SHH在乳腺癌组织中的表达及临床意义

肖 洋 陈剑锋 胡惠敏

SHH在乳腺癌组织中的表达及临床意义

肖 洋1陈剑锋2胡惠敏3

目的探讨SHH蛋白在乳腺及乳腺浸润性导管癌组织中的表达及与乳腺癌组织浸润、转移的关系。方法65例浸润性导管癌组织中，临床TNM分期Ⅰ、Ⅱ期58例，Ⅲ、Ⅳ期7例。另外取肿瘤远处正常乳腺组织或非癌组织（乳腺纤维腺瘤或腺病等）30例。用免疫组化方法检测石蜡包埋的乳腺非癌组织及乳腺癌组织中的SHH和ER、PR、HER2的蛋白表达。所有患者均经外科手术治疗，病理诊断明确，术前未经放、化疗。结果SHH在乳腺癌组织中高表达（P＜0.05）；SHH同时还与临床TNM分期和淋巴结转移相关（P＜0.05）。SHH和HER2蛋白表达呈正相关（r=0.370，P=0.003）。结论SHH可能是预测乳腺癌组织浸润、转移有用的指标；联合检测SHH和HER2有可能作为判断乳腺癌预后、筛选高危转移患者的有效指标并有可能用于指导乳腺癌的个体化治疗。

乳腺癌；SHH；HER2

Hh（Hedgehog）信号通路已知在许多恶性肿瘤中起着至关重要的作用，但其主要成员Sonic Hedgehog（SHH）在乳腺浸润性导管癌中的表达及其与其临床病理参数及ER、PE、HER2蛋白表达之间的关系研究较少，本组实验试图探讨。

1 材料与方法

1.1 标本来源

收集苏州市立医院手术切除乳腺癌标本65例，取自病理科2001年1月～2012年12月的存档蜡块，病理诊断明确，均为浸润性导管癌住院患者，有详细的临床资料，年龄27～84岁，中位年龄56.54岁；取同期患者乳腺癌旁正常组织或乳腺纤维腺瘤或腺病30例为对照组织。全部患者术前均未接受放疗或化疗。

1.2 方法

采用免疫组化MaxEnvision染色方法，SHH抗体购自Abcam公司，采用1：200比例稀释，用柠檬酸盐缓冲液修复，HER2为兔抗人多克隆抗体与ER、PR及二抗等一起购自福州迈新公司。常规石蜡包埋，4 μm厚连续切片。实验中以PBS液代替一抗作为阴性对照；以试剂公司提供的阳性对照片作为阳性对照。

1.3 结果判定

采用光学显微镜观察。SHH阳性表达定位于细胞浆，HER2阳性表达定位于细胞膜；ER、PR阳性表达定位于细胞核，呈现棕黄色颗粒为阳性信号，结果判定方法按照Hong KD［1］方法。HER2阳性表达于乳腺癌肿瘤细胞膜，呈黄褐色细颗粒状，其评分标准按照《乳腺癌HER2检测指南》的标准评分。

1.4 数据分析

统计学方法应用SPSS 13.0软件进行统计分析，定性资料的统计学分析应用χ2检验；采用Spearman等级相关性分析SHH和HER2蛋白表达的相互关系，以α=0.05为检验水准，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 SHH在乳腺非癌、乳腺癌组织及ER、PR、HER2在乳腺癌组织中的表达

30例非癌乳腺组织中SHH蛋白的表达率为6.7%（2/30）且均为弱阳性、SHH在乳腺癌组织中的阳性表达率为47.7%（31/65）；HER2在65例乳腺癌中的阳性表达率为30.8%（20/65）；ER的表达率为50.8%（33/65）；PR的表达率为41.5%（27/65）。SHH蛋白的表达在乳腺癌组织和非癌乳腺组织中的阳性表达情况间差异有统计学意义（P＜0.05），在乳腺癌中高表达。

2.2 SHH、HER2蛋白的表达与乳腺癌组织临床病理特征的关系

在65例乳腺癌组织中，SHH蛋白的表达与患者年龄、组织学分级、ER、PR状态无关（P＞0.05），但与肿瘤临床TNM分期、淋巴结转移相关（χ2=7.153、18.131，P＜0.05）；HER2的表达仅与乳腺癌组织淋巴结转移相关（χ2=4.815，P＜0.05）。

2.3 乳腺癌组织中SHH和HER2蛋白表达的相关性分析

Spearman等级相关分析结果显示SHH和HER2蛋白表达呈正相关（r=0.370，P=0.003）.

