上皮性卵巢癌中Bcl-2/Bax比值与临床病理因素及化疗的关系

王颖欣，李昌英，何胜利

(1.河北省唐山市工人医院分院妇产科，河北 唐山 063000；2.河北省滦县食品药品监督管理局食品检验中心，河北 滦县 063700；3.河北省滦县人民医院外科，河北 滦县 063700)



·论 著·

上皮性卵巢癌中Bcl-2/Bax比值与临床病理因素及化疗的关系

王颖欣1，李昌英2，何胜利3

(1.河北省唐山市工人医院分院妇产科，河北 唐山 063000；2.河北省滦县食品药品监督管理局食品检验中心，河北 滦县 063700；3.河北省滦县人民医院外科，河北 滦县 063700)

目的探讨上皮性卵巢癌患者Bcl-2/Bax比值与临床病理因素及化疗敏感性的关系。方法应用免疫组织化学SP法检测61例上皮性卵巢癌组织中的Bcl-2蛋白及Bax蛋白的表达，分析Bcl-2/Bax比值与卵巢癌患者临床病理因素及化疗敏感性的关系。结果手术病理分期Ⅲ～Ⅳ期、组织学分级G2～G3、化疗无效患者Bcl-2/Bax比值>1比例分别高于手术病理分期Ⅰ～Ⅱ期、组织学分级G1、化疗有效患者(P<0.01)，不同年龄、不同病理类型、有无腹腔积液上皮性卵巢癌患者间Bcl-2/Bax比值>1比例差异无统计学意义(P>0.05)。Bcl-2/Bax比值与化疗耐药、手术病理分期及组织学分级呈正相关(P<0.01)，与年龄、病理类型、腹腔积液无相关性(P>0.05)。结论Bcl-2/Bax>1与上皮性卵巢癌手术病理分期、组织学分级关系密切；Bcl-2/Bax>1的患者顺铂化疗敏感性差，易产生耐药。

卵巢肿瘤；基因,Bcl-2；Bcl-2相关X蛋白质doi:10.3969/j.issn.1007-3205.2015.11.011

卵巢癌是致死率最高的妇科恶性肿瘤。大多数患者确诊时已属晚期，多伴有腹腔种植及转移，故总病死率一直居于高位。目前，初始肿瘤细胞减灭术后辅以铂类和紫杉醇的辅助化疗是晚期卵巢癌的标准治疗方案，但铂类药物抵抗是卵巢癌治疗失败的主要原因。近年来研究发现，细胞凋亡与肿瘤关系密切，且受一系列调控因子的影响[1]。凋亡机制在卵巢癌的发生发展及化疗耐药的产生中起重要作用。本研究应用免疫组织化学SP法检测上皮性卵巢癌组织中Bcl-2蛋白及Bax蛋白的表达，探讨Bcl-2/Bax比值与卵巢癌临床病理因素及化疗敏感性的关系，旨在为卵巢癌患者早期诊断及选择合理的化疗方案提供理论依据。报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2003年1月—2007年12月河北省唐山市工人医院收治的原发性上皮性卵巢癌患者61例，均有完整病历和随访资料，术前未接受化疗，早期患者(Ⅰ～Ⅱa期)行卵巢癌根治术，晚期患者(Ⅱb～Ⅳ期)行肿瘤细胞减灭术，手术均由高年资医生完成，均经组织病理学确诊，术后给予以铂类为基础的联合化疗4个疗程以上。61例上皮性卵巢癌患者，年龄13～79岁，中位年龄53岁；病理类型：浆液性癌43例，黏液性癌12例，子宫内膜样癌5例，其他1例；按2006年FIGO手术病理分期标准，Ⅰ、Ⅱ期21例，Ⅲ、Ⅳ期40例；组织学分级：低级别(G1)25例，中、高级别(G2、G3)36例；术前有腹腔积液者17例，无腹腔积液者44例。

1.2 化疗疗效判定标准 根据国际抗癌联盟关于实体瘤化疗疗效评定标准，分为完全缓解、部分缓解、稳定和进展。完全缓解：临床症状完全消失，脱落细胞学检查未发现癌细胞，盆腔检查和B超检查均未见肿块和腹腔积液，达6个月以上；部分缓解：临床症状消失，肿块缩小50%以上；稳定(肿瘤缩小<50%或增大≤25%)；进展(肿瘤增大>25%)。将完全缓解和部分缓解视为化疗有效，稳定和进展视为化疗无效。61例上皮性卵巢癌患者中化疗有效者(化疗敏感)27例，化疗无效者(化疗耐药)34例。

