HPLC法测定柴胡不同炮制品中柴胡皂苷a，d的含量*

*基金项目：国家中医药管理局中药炮制学重点学科青年教师培养计划资助项目(2012jzzdxk024)；江西省卫生厅中医药科研计划项目(2012Z005)。

**第一作者：祝婧(1985—)，女，讲师。研究方向：中药饮片质量标准及炮制机理。Tel：0791-87118995.Email:277836041@qq.com。

HPLC法测定柴胡不同炮制品中柴胡皂苷a，d的含量*

*基金项目：国家中医药管理局中药炮制学重点学科青年教师培养计划资助项目(2012jzzdxk024)；江西省卫生厅中医药科研计划项目(2012Z005)。

**第一作者：祝婧(1985—)，女，讲师。研究方向：中药饮片质量标准及炮制机理。Tel：0791-87118995.Email:277836041@qq.com。

★祝婧**钟凌云龚千锋张金莲罗欢谌瑞林***(江西中医药大学药学院南昌 330004)

摘要：目的 :以柴胡皂苷a、柴胡皂苷d含量为指标，考察不同炮制方法对柴胡中皂苷类成分含量的影响。 方法 :采用RP-HPLC法测定柴胡不同炮制品中柴胡皂苷a、柴胡皂苷d的含量，色谱柱为Dikma Diamonsil C18( 250 mm ×4.6 mm，5μm)；流动相为乙腈-水( 35∶65)，流速1.0mL/min，柱温30℃，检测波长210nm。结果 :柴胡经不同的方法炮制后，柴胡皂苷a、d的含量有不同程度的变化，柴胡皂苷a的含量变化依次为: 生柴胡>酒麸柴胡>炒柴胡>酒柴胡≈鳖血柴胡>醋柴胡，柴胡皂苷d的含量变化依次为: 生柴胡>酒麸柴胡>鳖血柴胡>酒柴胡>炒柴胡>醋柴胡。 结论 :本方法简便、可靠、重现性好，可用于柴胡及其炮制品中柴胡皂苷a、d的含量测定，并为全面控制其质量提供参考，为深入探讨柴胡炮制的意义，提供一定的实验依据。

关键词：柴胡；炮制品；柴胡皂苷a；柴胡皂苷d；HPLC

柴胡为伞形科植物柴胡BupleurumchinenseDC.或狭叶柴胡Bupleurumscorzonerifol-iumWilld的干燥根[1]。具有疏散退热、疏肝解郁、升举阳气的功效，主要含有挥发油、柴胡皂苷、多糖等成分。现在主要的炮制方法有醋制、酒制、蜜制、清炒、鳖血制、酒麸制等[2-3]。柴胡生品升散作用较强，临床多用于解表退热，炮制之后可起到“减毒、增效”的作用，各炮制品的功效不尽相同。中药发挥临床疗效的物质基础为其中所含有的有效成分，柴胡中皂苷类成分是其发挥临床疗效的主要有效成分之一，柴胡经过不同方法炮制之后所产生不同作用的物质基础，即是其所含有效成分发生了变化。本实验通过比较不同炮制方法对柴胡中柴胡皂苷a和柴胡皂苷d含量的影响，筛选出柴胡的优势饮片，为临床规范、合理、有效的使用柴胡饮片提供理论基础。

1材料

1.1仪器高效液相色谱仪(Dionex UltiMate3000)；PDA-3000二极管阵列紫外检测器； Chromeleon工作站；Raytek Raynger ST20 红外测温仪(美国雷泰公司raytek)；KQ-250E 型医用超声波清洗机( 昆山市超声仪器有限公司)；十万分之一电子分析天平( 梅特勒-托利多仪器上海有限公司)。甲醇、乙腈均为色谱纯，水为娃哈哈纯净水，其他试剂为分析纯。

1.2试剂与试药柴胡皂苷a(批号: 110777-200404 ) 和柴胡皂苷d(批号: 110777-200403) 对照品均购自中国药品生物制品检定所；柴胡饮片购自樟市药材市场，经江西中医药大学龚千锋教授鉴定为伞形科植物北柴胡的干燥根；麦麸购自樟树药材市场；鳖血购自菜场；黄酒、米醋、蜂蜜均为市售。

