急性脑缺血大鼠外周血T淋巴细胞亚群变化及其与脑梗死体积的相关性

朱洁 王辛 马茜 王爱红

急性脑缺血大鼠外周血T淋巴细胞亚群变化及其与脑梗死体积的相关性

朱洁 王辛 马茜 王爱红

脑缺血；T淋巴细胞亚群；脑梗死体积；外周免疫抑制

脑组织长期缺血缺氧会导致脑组织损伤。脑卒中不仅影响中枢神经系统，亦会对外周免疫系统产生影响。脑卒中诱导的外周免疫抑制综合征(stroke-induced immunodeficiency syndrome，SIDS)主要表现为外周血T淋巴细胞免疫功能下降[1]。脑缺血后外周血T淋巴细胞亚群水平与脑组织损伤程度是否具有相关性目前研究尚少。本研究拟测定脑缺血大鼠脑梗死面积百分比、神经功能评分、外周血T淋巴细胞亚群水平，并对其相关性进行初步探讨。

1 材料和方法

1.1 材料 雄性SD大鼠23只，体质量280～320 g，由南京中医药大学实验动物中心提供〔合格证编号：SCXK(浙)2008-0033〕，自由饮水和进食。 2，3，5-三苯基氯化四氮唑(2, 3,5-triphenyltetrazolium chloride，TTC；美国Sigma公司)；Anti-rat CD3(APC；美国eBioscience)，Anti-rat CD4/CD8(FITC/PE；美国Biolegend)；流式细胞仪(FC500MPL，美国Beckman)。

1.2 方法 大鼠随机分为假手术组和模型组，每组10只。模型组参照Longa等[2]线栓法制作右侧大脑中动脉阻塞模型，假手术组只分离血管，不插线栓，其余步骤同模型组。模型组术后清醒时评分为0分和4分的大鼠为造模不成功，予以剔除，剔除后用相同方法造模补足，确保造模成功大鼠10只入组。分别于术后清醒时、术后24 h、72 h采用Bederson等[3]的5级4分法评定大鼠神经功能缺损情况；分别于术后24 h、72 h， 经大鼠眼眶采血，采用流式细胞仪检测外周血T淋巴细胞亚群CD3+、CD4+、CD8+水平变化情况；于术后72 h，将大鼠断头取脑，采用TTC染色观察脑梗死灶大小，并用脑梗死面积百分比表示，脑梗死面积百分比=(梗死面积/对侧半脑面积)×100%。对模型组脑梗死面积百分比与T淋巴细胞亚群的相关性，神经功能评分与脑梗死面积百分比以及神经功能评分与T淋巴细胞亚群的相关性进行分析。

1.3 统计学处理 采用SPSS 16.0软件进行分析。脑梗死面积百分比、外周血CD3+、CD4+、CD8+水平及CD4+/CD8+比值采用均数±标准差表示，组间比较采用两组独立样本t检验；神经功能评分以中位数(上、下四分位数)表示，组间比较采用Mann-WhitneyU检验。神经功能评分与T淋巴细胞亚群的相关性及神经功能评分与脑梗死面积百分比的相关性分析采用Spearman相关分析；脑梗死面积百分比与T淋巴细胞亚群的相关性分析采用Pearson相关分析。以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 脑梗死面积百分比、神经功能评分及外周血T淋巴细胞亚群变化 假手术组无梗死灶和神经功能缺损表现。模型组术后出现了梗死灶和神经功能缺损表现，术后72 h，模型组脑梗死面积百分比为(18.19±8.10)%；模型组神经功能评分术后24 h为2(2，2)，术后72 h为2(1，2)。

术后24 h模型组外周血CD4+水平和CD4+/CD8+比值较假手术组明显下降(分别P<0.05，P<0.01)；CD3+水平减低，CD8+水平升高，但差异无统计学意义(均P>0.05)；术后72 h模型组外周血CD3+、CD4+水平和CD4+/CD8+比值较假手术组明显下降，CD8+水平明显上升(均P<0.01)(表1)。

