论多管发酵法检测生活饮用水中大肠菌群

【摘要】目的　利用多管发酵法检测生活饮用水中大肠杆菌群情况，对被大肠菌群污染的情况做初步判断。方法　采取生活饮用水80份水样，其中包括井水25份，蓄水池水35份，城镇自来水20份，利用多管发酵法检测生活饮用水中大肠菌群，分析大肠杆菌群污染情况。结果 在80份水样中，总体合格率为87.5%，井水25份中其合格率为88%，蓄水池水35份的合格率为85.71%，城镇自来水20份的合格率为90%，三种不同生活饮用水合格率之间差异无统计学意义，P＞0.05。结论 我们日常中的生活饮用水的合格率有待提高，同时要加强水污染管理。

doi:10.3969/j.issn.1674-9316.2015.01.004

作者单位：253018 德州市德城区疾病预防控制中心

Theory of Multiple Tube Fermentation Detection of Coliform Bacteria in Drinking Water

CUI Lilin　Dezhou Center for Disease Control and prevention，Dezhou 253018，China

【Abstract】

Objective　To study multiple tube fermentation method to detect coliforms in drinking water，the coliform contamination situation of preliminary judging. Methods 80 water samples taken from drinking water including well water 25 parts，35 parts of the reservoir water，20 parts of urban water

supply，the use of multiple tube fermentation method to detect coliform bacteria in drinking water analyzes coliform contamination. Results In the 80 water samples ，the overall pass rate of 87.5%，well there are　25 parts，a pass rate is 88 percent ，35 parts water reservoir coliform bacteria ，a pass rate is 85.71 percent ，20 parts of the town ，a pass rate of 90%，there were no statistically significant difference between the rate about three different drinking water passing，P＞ 0.05. Conclusion The pass rate of our daily drinking water needs to be improved.

【Key words】Multiple tube fermentation method，Drinking Water，Coliforms

大肠菌群是一群可以发酵乳糖、产酸产气的革兰染色的阴性无芽孢杆菌，主要来源于动物和人类的粪便，严重的污染的水资源 ［1］。有关文献显示，我国一直以总大肠菌群作为粪便污染的指标 ［2］。本研究通过多管发酵法检测生活饮用水中大肠菌群数，现报道如下。

1　材料与方法

1.1　材料

1.1.1　实验材料　井水25份、蓄水池水35份、城镇自来水20份。

1.1.2　仪器　不锈钢手提式灭菌器（由郑州设备有限公司生产）、恒温培养箱（由佳东科技公司生产）、海尔冰箱（由泓杰有限公司生产）等。

1.2　原理

根据伊红美兰平板上具有的典型的紫黑色带有金属光泽的菌落来计量大肠菌群数。

1.3　试剂

1.3.1　伊红美蓝培养基的制备　先将25 g琼脂加入500 ml的蒸馏水中，加热完全溶解后，再加入1.5 g磷酸氢二钾、8 g蛋白胨，均匀混合并完全溶解，按照一定的剂量分装于烧瓶内，经灭菌、冷却、凝固备用。

1.3.2　三倍浓缩乳糖蛋白胨培养液制备 在1000 ml的蒸馏水中加入25 g蛋白胨、15 g氯化钠和乳糖、10 g牛肉膏加热溶解，将PH值调整在7.1～7.5，再加入1.5%的2 ml的溴甲酚紫乙醇溶液，完全混匀，分装于试管中，放于110℃～120℃高压蒸汽灭菌器内灭菌15～20 min，贮存于冰箱备用。

1.3.3　麦康凯琼脂培养基制备　将20 g蛋白胨、10 g乳糖、5 g牛胆盐、5 g氯化钠、0.03 g中性红、14 g琼脂溶解于蒸馏水，分装入试管中，110～120 ℃高压灭菌15～20 min，调节PH为7.1±0.2。

2　试验方法

2.1　初发酵试验

在两个装有已经灭菌的30 ml三倍浓缩乳糖蛋白胨培养液的试管内，无菌操作加入100 ml水样，在10支装有已经灭菌的5 ml的三倍浓缩乳糖蛋白胨培养液的试管中，无菌加入水样10 ml均匀混合，放于37℃恒温箱培养2 d。

2.2　复发酵及转种试验

自初发酵试验中的产酸产气的阳性管中取1滴置于EC培养基中，放入45℃的水浴箱中，培养2 d左右，阴性：所有管均不产气，产气的再种于伊红美兰琼脂平板，45℃培养24 h，平板上为紫黑色带有金属光泽等典型菌落则为大肠菌群阳性。以MPN检索表为评价标准，根据证实为大肠菌群的阳性管数测量100 ml水样中大肠菌群的数值。

2.3　选择性培养基挑取菌落和生化鉴定

采用大肠菌群选择性培养基麦康凯琼脂平板转种试验为大肠菌群阳性的菌落，并选取培养后典型菌落进行生化鉴定，采用大肠菌群生化鉴定盒，根据操作说明书和鉴定结果判定进行操作和鉴定。

2.4　统计学处理

采用SPSS 17.0软件进行统计分析，计数资料以%表示，采用χ 2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

3　结果

在80份水样中，共检出大肠菌群10分，总体合格率为87.5%，井水25份中的合格率为88%，蓄水池水35份的合格率为85.71%，城镇自来水20份的合格率为90%，三种不同生活饮用水合格率之间差异无统计学意义（P＞0.05）。

4　讨论

很多文献报道，水污染情况越来越严重，导致生活饮用水的合格率仅为85%左右，本次研究结果与之相近 ［3］。本次研究结果显示，在80份水样中，总体合格率为87.5%，井水合格率为88%，蓄水池水的合格率为85.71%，城镇自来水的合格率为90%，三种不同生活饮用水合格率之间差异无统计学意义，P＞0.05。由此可见，我们日常中的生活饮用水的合格率有待提高。