1.3 试剂与方法Bcl-2单克隆抗体、Bax多克隆抗体、SP免疫组织化学染色超敏试剂盒和DAB染色试剂盒均购于福州迈新生物技术开发公司。采用免疫组织化学SP染色方法，按试剂盒说明操作。

1.4 结果观察与判定 请2位有经验的病理学专家阅片，判定染色结果。Bcl-2、Bax染色均定位于细胞浆，镜下组织细胞结构清晰，细胞浆可见棕黄色颗粒沉着且染色明显高于背景者视为阳性表达(图1，2)。高倍镜下综合阳性细胞所占比例及染色强度，用组织学评分(∑Pi)计算积分。其中P代表将阳性细胞的百分数值进行半定量分级，包括0分、<5%，1分、5%～25%，2分、>25%～50%，3分、>50%～75%，4分、>75%；i代表细胞染色深浅，不显色或显色不清为0分，浅黄色为1分，棕黄色为2分，深褐色为3分。所得积分在1～3分为弱阳性(+)，4～8分为中度阳性(++)，9～12分为强阳性(+++)。++及以上者为阳性表达，用以计算阳性率。将Bcl-2、Bax蛋白表达积分相除，61例上皮性卵巢癌患者Bcl-2/Bax比值≤1者23例，Bcl-2/Bax比值>1者38例。

图1 卵巢癌Bcl-2表达阳性(SP×100)

Figure1PositiveexpressionofBcl-2inovariancancer(SP×100)

图2 卵巢癌Bax表达阳性(SP×100)

Figure2PositiveexpressionofBaxinovariancancer(SP×100)

1.5 统计学方法 应用SPSS19.0软件进行数据分析。计数资料以百分率表示，组间比较采用χ2检验；相关性采用Spearman相关分析。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 不同临床因素Bcl-2/Bax比值比较 手术病理分期Ⅲ～Ⅳ期、组织学分级G2～G3、化疗无效患者Bcl-2/Bax比值>1比例高于手术病理分期Ⅰ～Ⅱ期、组织学分级G1、化疗有效患者，差异有统计学意义(P<0.01)；不同年龄、不同病理类型、有无腹腔积液上皮性卵巢癌患者间Bcl-2/Bax比值>1比例差异无统计学意义(P>0.05)。见表1。

表1 上皮性卵巢癌患者不同临床因素Bcl-2/Bax比值比较

2.2 相关性分析Bcl-2/Bax比值与化疗耐药、手术病理分期和组织学分级呈正相关(P<0.01)，与年龄、病理类型、腹腔积液无相关性(P>0.05)，见表2。

表2 相关性分析

3 讨 论

细胞凋亡又称程序性死亡，是指机体为维持内环境稳定，由基因控制的细胞自主的有序死亡。越来越多的研究表明，肿瘤的发生发展与细胞凋亡异常有关，Bcl-2家族的表达在细胞凋亡调控中发挥着非常重要作用[2-3]。

Bcl-2和Bax是Bcl-2家族中的2个代表成员。其中Bcl-2是抗凋亡分子,是一个较好的预后指标，定位于线粒体、内质网和连续的核周膜[4]。其抑制细胞凋亡的主要机制为：通过阻止线粒体细胞色素C的释放及降低caspase蛋白酶的活性[5]来发挥抗凋亡作用；通过抑制钙离子的跨膜流动，调节细胞内钙离子浓度来调节凋亡。Bax是促凋亡分子，是与Bcl-2同源的相关蛋白，存在于细胞内膜、细胞质和细胞核上，能拮抗Bcl-2的生物学活性，加速细胞凋亡。

Bcl-2/Bax比率是调控细胞死亡的“可变电阻器”，在外界因素的刺激下，Bcl-2和Bax调控因子是否平衡决定了细胞的生死。有研究认为，Bcl-2、Bax可以形成异源二聚体，二者的比例调控着细胞的凋亡，当Bcl-2过多时，细胞凋亡减少，而Bax增多时，细胞凋亡加速[6-7]。