2方法与结果

2.1不同柴胡炮制品的制备

2.1.1柴胡生品取原药材，除去杂质，洗净，润透，切厚片，干燥。

2.1.2炒柴胡取净柴胡片，文火炒至药物表面颜色加深。

2.1.3 醋柴胡取净柴胡片，加米醋(100g药物用米醋20g) 闷润，文火炒干即得 。

2.1.4酒柴胡取净柴胡片，加黄酒(100g药物用黄酒10g) 闷润，文火炒干即得。

2.1.5酒麸柴胡先将麦麸均匀撒入热锅中(100g药物用麦麸15g)，至起烟时投入经黄酒(100g药物用黄酒15g)闷润过的净柴胡片，文火炒至药物表面颜色加深，筛去麦麸，放凉。

2.1.6鳖血柴胡取净柴胡片，加鳖血及适量冷开水(100g药物用鳖血13g) 闷润，再文火炒干即得。

6种炮制品各取50g，分别粉碎，过三号筛，备用。

2.2色谱条件色谱柱: Dikma Diamonsil C18( 250 mm ×4.6 mm，5μm)；流动相: 乙腈-水( 35：65)；流速: 1.0mL/min；柱温: 30℃；检测波长: 210nm；进样量: 20μL。柴胡皂苷a和柴胡皂苷d分离度良好，无其他杂质干扰。

2.3对照品溶液的制备精密称取柴胡皂苷a对照品3.21mg，柴胡皂苷d对照品7.32mg，分别置于5mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。

2.4供试品溶液的制备分别取柴胡生品及炮制品各0.5g，精密称定,置具塞锥形瓶中,加入含5%浓氨试液的甲醇溶液25mL，密塞,于30℃超声处理30min，滤过。用甲醇20mL分两次洗涤容器及药渣，洗液与滤液合并，置于60℃水浴锅上挥发至干，残渣加甲醇溶解，转移至5mL容量瓶中,定容至刻度，摇匀，经0.45μm微孔滤膜过滤即得。

2.5线性关系考察取柴胡皂苷a、柴胡皂苷d对照品溶液1，5，10，15，20 μL分别注入液相色谱仪，测定峰面积积分值，以峰面积对进样量进行回归，得柴胡皂苷a回归方程Y=12.099X-2.3524，r=0.9998，表明在0.624～12.84μg范围内柴胡皂苷a线性良好；柴胡皂苷d回归方程Y=4.9356X+4.364，r=0.9998，表明在1.464～29.28μg范围内柴胡皂苷d线性良好。

2.6精密度试验分别取柴胡皂苷a对照品溶液20μL与柴胡皂苷d对照品溶液20μL注入液相色谱仪，各连续进样5次,测定峰面积，计算得RSD分别为0.33%和0.60%，表明精密度良好。

2.7稳定性试验取同一柴胡生品溶液，分别于0、2、4、8、12 h测定，结果在此范围内柴胡皂苷a和柴胡皂苷d的稳定性较好，RSD 分别为2.01%和1.80%。

2.8重现性试验取柴胡醋炙品5份，每份0.5g，精密称定，照“2.4”项方法制备，分别精密吸取此供试品溶液20μL，注入液相色谱仪，测定柴胡皂苷a和柴胡皂苷d峰面积，计算得RSD分别为1.78%和2.02%，表明重现性良好。

2.9加样回收试验取已知含量的酒麸柴胡粉末(柴胡皂苷a含量为0.642mg/mL，柴胡皂苷d含量为1.464mg/mL) 0.25g, 精密称定，共6份，加入适量柴胡皂苷a和柴胡皂苷d对照品，照“2.4”项下方法制备，分别精密吸取供试品溶液10μL，注入液相色谱仪，结果柴胡皂苷a和柴胡皂苷d的平均回收率分别为98.08% 和97.23%，RSD 分别为2.01%和1.70%。

品及不同炮制品粉末各0.5g，精密称定，按“2.4”项下供试品溶液制备方法及“2.2”项下色谱条件，精密吸取对照品溶液和供试品溶液，分别注入高效液相色谱仪，测定峰面积，并根据回归方程计算各样品中柴胡皂苷a和柴胡皂苷d含量。结果见表1。

表1　柴胡不同炮制品中柴胡皂苷a、d的含量(n=3)

3讨论

3.1实验选取了柴胡生品及5种常用炮制品测定其中柴胡皂苷a和柴胡皂苷a的含量。结果表明，柴胡不同炮制品中柴胡皂苷a的含量变化依次为: 生柴胡>酒麸柴胡>炒柴胡>酒柴胡≈鳖血柴胡>醋柴胡，柴胡皂苷d的含量变化依次为: 生品>酒麸制品>鳖血制品>酒炙品>清炒品>醋炙品。炮制品中柴胡皂苷a、d 的含量相对于生品都有不同程度的下降，其中酒麸制品中含量最高，醋制品中含量最低。

