抗内皮细胞抗体检测对老年ANCA相关性小血管炎病情活动程度的影响

抗内皮细胞抗体检测对老年ANCA相关性小血管炎病情活动程度的影响

蒋茵唐开奖宋星慧覃玉花韦阳妙

(广西医科大学第四附属医院，广西柳州545000)

摘要〔〕目的探讨抗内皮细胞抗体(AECA)检测对老年抗中性粒细胞胞质抗体(ANCA)相关性小血管炎病情活动程度的预测价值。方法选取56例老年抗中性粒细胞胞浆抗体相关性小血管炎(AASV)患者作为观察组，60例健康献血者作为对照组，全部研究对象采集固定的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)为抗原，细胞酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测血清AECA，比较两组患者AECA阳性率的差异，分析AASV患者AECA与临床病情活动性指标的相关性。结果观察组血清AECA阳性率明显高于对照组(P<0.05)，不同类型AASV患者中的血清AECA阳性率比较发现，变应性肉芽肿性血管炎血清AECA阳性率明显高于显微镜下多血管炎和肉芽肿性多血管炎，肉芽肿性多血管炎血清AECA阳性率明显高于显微镜下多血管炎(P<0.05)，AASV病情活动期血清AECA阳性率、血清AECA和血沉(ESR)水平均明显高于病情缓解期(P<0.05)，且AECA阳性组BVAS分值和ESR水平明显高于AECA阴性组患者(P<0.05)。结论抗内皮细胞抗体在AASV诊断和鉴别诊断、病情活动程度预测中具有重要的价值。

关键词〔〕抗内皮细胞抗体；抗中性粒细胞胞浆抗体；小血管炎

中图分类号〔〕R593〔

通讯作者：唐开奖(1968-)，男，副主任医师，主要从事风湿免疫学研究。

第一作者：蒋茵(1981-)，女，主治医师，主要从事风湿免疫学研究。

抗中性粒细胞胞质抗体(ANCA)相关性小血管炎(AASV)是自身免疫性炎症反应造成的中小血管炎症性疾病，呈暂时缓解性或复发性，同时病情呈持续发展的免疫系统疾病〔1〕。AASV 疾病主要是指变应性肉芽肿性血管炎(EGPA)、显微镜下多血管炎(MPA)和肉芽肿性多血管炎(GPA)〔2〕。EGPA、MPA和GPA患者血液ANCA阳性表达率超于80%〔3〕，因此被称之为AASV。AASV常累及全身多脏器损伤，临床症状复杂，目前尚缺乏有效的病情活动程度的评价指标。AECA是血管炎症性疾病的重要生物学标志，AECA在血管性炎症患者中的变化及其临床意义的研究较多〔4〕，但关于抗内皮细胞抗体检测对老年AASV病情活动程度的预测价值研究较少。

1资料与方法

1.1临床资料选取2009年1月至2014年1月我院住院部或门诊部老年AASV患者56例作为观察组，纳入标准：年龄>60岁，均符合美国风湿病学会老年AASV活动期的诊断标准〔5〕，其ANCA阳性率>80%。同期选取60例健康献血者作为对照组。观察组男44例，女12例，年龄：60～74〔平均(67.42±6.31)〕岁，其中EGPA 10例，病程(77.01±13.06)个月，MPA 16例，病程(13.09±5.21)个月，GPA 30例，病程(10.31±3.11)个月；对照组男46例，女14例，年龄61～77〔平均(76.34±10.77)〕岁；两组患者性别、年龄等一般资料比较差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。本研究已经通过本医院伦理委员会批准，并获取全部研究对象的知情同意。

1.2检测方法全部研究对象空腹采集静脉血，离心操作收集血清，采用细胞酶联免疫吸附试验测定AECA。具体步骤：抗原获取通过体外分离和培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC)，抗原鉴定通过人Ⅷ因子相关抗原免疫组化鉴定HUVEC符合内皮细胞的组织学特点。细胞酶联免疫吸附试验(Cyto-ELISA)法检测：体外分离和培养HUVEC混合培养，形成单层内皮细胞，同时将其转移至96孔细胞培养板继续反复细胞培养种植。37℃、5%CO2环境下孵育，2 d后形成单层内皮细胞，磷酸盐缓冲液(PBS)反复冲洗3次，采用0.5%Triton-X-100、0.2%戊二醛固定15 min，37℃环境下采用2%牛血清白蛋白封闭120 min，37℃环境下放入1∶50待检测血清，120 min后放入酶标羊抗人IgM型抗体(Sigma 公司)，采用四甲基联苯胺(TMB)显色剂显色，终止，读取数值(P/N)，P(检测值)/N(阴性对照数值)= P(检测值)-B(空白对照数值)/N(阴性对照数值)-B(空白对照数值)。P/N数值大于正常对照组平均数值3个标准差则作为阳性。

