安格斯肉牛胚胎移植试验报告

王建军,汪裕龙

(武威市畜牧兽医科学研究院，甘肃 武威 733000)

安格斯肉牛胚胎移植试验报告

王建军,汪裕龙

(武威市畜牧兽医科学研究院，甘肃 武威 733000)

〔目的〕为探讨和研究安格斯肉牛胚胎移植在武威市的应用前景，指导我市的高档肉牛养殖，〔方法〕我们以西杂母牛为受体，进行了10头安格斯双胚、6头输精后7天移植单胚、389头单胚、10头移植前注射黄体酮和促黄体素a3共4项试验研究。〔结果〕双胚移植受孕2头，产犊结果都为单胎；移植加输精0头、单胚移植受孕率为16.8%、注射激素受孕率为10%。〔结论〕使用体内胚胎，加强妊娠牛的饲养管理，可能会提高产双犊几率，在以后生产中可以推广和应用；输精后牛各项激素和生殖受孕环境发生变化不适合于胚胎移植，在生产中利用不大；胚胎移植同步注射黄体酮和促黄体素a3在提高牛体外胚胎妊娠率的利用中作用不大。

安格斯肉牛;胚胎移植

近年来，安格斯肉牛因其良好的产肉性能，国内养殖数量增长较快，但引进活牛市场价格高昂，采取胚胎移植技术，可大幅减低活牛成本和快速进行良种扩繁。为探讨和研究安格斯肉牛胚胎移植在我市的应用前景，武威市畜牧兽医科学研究院和武威美加农畜牧科技有限公司合作，与2013年8月～2014年8月，以武威市凉州区饲养西杂母牛为受体，移植安格斯肉牛胚胎。现将具体试验情况总结如下：

1 材料

1.1 牛胚胎的选择及引进

2013年3月，武威美加农畜牧科技有限公司从美国S.T公司引进。

1.2 受体牛的选择

选自凉州区雨霖养殖场及凉州区部分养牛户饲养的健康、无生殖道疾病、发情正常，育成母牛16月龄以上，成母牛产犊后2～3个月以上，且营养中等的西杂牛作为受体牛。

1.3 药物及器械

1.3.1 药物 PG2a(苏州市苏牧动物药业有限公司，生产日期：2012.11.23)、1%的盐酸利多卡因、胚胎解冻液。

1.3.2 器械 体视显微镜等胚胎解冻设备、胚胎移植枪、套管等移植操作器械。

2 方法

2.1 试验方法

2.1.1 受体牛的选定 选择的受体牛采取直肠检查的方法复选，对子宫有炎症、形态异常、卵巢囊肿、持久黄体和有流产史的予以淘汰，最后选定移植户和受体牛。根据基础母牛各自的不同情况，由分片配种员到农户家中进行防疫、驱虫，饲养指导，农户观察到牛有发情征兆，及时电话通知配种员，配种员通知胚胎供应站。在发情后第七天最后确定使用冷冻胚胎移植的受体牛，并对受体牛进行耳标标记，登记备案。

2.1.2 子宫、卵巢的检查及黄体等级的判定 用直肠检查法依次检查子宫颈、左右两侧子宫角、卵巢的发育情况，对符合条件的受体牛同时要检查卵巢的黄体，根据黄体大小、发育成度、质地软硬、卵巢基础和有无排卵点分为A、B、C三级。A级为正常，卵巢基础好黄体直径在1.5 cm以上，质地软硬适中，触摸感觉如猪肝，与卵巢衔接好，有排卵点；B级为黄体直径在1～1.5 cm之间，质地稍软或稍硬，与卵巢连接痕迹隐性黄体与排卵点不明显，卵巢基础薄弱；C级为黄体过小，与卵巢连接痕迹明显，有小卵泡或卵巢基础过差。C级不能作为黄体移植，视为废弃，A、B级分别进行胚胎移植。

2.2 胚胎移植

2.2.1 确定移植的准确时间 以发情盛期当天为0天，第7天实施胚胎移植，如受体牛出现流血情况，则流血发生的当天为0天，再加5天实施移植。移植前先作好受体牛消毒和保定工作，在1～2尾椎间硬膜外注射2%利多卡因5ml/头，使受体母牛尾根麻痹，失去对直肠把握造成的不适反应,以便移植操作。

2.2.2 胚胎解冻 解冻过程按照胚胎使用说明书要求在移植点无菌操作室内进行。室内气温恒定26℃进行胚胎解冻。从液氮罐中取出颗粒冻胚后直接投入解冻液，时间在35 s内，然后将胚胎取出放入基础液中5 min，再将胚胎取出放入漂洗液5 min；最后将胚胎放入移植液5 min后装管，2 h内完成移植。

2.2.3 胚胎的检查 发育正常的胚胎其透明带基本呈圆形，卵裂球均匀而紧凑，无渗出细胞；卵裂球分散或变性后一般不能用于移植。经检查采用A、B级合格胚胎用于移植。

2.2.4 移植 剪去细管封口端，装入移植枪(法国卡苏式)，移植枪套上无菌软外套，将进口端软外套撕裂一小口，移植枪有专人拿着或移植人员用口衔注，此时用0.1%K2MnO4溶液冲洗绑定受体母牛外阴部，再用75%酒精棉消毒外阴部，用卫生纸擦净，双手裂开外阴唇，将移植枪插入阴道，到达子宫颈时，用手撕掉无菌软外套，通过直肠把握法将胚胎植入有黄体一侧的子宫角的小弯处(上1/3～1/2处)，在5 min内完成移植操作。移植时要做到轻、稳、快，防止用力不当损伤子宫造成感染，尤其在穿过子宫颈时必须顺着子宫颈螺旋方向前进。

