梗阻性黄疸模型建立及bcl-2、肝功能、肝脏病理变化的研究

席　量　樊向文*　李尚东

（内蒙古包钢医院 肿瘤外科，内蒙古 包头 014010）

梗阻性黄疸模型建立及bcl-2、肝功能、肝脏病理变化的研究

席量樊向文*李尚东

（内蒙古包钢医院 肿瘤外科，内蒙古 包头 014010）

目的 研究梗阻性黄疸时在不同时间段内肝脏bcl-2、肝功能以及肝脏病理变化的相互影响。方法 将大鼠分为瞬间结扎组、梗阻性黄疸组。结果 ①血清ALT、AST、Tbil、Dbil、TBA、ALP、GGT值在梗阻性黄疸组各个时相均明显高于对照组。②肝组织中bcl-2表达在梗阻性黄疸组各个时相均明显高于对照组， 主于汇管处表达。③肝细胞呈不同程度肿胀、脂肪变性、坏死。结论 梗阻时间延长bcl-2表达、肝功能、肝细胞坏死明显升高，在时间上存在一致性。

梗阻性黄疸；肝功能；BCL-2；凋亡；动物模型

梗阻性黄疸时导致了机体各系统器官的损害以及相应的病理生理改变，本研究利用大鼠梗阻性黄疸模型对大鼠梗阻性黄疸时在不同时间段内肝脏bcl-2、肝功能、肝脏病理变化的影响进行了研究，对梗阻性黄疸肝细胞凋亡影响的机制作探讨。

1　主要材料、方法与结果

方法：选用健康雄性Wistar大鼠54只，随机将大鼠分为：①假手术组：9只大鼠做胆总管游离和瞬间结扎；②梗阻性黄疸组：结扎胆总管4、8、12、16、20 d组，每组9只。用20%乌拉坦注射液麻醉后，经上腹部正中切口将胆总管双重结扎，术后自由进食水。大鼠观察指标：①下腔静脉抽血采用多道全自动生化分析仪检测血清中ALT、AST、TBil、DBil、TBA、ALP、GGT。②肝组织 HE 染色后光镜下观察肝脏的病理改变。③肝组织Bcl-2蛋白测定，用免疫组化SP法测定结果。

1.1肝脏组织病理学改变：肝脏病理切片HE染色后光镜下见：对照组肝细胞无肿胀、排列整齐，梗阻性黄疸组肝细胞呈不同程度肿胀、脂肪变性，8 d组肝细胞内或细胞间淤胆，纤维组织增生，胆小管扩张及中度增生，胆栓形成，12 d组见肝细胞结构改变，可见细胞凋亡，表现为细胞质浓缩，核染色质向核仁或核周边聚集，结扎20 d组，大范围的汇管区周围肝细胞变性，纤维组织增生向肝小叶内扩展，可见肝细胞坏死。随着梗阻时间延长肝组织病理改变逐渐加重。

1.2免疫组化测肝组织Bcl-2的表达：各梗阻性黄疸组大鼠肝组织中均有Bcl-2表达，细胞质内出现棕黄色颗粒或匀质样棕黄色结构为Bcl-2免疫阳性细胞，对照组肝组织未见Bcl-2蛋白表达，梗阻性黄疸4、8、12、16、20 d组Bcl-2蛋白表达均与对照组比较有显著性差异（P＜0.01）这些变化提示梗阻性黄疸后Bcl-2蛋白表达随着梗阻时间延长明显升高。

1.3各组大鼠肝功能的变化：血清ALT、AST、Tbil、Dbil、TBA、ALP、GGT值在梗黄组各个时相均明显高于对照组，并且随着梗阻时间延长逐渐增高；梗黄12 d组见AST、ALT 、GGT明显升高，与对照组比较有差异（P＜0.05）；TBA于梗黄8 d组升高明显与对照组比较有显著性差异（P＜0.01）。20 d组ALT、AST、ALP、GGT数值回落与对照组比无显著性差异。提示梗黄后肝功能明显受损，胆汁酸浓度显著升高进一步加重对肝细胞损害。肝细胞不可逆转性坏死，导致肝功能丧失。

2　讨 论

梗阻性黄疸是外科常见病和多发病，有研究证实［1-7］，瘀胆时肝脏发生细胞坏死并不多见，其常见的病理形态改变为细胞凋亡。本研究建立梗阻性黄疸大鼠模型，并对梗阻性黄疸肝细胞凋亡相关基因bcl-2表达，肝功能以及肝脏病理变化的影响进行了研究。梗阻性黄疸时，高胆红素血症严重影响肝细胞能量代谢和肝功能，引起肝细胞凋亡增多，肝再生受抑制。有研究证明，肝细胞凋亡是梗阻性黄疸肝细胞死亡的主要形式.在梗阻性黄疸引起的肝损伤发挥重要作用。而其他报道［2］也确定了肝细胞损伤在7 d内或在14 d内。在本实验研究观察到在梗阻性黄疸大鼠肝脏细胞凋亡改变贯穿整个病程，血清ALT、AST、Tbil、Dbil、TBA、ALP、GGT值在梗阻性黄疸组各个时相均明显高于对照组，并且随着梗阻时间延长逐渐增高；其中Tbil、Dbil、ALP与对照组比较有显著性差异（P＜0.01）；梗阻性黄疸12 d组见AST、ALT、GGT明显升高，与对照组比较有差异（P＜0.05）；TBA于梗阻性黄疸8 d组升高明显与对照组比较有显著性差异（P＜0.01）。20 d组ALT、AST、ALP、GGT数值回落与对照组比无显著性差异［3］。

总之，研究中我们成功建立梗阻性黄疸模型，梗阻性黄疸后肝脏细胞损伤逐渐加重，凋亡细胞增加，开始进入自我调节及修复过程，适应梗阻性黄疸的病理环境（16 d前），20 d肝细胞坏死。16～20 d是肝细胞损伤反应最强烈的时点，研究表明，梗阻性黄疸后16～20 d为组织学量化的一个有效时间点。故临床胆道梗阻发病20 d，应及时测定胆汁淤积性肝损伤的程度，评估病情，应用有效药物治疗或手术治疗。

［1］ Schattenberg JM，Galle PR，Schuchmann M.apoptosis in liver disease［J］.Liver lnt，2006，26（8）：904-911.

［2］ Bergheim I，Guo L，Davis MA，et al.Critical role of plasminogen activator inhibitor-1 in cholestatic liver injury and fibrosis［J］.J Pharmacol Exp Ther，2006，316（2）：592-600.

［3］ 李华，黎一呜，戴维.梗阻性黄疸术后肝内胆汁淤积发生机制的实验研究［J］.西安交通大学学报（医学版），2011，32（3）：335-339.

［4］ 骆小江，张培建，蒋永军，等.胆汁内引流对梗阻性黄疸大鼠胃黏膜的保护作用及机制［J］.中国普通外科杂志，2014，23（2）：198-201.

［5］ 王振龙，余勇，陈博艺，等.终末期肝病模型评分在梗阻性黄疸外科治疗中的意义［J］.中华肝胆外科杂志，2014，20（7）：503-506.

［6］ 张吉水，姬汉书，高新，等.TSGF和CA19-9在大鼠梗阻性黄疸模型肝组织中的表达及意义［J］.浙江临床医学，2014，16（4）：516-518.

［7］ 李宝，邓伟.可溶性CD40L在大鼠梗阻性黄疸肝损伤作用的实验研究［J］.广西中医药大学，2014.

R735

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1671-8194（2015）10-0072-01