高效液相色谱-荧光联合测定舒肝快胃丸中紫丁香苷的含量

赵 瑞

安徽省六安市中医院药剂科袁安徽六安237000

高效液相色谱-荧光联合测定舒肝快胃丸中紫丁香苷的含量

赵 瑞

安徽省六安市中医院药剂科袁安徽六安237000

目的探讨高效液相色谱-荧光联合测定舒肝快胃丸中紫丁香苷的含量方法的可行性。方法采用高效液相色谱-荧光联合测定舒肝快胃丸中紫丁香苷的含量袁Agilent1200高效液相色谱仪Bond Elut C18柱(5滋m袁4.6mm伊150 mm)袁流动相院甲醇-水-冰醋酸(82颐18颐0.1)曰流速院1.0 mL/min曰荧光检测波长院294 nm。结果线性关系考察中袁以进样量为横坐标(X袁g)袁峰面积为纵坐标(Y)袁进行线性回归袁得回归方程院Y=3800X原0.7300(r=0.9998)。紫丁香苷在0.026耀0.750 g范围内与峰面积呈良好的线性关系。对3批药材样品中紫丁香苷的含量进行测定袁结果紫丁香苷的平均含量为1.113 mg/g袁RSD为0.53%。结论本研究建立的高效液相色谱-荧光联合检测法灵敏度高袁能快速尧准确地测定舒肝快胃丸中紫丁香苷浓度袁方法可行。

高效液相色谱-荧光；舒肝快胃丸；紫丁香苷；含量测定

中医学认为袁人是一个整体袁脏腑之间互为影响。肝若过热袁会影响胃液的分泌袁即肝气犯胃。以五行学说解释袁肝属木袁脾属土袁而木克土袁因此肝火过盛会令胃部同样过热不适。肝气犯胃忧思恼怒尧饮食不节暴饮暴食尧脾胃虚弱病后脾胃受损等均可导致胃痛的发生。上述病因袁既可单独致病袁又往往相互影响袁而出现寒热互见尧虚实错杂尧阴阳并损之证候袁临证时必须灵活掌握。可见胃痛的关键是野气冶袁所谓不通则痛。因此治疗胃痛的关键是理顺胃气。舒肝快胃丸由厚朴(姜制)尧陈皮尧青皮尧丁香尧香附(醋制)尧枳实尧川芎尧延胡索尧姜黄尧牡丹皮尧白芍尧砂仁尧当归尧吴茱萸等20味中药制成的丸剂袁气香袁味辛尧微苦[1-5]。具有舒肝理气尧化滞消胀的效果袁主要治疗肝胃不和所致的两肋胀痛袁胃脘刺痛袁恶心嘈杂呕吐酸水[6-10]。目前叶中国药典曳2010年版一部已给出了部分君药及臣药如厚朴中有效成分的要求袁但关于丁香中主要成分紫丁香苷的测定报道较少。为进一步控制药品质量袁保证患者的用药安全及效果袁笔者参照国内较多文献拟建立一种灵敏尧准确尧操作便捷的检测方法袁作为紫丁香苷质量控制的方法。

1 仪器与试药

1.1 仪器

Agilent1200高效液相色谱仪(自动进样系统)尧美国Supelco公司固相萃取仪(USA SUPELCO SPE)袁紫外检测器袁安捷伦Bond ElutC18固相萃取小柱(100mg袁1 mL)袁YOKO-XR薄层加热器袁CAMAG双波长紫外观察箱袁Camag Nanomat4点样仪袁HX-02B薄层显色用的加热板袁真空干燥箱袁旋转蒸发仪袁KQ5200DA超声仪袁水浴锅袁Sartorius BT125D电子天平。

1.2 材料

紫丁香苷对照品(中国药品生物制品检定所袁批号院11574-201501袁供含量测定用)曰甲醇(色谱纯)曰水为超纯水曰其余试剂均为分析纯曰舒肝快胃丸(陕西辰济药业有限公司袁国药准字Z20155396袁规格院200丸/瓶袁批号院2015010101尧2015010102尧2015010103)。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱院Bond Elut C18柱(5滋m袁4.6 mm伊150 mm袁Sigmar公司)曰流动相院甲醇-水-冰醋酸(82颐18颐0.1)曰流速院1.0 mL/min曰荧光检测波长院294 nm。理论塔板数以紫丁香苷计算应不低于3000。