Bcl-2/Bax比值决定了细胞是否进入凋亡状态。王琳等[8]研究发现，由正常胃黏膜→胃癌前病变→胃癌的演变过程中，Bcl-2 对细胞凋亡有明显负调节作用。刘红等[9]研究显示，溶血磷脂酸(lysophosphatidicacid,LPA)促进卵巢癌发展的机制之一可能是通过LPA2和LPA3影响Bcl-2和Bax的表达，从而改变Bcl-2/Bax比例，抑制卵巢癌细胞凋亡，促进卵巢癌的发展。本研究结果显示，手术病理分期Ⅲ～Ⅳ期、组织学分级G2～G3患者Bcl-2/Bax比值>1比例高于手术病理分期Ⅰ～Ⅱ期、组织学分级G1患者，且Bcl-2/Bax比值与手术病理分期和组织学分级呈正相关。由此推断，分期较晚及组织学分级较高的卵巢癌中，细胞凋亡受到抑制，Bcl-2/Bax比值调控着卵巢癌的发生及发展。申薇等[10]成功建立了卵巢癌耐药细胞株SKOV3/DDP，并研究其与凋亡途径蛋白的关系，表明其耐药机制可能与Bcl-2的异常表达有关。周明杰等[11]研究发现，与亲本细胞株Hep3B细胞相比，在紫杉醇耐药的人肝癌细胞株Hep3B/TAX中抗凋亡蛋白Bcl-2的表达量显著升高，促凋亡蛋白Bax的表达量显著降低，表现出凋亡抵抗的现象，证实了肝癌细胞对紫杉醇的耐药机制主要是通过改变细胞线粒体上与凋亡相关蛋白的含量，导致凋亡抵抗现象的出现。黄锦宏等[12]研究发现，腺病毒介导的白细胞介素24基因对人肺腺癌细胞的放疗增敏作用之一是上调促细胞凋亡相关因子Bax，并下调细胞抗凋亡因子Bcl-2的表达，从而改变Bax/Bcl-2的比例来诱导肿瘤细胞凋亡。本研究结果显示，化疗无效患者Bcl-2/Bax比值>1的比例明显高于化疗有效患者，且Bcl-2/Bax比值与上皮性卵巢癌化疗耐药呈正相关，即上皮性卵巢癌化疗耐药与凋亡抵抗有关。

由此可见，在上皮性卵巢癌的发生发展过程中，Bcl-2/Bax比值增高，说明凋亡抑制作用占优势，导致肿瘤细胞不易于凋亡，积聚相对较多，恶性程度相对增高，并且影响了化疗药物的促凋亡作用，从而出现化疗耐药。

总之，Bcl-2/Bax比值>1提示上皮性卵巢癌患者的手术病理分期晚、组织学分级高及化疗耐药，联合检测Bcl-2、Bax蛋白并计算其比值可以作为早期诊断及预测化疗敏感性的指标。Bcl-2、Bax基因还可以成为抗卵巢癌的治疗靶点，通过调节Bcl-2、Bax蛋白的表达预防及治疗卵巢癌将会受到越来越多的重视。

[1] 李娜,高俊岩,刘敏.细胞凋亡和肿瘤的关系研究进展[J].当代医学,2009,15(16):13-14.

[2]HanahanD,WeinbergDA.Hallmarksofcancer:thenextgeneration[J].Cell,2011,144(5):646-674.

[3] 马莉，康石清，苗莉，等.凋亡相关基因Bax、FasL、c-FLIP在浆液性卵巢癌中的表达[J].现代肿瘤医学,2015,23(7):904-907.

[4]TawfikK,KimlerBF,DavisMK,etal.PrognosticsignificanceofBcl-2ininvasivemammarycarcinomas:acomparativeclinicopathologicstudybetween“triple-negative”andnon-“triple-negative”tumors[J].HumPathol,2012,43(1):23-30.

[5]ZhaoL,HeF,LiuH,etal.NaturalditerpenoidcompoundelevatesexpressionofBimprotein,whichinteractswithantiapoptoticproteinBcl-2,convertingittoproapoptoticBax-likemolecule[J].JBiolChem,2012,287(2):1054-1065.