1.3观察指标比较AASV患者和健康献血者、不同类型AASV(EGPA、MPA和GPA)、不同AASV病情活动程度间的AECA阳性率的差异。比较不同病情活动程度患者血清AECA阳性率的差异，其中治疗前，血管炎症状较重，严重影响正常生活提示病情活动期，患者经有效治疗后，血管炎症状明显减轻，不影响正常生活提示病情缓解期。参照明翰血管炎临床病情活动(BVAS)评分标准〔6〕，比较AECA阳性AASV患者和AECA阳性AASV患者间BVAS分值的差异，同时比较AECA阳性AASV患者和AECA阳性AASV患者间血沉(ESR)水平的差异，其中BVAS分值越高，ESR水平越高，病情活动程度越严重。

2结果

2.1组间血清AECA阳性率比较观察组血清AECA阳性率(62.50%，35例)明显高于对照组(3.33%，2例)(P<0.05)。EGPA血清AECA阳性率〔8例(80.00%)〕明显高于MPA(43.75%，7例)和GPA(66.67%，20例)，GPA阳性率明显高于MPA(P<0.05)。治疗前病情活动期血清AECA阳性率(62.50%，35例)明显高于缓解期(25.00%，14例)(P<0.05)。

2.2不同病情活动程度血清AECA和ESR水平比较治疗前病情活动期血清AECA(1.75±0.61)和〔ESR(45.62±10.11)mm/h〕水平均明显高于缓解期〔(1.08±0.14)，(16.52±8.01)mm/h〕(P<0.05)。

2.3AASV患者AECA与临床病情活动程度的相关性AECA阳性组BVAS分值〔(18.32±6.21)分〕和ESR水平〔(58.31±11.31)mm/h〕明显高于AECA阴性组〔(8.56±4.32)分，(24.47±8.21)mm/h〕(P<0.05)。

3讨论

AASV是中小血管炎症的类型之一，以血管壁炎症为主要病理发病机制，导致了血管炎症发生和器官组织供血异常、组织缺血坏死。由于多种脏器受累及，尚缺乏特异性的AASV诊断及其鉴别诊断、评价病情活动程度、治疗效果和预后的有效方法。国内数据统计中小血管炎的发生率约20/100万〔7〕，并呈逐年上升，但国内尚缺乏有效的统计学数据。临床上根据其炎症累及血管大小，病理特点、部位和类型评估其病情活动程度，病情较轻者可能表现为皮肤轻微病变，但病情较重的可能影响患者的视力，肺、肾、脑等重要脏器，导致多器官功能异常甚至是严重威胁患者的生命健康。AECA自Lindquist发现以来，其在血管炎症性疾病中的作用机制成为热门研究领域〔8〕。相关研究显示AECA在血管炎症性疾病中呈高表达状态，是血管炎症性病变和血管受损的重要标志，其高表达具有促进系统性血管炎症疾病的发生和发展〔9〕。

本研究揭示了血清AECA阳性率在AASV的诊断和分类诊断中具有重要的意义，在不同AASV类型中血清AECA阳性率差异显著，与文献报道结果相一致〔10〕。另外血清AECA在病情程度的评估中具有重要的价值，与相关文献报道具有高度相符性〔11〕。相关研究表明，缓解期AASV患者AECA阴性，且随着病情的不断缓解，其血清AECA水平不断下降并逐渐趋于正常水平〔12〕。另有研究〔13〕表明，AASV疾病复发前期，其血清AECA呈升高趋势，AECA持续阳性与复发风险明显相关。在临床治疗期间，如发现AECA呈持续性阳性，则应维持性给予有效的临床治疗，AECA在指导临床治疗中亦具有重要的作用〔14〕。另一方面， 研究结果证实了AECA与AASV患者病情活动程度紧密相关。因此，AECA在AASV患者病情活动程度的预测中具有重要的价值。

4参考文献

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〔2014-04-15修回〕

(编辑袁左鸣)