2.2 模型组外周血T淋巴细胞亚群、神经功能评分及脑梗死面积百分比的相关性 术后72 h，神经功能评分与CD8+水平呈明显正相关(r=0.646，P=0.044)，与CD3+、CD4+水平及CD4+/CD8+比值无明显相关性(r=0.114，P=0.754；r=-0.610，P=0.061；r=-0.553，P=0.112)；神经功能评分与脑梗死面积百分比呈明显正相关(r=0.646，P=0.044)； 脑梗死面积百分比与CD8+水平呈明显正相关(r=0.934，P=0.000)，与CD4+水平及CD4+/CD8+比值呈明显负相关(分别r=-0.974、r=-0.959，均P=0.000)，与CD3+水平无明显相关性(r=0.216，P=0.549)。

3 讨论

既往研究显示，SIDS可能是机体保护中枢神经系统的策略[4]，但SIDS却增加了感染的发生率，而感染是导致脑卒中患者死亡的主要并发症[5]。SIDS主要表现为外周血T淋巴细胞免疫功能下降[1]。CD4+和CD8+T细胞是T淋巴细胞中功能相异的两个亚群，CD4+T细胞具有诱导和辅助细胞免疫和体液免疫的作用；CD8+T细胞则抑制细胞免疫和体液免疫。CD4+/CD8+比值能初步评估机体免疫状态，比值降低提示免疫功能受损，是机体病变程度和预后不良的重要标志之一。本研究显示脑缺血后24 h、72 h外周血CD3+、CD4+水平及CD4+/CD8+比值下降，CD8+水平上升，这与既往研究一致[1]，提示脑缺血后T细胞免疫功能下降，外周免疫抑制明显。

目前，脑缺血后脑损伤程度与外周血T淋巴细胞亚群的关系尚不明确，本研究旨在通过分析脑缺血大鼠神经功能评分、脑梗死面积百分比与外周血CD3+、CD4+、CD8+水平、CD4+/CD8+比值的相关性来探索脑缺血后脑损伤程度与外周血T淋巴细胞亚群的关系。结果显示，模型组大鼠神经功能评分与CD8+水平及脑梗死面积百分比均呈正相关，脑梗死面积百分比与CD8+水平呈正相关，与CD4+水平及CD4+/CD8+比值呈负相关；这与Hug 等[6]的研究一致。这提示外周血T淋巴细胞亚群、神经功能缺损程度及脑梗死灶大小之间存在一定相关性，可能为临床协助评估缺血性脑卒中病情、预测患者预后提供一定帮助。

[1]Gu LJ, Xiong XX, Wei D, et al. T cells contribute to stroke-induced lymphopenia in rats[J]. PLoS One, 2013, 8(3): e59602.

[2]Longa EZ, Weinstein PR, Carlson S, et al. Reversible middle cerebral artery occlusionwithout craniotomy in rats[J].Stroke,1989,20(1):84-91.

[3]Bederson JB, Pitts LH, Tsuji M, et al. Rat middle cerebral artery occlusion: evaluation of the model and development of a neurologic examination[J].Stroke, 1986, 17(3):472-476.

[4]张雷,陆正齐.脑梗死的免疫学研究进展[J].中国神经免疫学和神经病学杂志，2013，20(5)：356-359.

[5]Joseph K, Ruth MP,Dorit K, et al. Impact of stroke-associated infection on long-termsurvival: a cohort study[J]. J Neurol Neurosurg Psychiatry，2013， 84:297-304.

[6]Hug A, Dalpke A, Wieczorek N, et al. Infarct volume is a major determiner of post-stroke susceptibility to infection[J]. Stroke, 2009, 40(10): 3226-3232.

(本文编辑：邹晨双)

10.3969/j.issn.1006-2963.2015.04.017

江苏省青蓝工程项目、江苏省优势学科项目资助项目(YSHL0201-26)

210023南京中医药大学护理学院

王爱红，Email：wah710630@163.com

R743.33

D

1006-2963 (2015)04-0296-02

2014-10-10)