MGMT基因启动子去甲基化抑制MNU诱导的人胃上皮细胞恶性转化的机制研究

陈月霞，齐宏妍(浙江大学医学院病理与病理生理学教研室，浙江杭州310058)

MGMT基因启动子去甲基化抑制MNU诱导的人胃上皮细胞恶性转化的机制研究

陈月霞，齐宏妍△
(浙江大学医学院病理与病理生理学教研室，浙江杭州310058)

目的:研究O6-甲基鸟嘌呤DNA甲基转移酶(MGMT)在N-甲基亚硝基脲(MNU)诱导的人胃上皮细胞恶性转化中持续激活的分子调控机制。方法:建立MNU诱导的人正常胃上皮细胞(GES-1)恶性转化模型，real-time PCR和Western blot检测建模中1周、4周和8周MGMT的动态表达水平。报告基因实验检测MGMT启动子区的转录激活。MSP和BSP定性定量检测MGMT基因启动子区CpG的甲基化程度。ChIP实验检测DNA甲基化转移酶(DNMT1)和H3K9met3、H3K4met2在MGMT基因转录激活中的作用。Soft agar、平板克隆及细胞增殖实验检测MGMT基因表达上调在GES-1细胞恶性转化中的功能。结果: MNU诱导的GES-1恶性转化细胞中，MGMT的表达持续激活，但MGMT启动子区报告基因并不被激活。MNU刺激显著抑制MGMT基因启动子区CpG的甲基化水平，同时抑制DNMT1与MGMT基因的结合，而且调控基因转录抑制和转录激活相关的组蛋白修饰类型H3K9met3与H3K4met2在该区域的富集分别减少和增加。此外，MGMT基因的高表达，抑制MNU诱导的GES-1恶性转化细胞的增殖和克隆形成能力，利用MGMT特异性抑制剂O6-BG处理细胞，显著促进MNU诱导的细胞恶性转化进程。结论: MNU通过诱导MGMT基因DNA去甲基化，持续激活其表达。MGMT的表达上调抑制MNU诱导的人胃正常上皮细胞恶性转化。本研究揭示了MGMT基因在MNU诱导的细胞恶性转化中的表达调控机制，为进一步研究化学致癌物诱发肿瘤发生提供了新的实验依据。

△E-mail: qihongyan@zju.edu.cn