3 讨论

Sonic Hedgehog（SHh）在脊椎动物器官形成以及某些癌症的发展中的扮演着重要的角色，其激活被认为与多种癌的许多侵袭性临床行为相关联［2］。Hedgehog信号传导通路下游的细胞内转录调控因子GLI1的过度表达，调控恶性肿瘤细胞的增殖、侵袭及转移过程［3］。这是Hedgehog信号通路活化目前比较公认的标志［4］，多数学者认为Hedgehog信号通路激活的机制之一是由细胞外配体蛋白如SHH与受体PTCH结合，诱导原癌基因SMO的激活从而引起Hedgehog信号通路的激活［5］，这已在小细胞肺癌、消化道肿瘤、胰腺癌、肝癌和脑恶性肿瘤中得到证实［6］。本组实验结果显示：SHH蛋白的表达在乳腺浸润性导管癌组织中的表达高于乳腺非癌（包括癌旁正常乳腺组织及乳腺纤维腺瘤或乳腺病），与Wei Cui［7］的研究结果相一致，提示SHH在乳腺癌的早期发生发展中起着重要作用，可能是乳腺癌发生的早期事件。进一步分析SHH蛋白表达与乳腺浸润性导管癌临床病理参数的关系：SHH蛋白的表达与肿瘤淋巴结转移及肿瘤TNM分期密切相关并具有统计学意义，但其阳性表达恰恰是淋巴结未转移组多于转移组；TNM分期的Ⅰ、Ⅱ期多于Ⅲ、Ⅳ期，亦有统计学意义，我们推测：SHH在早期乳腺癌细胞形成阶段起重要作用，而在肿瘤的进一步发生发展及转移的调控中受到抑制。然而，这一发现的意义仍有待澄清，需要进行进一步的研究来解决这个问题。本实验另一结果：SHH蛋白表达的免疫组化结果在与乳腺癌常规检测的ER、PE、HER2蛋白表达的Spearman等级相关分析时发现：SHH和HER2蛋白表达呈正相关（r=0.370，P=0.003），而与雌、孕激素受体无关。HER2/erbB2属Her/erbB家族，受体二聚体化是Her/erbB家族活化的重要方式，胞外信号诱导二聚体形成，活化胞内段酪氨酸激酶，使自身酪氨酸位点磷酸化，并通过募集各种接头蛋白，依次激活下游信号通路并参与了肿瘤细胞的增殖、分化、迁移、黏附、抗凋亡和细胞转化［8］。SHH与HER2的相关性提示我们：检测SHH是否有可能辅助HER2更进一步作为判断乳腺癌预后、筛选高危转移患者的有效指标并有可能利用Hedgehog信号通路的激活而用于指导乳腺癌的个体化治疗。

［1］ Hong KD，Lee Y，Kim BH，et al. Expression of GLI1 correlates with expression of lymphangiogenesis proteins，vascular endothelial growth factor C and vascular endothelial growth factor receptor 3，in colorectal cancer［J］. Am Surq，2013，79（2）: 198-204.

［2］ Ramaswamy B，Lu Y，Teng KY，et al. Hedgehog Signaling Is a Novel Therapeutic Target in Tamoxifen-Resistant Breast Cancer Aberrantly Activated by PI3K/AKT Pathway［J］. Cancer Res，2012，72（19）: 5048-5059.

［3］ Jeng KS，Sheen IS，Jeng WJ，et al. High expression of Sonic Hedgehog signaling pathway genes indicates a risk of recurrence of breast carcinoma［J］. Onco Tarqets Ther，2013，27（7）: 79-86.

［4］ Kolterud A，Toftgard R. Strategies for Hedgehog inhibit ion and its potential role in cancer treatment［J］. D rug Discov Today Therapeutic Strategs，2007，4（4）: 229-235.

［5］ Che J，Zhang F Z，Zhao CQ，et al. Cyclopamine is a novel Hedgehog signaling inhibitor with significant anti proliferative，anti invasive and anti estrogenic potency in human breast cancer cells［J］. Oncol Lett，2013，5（4）: 1417-1421.

［6］ Clement V，Sanchez P，de Tribolet N，et al. HEDGEHOGGLI1 signaling regulates hum angliom a growth， cancer stem cell self renew and tumorigenicity［J］. Curr Bio，2007，17（2）: 165-172.

［7］ Cui W，Wang LH，Wen YY，et al. Expression and regulation mechanisms of Sonic Hedgehog in breast cancer［J］. Cancer Sci，2010，101（4）: 927-933.

［8］ Meric-Bernstam F，Hung MC. Advances in targeting human epidermal growth factor receptor-2 signaling for cancer therapy［J］. Clin Cancer Res，2006，12（21）: 6326-6330.

如何撰写论文的“序言”

简要介绍有关本课题研究的一般情况，包括动机、过去研究的情况、方法、目的和所获得的主要成果或特点。这段文字不宜超过100～200字。

Expression and Clinical Significance of SHH in Breast Cancer

XIAO Yang1CHEN Jianfeng2HU Huimin31 Health College of Suzhou，Suzhou 215009，China，2 Municipal Hospital of Suzhou，Suzhou 215008，China，3 Hospital of Xiangcheng District，Suzhou 215000，China

ObjectiveTo investigate the SHH protein expression in normal breast and breast cancer tissues and study the correlation between SHH protein expression in breast cancer tissues and tumor invasion and metastasis.MethodsImmunohistochemistry was used to detect the SHH，ER，PR and HER2 protein expression in paraffin-embedded normal breast tissues（only SHH）and breast cancer tissue samples，sixty-five paraffin-embedded cancer tissue samples were selected from primary breast cancer，thirty-nine patients had lymph node metastasis，fifty-eight patients were of TNM stageⅠtoⅡstage，and 7 were of Ⅲ toⅣ. Another 30 paraffin-embedded tissue blocks of normal breast were selected as the control group. All patients with breast cancer were treated surgically and diagnosed histologically，without preoperative chemotherapy or radiotherapy.ResultsSHH protein expression in breast cancer was significantly higher than in normal breast，and there was a close relationship between SHH，HER2 protein expression with the degree oflymph node metastasis（P＜0.05），SHH protein expression was alsoclose relationship between TNM stage and lymph node metastasis（P＜0.05）. The expression of SHH was positively correlated to that of HER2 in breast cancer（r=0.0.370，P=0.003）.ConclusionSHH activation is correlated with a more aggressive clinical behavior in breast carcinomas. The expression of SHH and HER2 protein combined detection can provide a reference value in breast cancer metastasis，patient’s condition development and prognosis.

Breast cancer，SHH，HER2

R361

A

1674-9316（2015）31-0167-02

10.3969/j.issn.1674-9316.2015.31.124

1 215009 苏州卫生职业技术学院

2 215008 苏州市立医院

3 215000 苏州相城区医院

陈剑锋，Email：chen-l-075@163.com

苏州市科技局项目（项目编号：sysd2012070）