输血及血液学杂志,2011,34(3):250-253.

[7] 李勇,顾绍庆,王素兰,等.血小板减少性紫癜患儿T 细胞亚群与免疫球蛋白水平检测及分析[J].临床医学工程,2012,19 (10):1734-1735.

[8] 张恒,潘歆,陈志刚.原发免疫性血小板减少症患者血小板表面CD41、CD62P及T 淋巴细胞亚群水平变化[J].山东医药,2014,54(32):60-62.

[9] Hu Y,Ma DX,Shan NN,et al.Increased number of Tc17 and correlation with Th17 cells in patients with immune thrombocytopenia[J].PLoS One,2011,6(10):e26522.

[10]李培岭,石太新,高俊,等.急性免疫性血小板减少症患儿免疫状态研究[J].中国实用儿科杂志2014,29 (7):548-550.

(2015-01-26收稿 2015-03-29修回)

The clinical study on T lymphocyte subsets before and after treatment in elderly patients with primary immune thrombocytopenia

SunYuanyuan,XieJun,BaoYangyi,etal

DepartmentofHematology,theFirstPeople'sHospitalofHefei,Hefei230061,China

Objective To detect the dynamic changes of T lymphocyte subsets before and after the treatment in elderly patients with primary immune thrombocytopenia, and to explore its role in the occurrence and development of ITP.MethodsThe levels of peripheral blood T lymphocyte subsets were measured before and after treatment in patients with ITP and normal control group by flow cytometry.ResultsBefore and after treatment in patients with ITP, the absolute value of T lymphocytes, CD3+, CD4+, CD8+, CD4+CD25+T lymphocyte ratio and the ratio of CD4+/CD8+was (0.83±0.16)vs(1.74±0.36), (71.71±1.07)%vs(72.69±1.35)%,(41.78±0.71)%vs(42.46±1.20)%, (29.67±0.97)%vs(28.56±1.75)%, (8.76±0.56)%vs(9.39±1.26)%, (1.42±0.07)vs(1.49±0.13), respectively; the proportion of CD8+T lymphocyte decreased significantly after the treatment; the rest were significantly increased, and the differences were statistically significant (P<0.05).ConclusionThe changes of T cell subsets and the breakdown of immune are related to the course of disease, which may guide the clinical treatment and serve as a reference index to evaluate the prognosis.

Immune thrombocytopenia;T lymphocyte subsets;Regulatory T cell

230061 安徽省合肥市第一人民医院血液科

鲍扬漪,ahmuxj@sina.com

10.3969/j.issn.1000-0399.2015.06.015