鹅细小病毒和番鸭细小病毒鉴别诊断方法

杨旭东 王刚

（黑龙江省兽医科学研究所161006）

鹅细小病毒和番鸭细小病毒鉴别诊断方法

杨旭东 王刚

（黑龙江省兽医科学研究所161006）

鹅细小病毒 （GPV）和番鸭细小病毒 （MDPV）分别是引起小鹅瘟和番鸭细小病毒病的病原，20世纪90年代初才认识到番鸭细小病毒病是不同于小鹅瘟的独立疾病。这两种病严重危害水禽饲养业的传染病，临床上常在同一地区流行，甚至混合感染。虽然二者在大小理化特性等方面很相似，但疫苗交叉保护差，致病性明显不同。番鸭细小病毒仅见番鸭发病；而小鹅瘟病毒既可感染鹅也可感染番鸭，近年来番鸭小鹅瘟的流行也逐渐增强。在临床上用和常规的血清学方法很难将这两种病毒区分，本文简要介绍目前的一些主要鉴别诊断方法。

鹅细小病毒；番鸭细小病毒；鉴别诊断；方法

鹅细小病毒引起的小鹅瘟是一种传播快、死亡率高、高度接触性、急性或亚急性、败血性传染病主要侵害1～20日龄雏鹅和雏番鸭。以肠道栓塞为其特征性病变是严重危害养鹅业发展的重要传染病之一。番鸭细小病毒引起的番鸭细小病毒病临床上主要发生于1～3周龄雏番鸭以腹泻软脚喘气为特征。在细小病毒成员中，二者同源性最高，在理化特性、流行病学、临床症状、病理变化也非常相似，两者的血清也有一定的交叉保护性，临床上这2种细小病毒病常在同一地区流行，用常规的血清学检测方法很难区分，鉴别诊断难度较大。

1 动物感染试验

可采用易感雏鹅和易感雏番鸭作感染试验。对5日龄左右的易感雏鹅和5日龄左右的易感雏番鸭分别攻毒。若雏鹅和雏番鸭均发病死亡，并且有小鹅瘟特征性病变，是小鹅瘟病毒感染；若只引起雏番鸭发病死亡，则感染了番鸭细小病毒。还可用鹅或番鸭的胚胎以及组织细胞培养物进行病毒分离，通过电镜直接观察或者通过抗血清中和试验来确定感染细胞内是否有该种病毒。还建立了过氧化物酶技术、反向间接血凝试验及琼脂扩散试验等，能够对分离病原进行鉴定。

2 血清学试验

血清学诊断技术有很多，比如酶联免疫吸附试验、琼脂扩散试验、胶乳凝集试验 （LPA）和胶乳凝集抑制试验 （LAPI）等。其中琼脂扩散实验应用较多，该方法可以对鹅细小病毒和番鸭细小病毒进行交叉反应，缺点是特异性不强。相比较而言LPA和LAPI特异性强，而且操作方便和判断直观。交叉中和试验可以鉴别GPV和MDPV抗体。王永坤等采用交叉免疫转印试验发现，MDPV的多抗与MDPV、GPV都出现了两条反应带VP2、VP3；GPV多抗和MDPV只有1条反应带VP3；与 GPV出现 3条反应带VP1、VP2、VP3；MDPV单抗仅识别MDPV和GPV的VP3，GPV单抗在识别GPV VP3和VP2的同时，还识别MDPV的VP3。说明MDPV和GPV的共同抗原主要在占整个衣壳蛋白比例大的VP3上，两者的VP1和VP2存在差异。张云等用GPV Ep22株VP3蛋白旳原核表达产物作包被抗原建立ELISA方法，可特异性检测出GPV和MDPV，特异性和灵敏度分别为91.8%、96.7%和90.2%、95.2%。

2.1 PCR—RFLP技术

万春和等根据GenBank登录的鹅细小病毒和番鸭细小病毒非结构蛋白（NS）基因特征，研究设计1对特异性引物对GPV和MDPV基因组DNA进行PCR扩增。用EcoR I酶对GPV和MDPV特异性胶回收产物进行酶切，建立了一种快速区别GPV和MDPV感染的PCR-RFLP（聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性）检测方法。

2.2 PCR技术

刘家森等、季艳菊等根据GPV和MDPV基因组的非同源序列，分别设计了针对GPV和MDPV的引物但所设计引物仅能扩增特定病毒的核酸片段，对其他病毒核酸没有扩增。鲜思美等分别设计合成针对GPV非结构蛋白（NS）和MDPV NS2-VP1基因片段的2对引物GPVU/L和MDPVU/L，将GPV和MDPV提取核酸混合后作为模板，建立的双重PCR可用于GPV和MDPV的鉴别诊断和联合检测。范文胜等根据GenBank登录的番鸭细小病毒（MDPV）和鹅细小病毒 （GPV）基因组的同源序列区域结构基因REP以及非同源序列区域结构基因VP3，设计了2对引物，建立了一种鉴别诊断MDPV和GPV的二重PCR方法。

2.3 基因芯片检测技术

鲜思美建立的DPV-GPV-GPMV基因芯片检测技术，特异性强，能检测出相应的病原，对芯片上的其它病原无交叉杂交；敏感性可达7.886ng/L，高于琼脂糖凝胶电泳；对实验临床样本的检出率高；可应用于鸭瘟病毒、鹅细小病毒、番鸭细小病毒和鹅副粘病毒的鉴定及其混合感染病例的检测。