2.3 妊娠检查及妊娠母牛的饲养管理

胚胎移植后14 d内，要保持受体牛只的安静，不能驱赶和剧烈运动，以免影响胚胎着床。认真做好胚胎移植记录，在70 d用直检法进行妊检，经直检确诊妊娠的受体母牛，告知养殖户加强饲养管理，供给充足的饲料以保证满足胎儿和母牛的营养需要。防止顶撞、滑到等预防流产，保持舍内和牛体的清洁卫生。

3 结果

3.1 从表1和表2看出安格斯双胚移植10头，其中：自然发情8头、同期发情2头，A级黄体3头、B级黄体7头；进行输精后7天移植安格斯单胚胎6头；自然发情4头、同期发情4头，A级黄体1头、B级黄体5头。移植后双胚移植返情6头、移植加输精返情5头，3个月后对未返情牛只孕检，结果受孕4头，其中：移植加输精受孕1头，4个月后双胚移植和移植加输精受孕各有1头牛都流产。移植后4个月受孕结果双胚3头、移植加输精0头。受体牛分娩后2头双胚牛产犊结果都为单胎。

3.2 从表3看出安格斯单胚胎移植受孕率为16.8%，激素处理受孕率为10%。受体牛激素处理后受孕率为10%，比整体受孕率低。

4 小结

4.1 从以上试验数据分析，试验中受孕3月龄时双胎移植受孕率为40%，但最后2头牛产犊为单胎，可能与移植时技术操作、使用体外胚胎、怀孕牛只饲养管理有关，自然状态下(不使用激素、胚胎)肉牛多胎率平均为2%[1]，如果使用体内胚胎，加强妊娠牛的饲养管理，可能会提高产双犊几率，在以后生产中可以推广和应用[2]。移植加输精4月龄时未受孕1头，说明输精后牛各项激素和生殖受孕环境发生变化不适合于胚胎移植，在生产中利用不大。

4.2 国内牛体外胚胎的受孕率平均为30%，本试验受孕率平均为16.8%，比国内平均值低13.2个百分点。可能与本次试验选择受体黄牛为农户分散饲养，发情时间由养殖户告知，移植人员对移植时间的推断存在误差有关。有关报道在牛只发情后7.5～8 d[3]，受孕率最高。还有此次移植人员都为牛人工授精人员，虽然每人都有万头以上的人工授精经验，也都经过专家的培训，但对黄体发育的直肠感官准确判断，缺乏实践积累。

4.3 受体牛在移植前注射黄体酮可加快排卵时间、治疗卵泡囊肿和孕酮水平减低所引起的流产，促黄体素可促进黄体形成和并发孕酮。但试验中胚胎移植同步注射黄体酮和促黄体素a3后，受孕率无明显提高，这和闫继生等报道的注射外源激素对体外授精冷冻胚胎移植妊娠率没有显著影响一致[4]，因此胚胎移植同步注射黄体酮和促黄体素a3在提高牛体外胚胎妊娠率的利用中作用不大。因此提高牛胚胎妊娠率与受体牛选择、胚胎的质量、移植人员操作水平有密切关系。

[1] 万吉生,罗光彬,姜午旗等.安格斯胚胎移植试验研究[J].现代畜牧兽医,2007,36(04):11-12.

[2] 陈宏,袁志发,雷雪芹,等.牛双胚研究与应用[J].中国黄牛杂志．2001,27(06):33-37.

[3] 韩志强.张洪涛,李志强,等.牛胚胎日龄与胚胎移植时间对妊娠率的影响[J].中国奶牛,2009,(11):35-36．

[4] 闫继生,全明,张锁链,等.牛体外授精冷冻胚胎移植妊娠率影响因素的研究[J].畜牧与饲料科学,2004,(05):29-31.

The Eperiment Report of Angus Beef Cows Embryo Transplantation

WANG Jian-jun1,WANG Yu-long1

(1.WuweiAcademyofLivestockandVeterinaryScience,Wuwei733000,Gansu)

【Objective】To explore the application prospect of Angus beef cows embryo transplantation in Wuwei city, and guide the high-grade beef bovine breeding. 【Methods】We used Simmental hybrid cow as receptor, designed four different experiment group, choose ten beef cows for transplanting double embryo; choose 6 beef cow for transplanting single embryo after six days semen injection; choose 389 beef cow for transplanting single embryo; choose 10 beef cow for injecting progesterone and luteinizing hormone a3 before single embryo transplantation . 【Results】Double embryo transplantation conceived 2 beef cows, but both gave birth to one calf; single embryo transplantation after six days semen injection conceived 0 beef cows; conception rate of only single embryo transplantation is 16.8%, conception rate of hormone injections before single embryo transplantation is 10%.【Conclusions】Using double embryos transplantation may increases the chances of giving birth to two calves if strengthen the breeding and management of pregnant cows, then it can be applied in the future beef cow production; the beef cows pregnant environment and various hormones changed after semen injection, it will not be suitable for embryo transfer and useless in beef cow production; injecting progesterone and luteinizing hormone a3 before embryo transfer is also useless in improving embryo pregnant rate of beef cow.

Angus beef cows; embryo transplantation

2014-12-26 修改日期:2015-01-18

王建军(1979-)，男，甘肃天水人，兽医师，本科，工作单位：武威市畜牧兽医科学研究院，研究方向：畜牧技术研究与开发。

S8-1

A

1001-9111(2015)02-0038-03

基金类型：中央现代农业肉牛发展资金肉牛产业建设项目