复方榛花肝宁胶囊的质量标准研究

南劲松，南红梅，季存蕊，张 铎，南 征*

(1.吉林省食品药品监督管理局，长春130022;2.长春中医药大学，长春130117)

复方榛花肝宁胶囊系由五味子、三七、龙胆和板蓝根等17味药物组成的复方制剂，具有疏肝解郁，除黄利胆，理气和胃等功效。五味子为复方榛花肝宁胶囊中的君药，最主要药理活性成分为木脂素，包括五味子素、五味子醇甲等［1-2］。现采用薄层色谱法对复方榛花肝宁胶囊中三七、龙胆进行定性鉴别，同时采用高效液相色谱法对复方中五味子中五味子醇甲进行含量测定，以建立复方榛花肝宁胶囊的质量控制标准。

1 材料

日立-635高效液相色谱仪，DL-800色谱工作站(大连依利特公司)。复方榛花肝宁胶囊(由吉林正辉煌药业有限公司提供);五味子醇甲对照品由中国药品生物制品检定所提供(供含量测定，批号:0857-9601);甲醇为优级纯，其他试剂为分析纯。

2 方法与结果

2.1 提取方法的选择 1)采用甲醇超声处理后上D101吸附树脂柱;2)加甲醇加热回流后上D101吸附树脂柱。结果:1)法测定的吸收峰面积积分值明显低于2)法，故采用2)法。

2.2 柱洗脱条件的考察 样品经甲醇提取后，通过D101吸附树脂柱，以水 30 mL，20%乙醇40 mL，70%乙醇50 mL即能大量洗脱杂质，有效成分完全收集。

2.3 系统适应性试验 色谱柱Relasil C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)，流动相为甲醇∶水(13∶8)，流速为1.0 mL/min，检测波长为 250 nm［3］。理论塔板数应不低于3 000。

2.4 方法学考察 对照品溶液的制备:称取10 mg五味子醇甲对照品，精密称定后置于25 mL容量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，摇匀后精密吸取2 mL于10 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。供试品溶液的制备:精密称定本品内容物1.25 g置具塞锥形瓶中，精密加入50 mL甲醇并称定重量，加热回流2 h后放冷，再称定重量并用甲醇补足减失重量，摇匀，滤过。精密吸取25 mL续滤液，蒸干后加5 mL水溶解残渣，再通过D101型大孔吸附树脂柱(内径1.0 cm，填充高度10 cm)。先用30 mL水洗脱并弃去水液，再用20%乙醇洗脱后弃去20%乙醇洗脱液，最后用70%乙醇洗脱，收集50 mL 70%乙醇洗脱液并蒸干，用1 mL甲醇溶解残渣，并转移至5 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度线，摇匀，即得。

2.4.1 线性关系考察 精密称取适量五味子醇甲对照品，加甲醇配制成每1 mL含0.085 mg的溶液，分别精密吸取2、4、6、8、10 μL 注入液相色谱仪，测定，以五味子醇甲进样量(μg)为横坐标，对应峰面积结果为纵坐标绘制标准曲线。回归方程Y=9 832 120.6X+1 282 419.5，r=0.9 999，结果表明:五味子醇甲在0.17～0.85 μg范围内线性关系良好。

2.4.2 精密度考察 取同一批号样品，按供试品的制备方法制备，测定，连续5次进样。测定结果:峰面积平均值为7 708 154，RSD为0.51%，说明精密度较好。

2.4.3 稳定性考察 取同一供试品溶液，分别在不同的时间内进行重复测定。供试品溶液在0、3、6、12、24 h的测试结果:RSD为0.35%，峰面积在0～24 h内基本稳定，说明供试品溶液在24 h内稳定性良好。

2.4.4 重现性考察 对同一批号的样品按供试品的制备方法制备，依法进行5次独立测定，测试结果:五味子醇甲平均含量为 0.102 2 mg/粒，RSD为1.28%。结果表明本方法的重现性良好。

2.4.5 加样回收率试验 取同法测定的已知含量为0.106 3 mg/粒的复方榛花肝宁胶囊样品为基底，加入0.085 mg/mL五味子醇甲对照品溶液3 mL(即0.255 0 mg)，依含量测定方法测定加样回收率，结果:平均加样回收率为98.85%，RSD=1.08%(n=5)，符合规定要求。

2.5 样品含量测定 分别精密吸取5 μL对照品溶液、5 μL供试品溶液，注入液相色谱仪，依法测定。测定10批样品中五味子醇甲的含量，测定计算得样品平均含量为0.094 8 mg/粒。

2.6 五味子药材含量测定 按《中华人民共和国药典》［3］(一部)五味子药材含量测定方法，对生产厂家提供的3批五味子药材进行了五味子醇甲的含量测定。测得五味子醇甲的含量均大于0.40%，结果表明药材符合药典规定。

2.7 限度的确定 经过对投料的五味子药材的测定，其五味子含量为0.42%～0.50%，由于在本制剂中五味子为粉末直接入药，故收率可达90%以上，证明本法是可行的，以样品最低含量0.08 mg/粒的5%计算，本品含量限度暂定为:含五味子按五味子醇甲(C24H32O7)计，应不得少于0.07 mg/粒。

3 结论

本实验结果表明，所建立的方法具有良好分离度、精密度、重现性，且回收率在规定范围内;五味子醇甲进样量在0.17～0.85μg范围内线性关系良好;样品在24 h内具有良好的稳定性;本品含量限度暂定为:五味子按五味子醇甲(C24H32O7)计，含量不得少于0.07 mg/粒，为控制该品质量提供了依据［4］。

［1］高雁，李廷利.五味子有效成分的药理作用研究进展［J］.中医药学报，2011，39(6):104-106.

［2］史琳，王志成，冯叙桥.五味子化学成分及药理作用的研究进展［J］.药物评价研究，2011，34(3):208-212.

［3］国家药典委员会.中华人民共和国药典［M］.北京:化学工业出版社，2010.

［4］黄晓东，路倩，沈楠，等.五味子多糖对人结肠癌HT-29细胞体外增殖及侵袭能力的抑制作用［J］.吉林大学学报(医学版)，2015，41(2):287-290.