[6]JiangH,ZhaoPJ,SuD,etal.ParissaponinⅠinducesapoptosisviaincreasingtheBax/Bcl-2ratioandcaspase-3expressioningefitinib-resistantnon-smallcelllungcancerinvitroandinvivo[J].MolMedRep,2014,9(6):2265-2272.

[7]SinghN,SarkarJ,SashidharaKV,etal.Anti-tumouractivityofanovelcoumarin-chalconehybridismediatedthroughintrinsicapoptoticpathwaybyinducingPUMAandalteringBax/Bcl-2ratio[J].Apoptosis,2014,19(6):1017-1028.

[8] 王琳,曹永成,牛爱军,等.胃癌组织中Bcl-2、Bax、p16和p53蛋白的表达和意义[J].分子诊断与治疗杂志，2012,4(6)：397-399.

[9] 刘红,方朝晖,李魁秀,等.卵巢癌中LPA受体、Bcl-2和Bax基因的表达和意义[J].河北医科大学学报，2008,29(5)：677-680.

[10] 申薇,梁冰锋,李秀荣,等.卵巢癌耐药细胞株SKOV3/DDP的建立及其与凋亡途径蛋白的关系[J].河北医科大学学报,2014,35(10):1135-1139.

[11] 周明杰,韩子午,范春雷,等.凋亡抵抗与人肝癌细胞对紫杉醇耐药关系的研究[J].浙江中医大学学报,2015,39(2):128-132.

[12] 黄锦宏,杨吉成,赵大国,等.腺病毒介导的白细胞介素24基因对人肺腺癌细胞的放疗增敏作用[J].临床荟萃,2015,30(1):89-94.

(本文编辑：赵丽洁)

Relationship of Bcl-2/Bax ratio with pathological factors and chemotherapyin primary epithelial ovarian cancer

WANGYing-xin1,LIChang-ying2,HESheng-li3

(1.Department of Obstetrics and Gynecology,Branch Hospital,the Workers′ Hospital of Tangshan City,Hebei Province，Tangshan 063000,China；2.Department of Food Inspection Center,Food and Drug Administration of Luanxian,Hebei Province，Luanxian 063700,China；3.Department of Surgery,the People′s Hospital of Luanxian County,Hebei Province，Luanxian 063700，China)

ObjectiveToexploretherelationshipofBcl-2/Baxratiowithpathologicalfeatures,sensitivitytoplatinum-basedchemotherapyofpatientswithprimaryepithelialovariancancer.MethodsTheexpressionsofBcl-2proteinandBaxproteinwereexaminedin61paraffinspecimensofepithelialovariancarcinomabySPimmuohistochemicalmethodtocalculateBcl-2/Baxratio,thentoexploretherelationsbetweenBcl-2/Baxratioandpathologicalfeatures,sensitivitytoplatinum-basedchemotherapyofpatientswithprimaryepithelialovariancancer.ResultsTheproportionofBcl-2/Bax>1intheoperational-pathologicalstageⅢ-Ⅳ,histologicalgradeG2-G3andchemotherapyresistantpatientswererespectivelyhigherthanthatinoperational-pathologicalstageⅠ-Ⅱ,histologicalgradeG1andchemotherapysensitivepatients(P<0.01).TherewerenostatisticalsignificanceintheproportionsofBcl-2/Bax>1patientswithdifferentages,pathologicalsubtypesandasceticfluid(P>0.05).TherewerepositivecorrelationbetweenBcl-2/Baxratioandchemotherapyresistance,operational-pathologicalstageandhistologicalgrade(P<0.01),whileBcl-2/Baxratioshowednocorrelationwithage,pathologicalsubtypeandasceticfluid.ConclusionBcl-2/Bax>1hascloserelationwiththeoperational-pathologicalstageandhistologicalgradeofpatientswithprimaryepithelialovariancancer.PatientswithprimaryepithelialovariancancerandBcl-2/Bax>1maybeinsensitivetoplatinumchemotherapy.

ovarianneoplasms;genes,Bcl-2；Bcl-2-associatedXprotein

2015-06-03；

2015-08-25

河北省科学技术研究与发展指导计划(20121574)

王颖欣(1975-)，女，河北唐山人，河北省唐山市工人医院分院副主任医师，医学硕士，从事妇产科疾病诊治研究。

R

A

1007-3205(2015)11-1282-04