腹可安片中东莨菪内酯提取工艺的正交实验法优化

林 清，符小英，林志绣

(1.广东医学院附属医院药学部，湛江 524001； 2.广东恒诚制药有限公司，湛江 524022)



药物制剂

腹可安片中东莨菪内酯提取工艺的正交实验法优化

林 清1，符小英2，林志绣1

(1.广东医学院附属医院药学部，湛江 524001； 2.广东恒诚制药有限公司，湛江 524022)

目的：优选腹可安片中东莨菪内酯的提取工艺。方法：以干膏得率和处方中的主要药效成分东莨菪内酯含量为观察指标，采用正交实验法筛选最佳提取工艺条件。结果：最佳提取方法为10倍量水，煎煮3次，每次1.5 h,醇沉浓度为60%。结论:优选的提取方法为腹可安片中东莨菪内酯含量测定提供可靠方案，保证产品质量。

腹可安片，正交实验，提取工艺

腹可安片由扭肚藤、火炭母、救必应、车前草、石榴皮组成，具有清热利湿、收敛止痛的功效，主要用于治疗急性胃肠炎、消化不良引起的腹痛、腹泻、呕吐等症。方中扭肚藤、火炭母清热利湿，救必应清热解毒、利湿止痛，共为主药。扭肚藤为木犀科植物扭肚藤(JasminumamplexicauleBuch -Ham)的茎叶，可清热解毒、利湿消滞，用于急性胃肠炎、痢疾等症[1]，其主要化学成分包括东莨菪内酯等[2]。为了有效控制该制剂的质量，保证其临床疗效，笔者以干膏得率和提取液中东莨菪内酯的含量为考查指标，采用正交实验法对其提取工艺进行研究。

1 仪器与试药

岛津10A高效液相色谱仪(LC-10AD 泵、SPD-10A 紫外检测器、N2000 色谱工作站)， HN1006型超声清洗机(中国华南超声设备厂)；BP211D型电子天平(德国赛多利斯公司)。 东莨菪内酯对照品(中国药品生物制品检定所，批号110768-200504)；腹可安片 (广东恒诚制药有限公司生产，规格：素片0.21 g/片，批号1501101、1501102、1501103)；乙腈为色谱纯，甲醇、磷酸均为分析纯，水为重蒸馏水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱：Kromasil C18(150 mm×4.6 mm,5 μm)，流动相：乙腈-0.1%磷酸水溶液(23∶77)，流速：1.0 ml/min；柱温：室温；检测波长：346 nm；进样量：10 μl。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液的制备 精密称取减压干燥至恒重的东莨菪内酯对照品适量，加甲醇制成每1 ml 含82 μg的溶液，作为对照品溶液。

2.2.2 供试品溶液的制备 取本品20片，除去包衣，研细，取约0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25 ml，密塞，超声处理(功率250 W，频率40 kHz)30 min， 滤过，用甲醇15 ml分3次洗涤残渣和器皿，同样滤过，全部滤液置蒸发皿中，水浴上挥干，再用流动相溶解残渣并转移至5 ml的量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，滤过(0.45 μm微孔滤膜)，取续滤液作为供试品溶液。

2.3 标准曲线与线性范围 精密称定东莨菪内酯对照品，加甲醇分别制成每1 ml含东莨菪内酯10.25、20.5、30.75、41.0、61.5和82.0 μg的溶液，再分别精密吸取10 μl按“2.1”项下色谱条件测定，以峰面积积分值(Y)为纵坐标，东莨菪内酯浓度(X)为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程：Y=6.06×10-5X-3.10(r=0.999 5)。结果表明，东莨菪内酯浓度在0.102 5～0.82 μg/ml范围内与峰面积积分值呈良好的线性关系。

2.4 精密度试验 精密吸取东莨菪内酯对照品溶液，按“2.1”项下色谱条件重复进样6次。结果，RSD为0.52 %(n=6)，表明仪器精密度良好。

2.5 稳定性试验 取“2.2.2”项下供试品溶液，分别于0、2、4、6、8和12 h进样，按“2.1”项下色谱条件测定东莨菪内酯对照品峰面积，RSD为1.2 %(n=6)，表明供试品溶液在12 h内稳定。