3.2有研究证明[4], 柴胡皂苷有明显的中枢抑制、抗炎、特异性阻碍胆碱酯酶和显著的利尿作用，为柴胡发挥药理作用的主要物质基础之一，炮制后柴胡皂苷a、d 的含量相对于生品都有不同程度的下降有研究，有研究[8]认为，可能是由于柴胡皂苷a、d 结构不稳定，在炮制的过程中，在加热和辅料的共同作用下，易使环氧醚键开环发生结构转化形成柴胡皂苷b1、b2所致。

3.3酒麸柴胡是江西樟帮特色炮制工艺[2]，选取双重辅料黄酒与麦麸同时对药物进行炮制，具有缓和寒性，引药上行，增强解表和里、升阳解郁的作用。实验结果表明，酒麸柴胡中柴胡皂苷a，d 的含量较之其他炮制品为高，说明经过酒润麸炒之后，其有效成分含量损失相较于其他炮制方法要少。故我们认为，酒麸柴胡较之柴胡其他炮制品在饮片质量方面具有一定的优势。究其原因，推测是由于辅料黄酒和麦麸中的成分复杂，某些成分在炮制过程中通过激活药材中的分解酶、参与生成柴胡中所含游离型皂苷等直接或间接的方式，使得樟帮酒麸柴胡中柴胡皂苷含量较之其他炮制品更高。至于其具体原因以及辅料与有效成分含量之间的关联性，还有待进一步的研究。

参考文献

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典·一部[S].北京: 中国医药科技出版社，2010: 263．

[2]龚千锋.樟树中药传统炮制法[M].南昌：江西人民出版社，1983:111.

[3]龚千锋.中药炮制学[M].北京：中国中医药出版社，2012:236-238.

[4]口维敏.炮制对柴胡药效的影响及临床运用的规律[J].时珍国医国药，2006,17(10)：1998-1999.

[5]姜华，李军，石任兵，等．炮制对柴胡药材中4种柴胡皂苷的影响[J].中国药学杂志，2009，44(21):1618-1621．

[6]潘燕，高明，于春晖.辽南野生柴胡醋炙前后质量比较研[J].上海中医药杂志，2009，43(9): 76-78．

[7]陈帅，李燕，孙秋实，等．柴胡炮制后皂苷成分的变化分[J].中成药，2010，32(5):793-799．

[8]白宗利．醋柴胡炮制原理及工艺研究[D]．沈阳: 辽宁中医药大学，2008: 11-17．

Determination of Saikosaponin a and Saikosaponin d in Different Processing Products of Radix Bupleuri by HPLC

ZHU Jing, ZHONG Lin-yun, GONG Qian-feng, ZHANG Jin-lian, DAI Xi-ming

FacultyofPharmacy，JiangxiUniversityofTraditionalChineseMedicine，Nanchang330004，China.

Abstract:Objective:Saikosaponin a,d are used as the marker ingredients，study the impact of different processing methods on the content of saikosaponin compounds in Radix Bupleuri.Methods Methods: Use RP-HPLC method to determine the content of saikosaponin a,d in different processing products of Radix Bupleuri.The column was Dikma Diamonsil C18(250mm×4.6mm,5μm) with mobile phase of acetonitrile-water(35:65),the flow rate of 1.0mL/min.Column temperature was 30℃ with the detection wavelength of 210nm. Results：After being processed,the sequence of the content changes of saikosaponin a was as follows:raw product>processing with wine bran>processing with fried>processing with wine≈processing with turtle blood>processing with vinegar broiled,while content of saikosaponin d were:raw product>processing with wine bran>processing with turtle blood>processing with wine>processing with fried>processing with vinegar.Conclusion:The method is simple,reliable,reproducible.It can be used for processed products Radix Bupleuri saikosaponin a,d content determination and provide reference for full control of its quality,depth Radix Bupleuri concocted sense,provide some experimental basis.

Key words:Radix Bupleuri; Processed Products; Saikosaponin a; Saikosaporin d;HPLC

收稿日期：(2015-02-05)编辑：曾文雪

中图分类号：R284.1

文献标识码：A

通信作者：***谌瑞林，男，主任中药师。研究方向：中药饮片质量标准。