2.6 重复性试验 取同一批(批号1501101)的腹可安片6份，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液,按“2.1”项下色谱条件测定东莨菪内酯含量。结果，平均含量为492 μg/g，RSD为1.89 %(n=6)，表明方法重复性良好。

2.7 加样回收率试验 取同一批(批号1501101)已知含量(东莨菪内酯含量为492 μg/g)的腹可安片，除去包衣，研细，精密称取0.5 g，置于锥形瓶中，分别精密加入高、中、低三个浓度各3份的对照品溶液，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件测定，计算加样回收率，结果平均回收率为99.30%，RSD为0.31%，见表1。

表1 加样回收率试验结果(n=9)

2.8 莨菪内酯提取条件优化

2.8.1 正交试验设计 根据文献资料[3]，采用水提醇沉工艺，选取了对东莨菪内酯提取率影响较大的煎煮次数(A)、煎煮时间(B)、醇沉浓度(C)、加水量(D)作为考查因素, 以干膏得率和东莨菪内酯的含量作为考查指标，采用L9(34)正交设计进行试验，因素水平表见表2。

表2 正交试验因素水平表

2.8.2 试验安排及结果 根据因素水平表，选用L9(34)表进行试验。见表3-表5。由表4和表5方差分析可以看出，对于东莨菪内酯浸膏得率A为显著性因素；对于东莨菪内酯含量A、B、C为显著性因素、其中A因素最为显著。由表3可以看出，影响东莨菪内酯提取率和浸膏得率的因素均为煎煮次数>煎煮时间>醇沉浓度>加水量。根据表3直观分析考虑东莨菪内酯浸膏得率，工艺条件应选择A3B3C1D3；若考虑提取率，工艺条件应选择A3B2C1D3。综合方差分析、极差数据，并从节省加热时间和能源的角度考虑，选择的最佳提取工艺为A3B2C1D3即煎煮3次，煎煮1.5 h，醇沉浓度60%，加水量为10倍。

2.8.3 验证试验 按照优化工艺条件操作，进行3次重复试验加以验证。结果表明：东莨菪内酯含量均较高(平均含量为134.87 μg/片)，说明正交设计筛选的工艺是合理的。

表3 正交试验结果

表4 出膏率方差分析表

注：F0.05(2,2)=19

表5 含量方差分析表

注：F0.05(2,2)=19

3 讨论

本制剂为多种药材加水煎煮成膏加以辅料制成片剂，为保持原处方疗效，本组以水做提出溶剂，再根据东莨菪内酯可溶于乙醇，故加乙醇沉淀提取有效成分，因此，在提取工艺研究中选择东莨菪内酯的含量为考查指标是可行的。

制备供试品溶液时，将提取液的溶剂挥干后用流动相复溶，减少了溶液中的弱极性成分，减少每次分析后强保留的杂质，可缩短分析时间、保护色谱柱。同时以流动相溶解，避免因为供试品溶液溶剂洗脱力强而导致溶剂峰和峰延伸，提高分离度。

本实验采用东莨菪内酯提取率和浸膏得率为考查指标，经验证优化后的提取工艺能确保有效成分东莨菪内酯的提取，达到优化工艺条件的目的。

1 广东省食品药品监督管理局. 广东省中药材标准(第一册)[S]. 广州: 广东科技出版社, 2004: 109-110

2 彭维, 王小锐, 王永刚, 等. HPLC法测定扭肚藤药材中东莨菪素的含量. 中药材, 2007, 30(5): 562-563

3 刘瑛，陈景勇，黄劲松，等.胃肠宁胶囊的提取工艺研究[J].宜春学院学报，2014.36(9)：88-90

2015-05-19

TQ460.6 R927.2

A

1006-5687(2015)04-0027-03