2.2 对照品储备液的配制

精密称取紫丁香苷对照品5.00 mg袁用流动相定容于50 mL量瓶中袁使成100滋g/mL的对照品储备液袁置于原4益冰箱保存。

2.3 供试品储备液的配制

取本品适量袁研细袁精密称取1.014 g袁置20 m L量瓶中袁加入甲醇超声处理10 min(功率100W袁频率50 kHz)袁放冷袁加甲醇至刻度袁摇匀袁用微孔滤膜(0.5滋m)滤过袁取续滤液即为供试品溶液。

2.4 阴性样品溶液的制备

按处方制备缺丁香的样品袁研细袁精密称取1.014 g袁置20mL量瓶中袁加入甲醇超声处理10min(功率100W袁频率50 kHz)袁放冷袁加甲醇至刻度袁摇匀袁用微孔滤膜(0.5滋m)滤过袁取续滤液制备成阴性样品溶液。

2.5 系统适用性试验

取对照品尧供试品和阴性样品溶液袁按野2.1冶项下色谱条件测定袁结果阴性样品在紫丁香苷对照品出峰处未出现色谱峰袁表明阴性样品对紫丁香苷的测定无干扰。具体色谱图见图1。

2.6 线性关系考察

精密量取对照品溶液0.2尧0.4尧0.8尧1.0尧1.2尧2.0mL袁分别置于10mL量瓶中袁加10mL/L盐酸甲醇稀释至刻度袁摇匀袁即得系列对照品溶液。在上述色谱条件下分别吸取10滋L进样测定袁以进样量为横坐标(X袁g)袁峰面积为纵坐标(Y)袁进行线性回归袁得回归方程院Y= 3800X原0.7300(r=0.9998)。结果提示袁紫丁香苷在0.026耀0.750 g范围内与峰面积呈良好的线性关系。2.7精密度试验

取对照品溶液(浓度为0.090 mg/10 m L)袁连续进样5次袁10滋L/次袁测定紫丁香苷的峰面积袁结果见表1袁提示该方法有较高的精密度。

图1 供试品、对照品及阴性样品溶液色谱图

表1 精密度试验结果

2.8 重复性试验

取样品5份(批号院2015010101)袁研细袁精密称取1.014 g袁置20mL量瓶中袁加入甲醇超声(功率100W袁频率50 kHz)处理10 min袁放冷袁加甲醇至刻度袁摇匀袁用微孔滤膜(0.5滋m)滤过袁测定其含量袁结果见表2袁提示该方法重复性较强。

2.9 稳定性试验

取样品6份(批号院2015010101)0.2尧0.4尧0.8尧1.0尧1.2尧2.0 mL袁分别置于20 mL量瓶中袁加入甲醇超声(功率100W袁频率50 kHz)处理10 min袁加甲醇至刻度袁摇匀袁用微孔滤膜(0.5滋m)滤过袁每个浓度共做2份袁1份室温放置袁1份于原20益下保存备用。取室温浓度质控样品分别于制备后0尧2尧4尧6尧8 h后进行样品分析袁计算血药浓度及RSD值袁结果显示袁紫丁香苷RSD分别为2.03%尧2.11%尧1.24%袁提示样品溶液室温放置8 h稳定性良好曰取原20益下保存液样品袁解冻后再冷却袁进行数据分析袁测定5 d内血液样品的浓度及RSD值袁结果显示袁紫丁香苷RSD分别为2.23%尧2.20%尧2.67%袁提示样品溶液在原20益下放置5 d内基本稳定。

表2 重复性试验结果

2.10 加样回收试验

精密称取样品0.5 g袁共9份袁置25mL容量瓶中袁分别精密吸取1 mL浓度为0.5mg/mL的紫丁香苷对照品溶液袁转移至25mL量瓶中袁测定紫丁香苷袁计算加样回收率。分别精密加入新鲜配制的0.5005 mg/mL紫丁香苷对照品溶液1.5尧1.5尧1.5尧2.0尧2.0尧2.0尧2.5尧2.5尧2.5 mL袁加入甲醇适量袁超声(功率400 W袁频率50 kHz)处理30 min袁放冷袁加甲醇稀释至刻度袁摇匀袁按野2.1冶项下的色谱条件进行含量测定并计算回收率袁结果见表3。

表3 加样回收试验结果

2.11 样品含量测定

对3批药材样品(批号院2015010101尧2015010102尧2015010103)进行紫丁香苷含量测定袁结果见表4。

表4 样品含量测定

3 讨论

凡由于脾胃受损尧气血不调所引起胃痛难耐胃脘部疼痛的病证袁均可称之为胃脘痛。叶素问窑六元正纪大论曳曰院野民病胃脘当心而痛。冶叶医学正传曳说院野古方九种心痛噎噎详其所由袁皆在胃脘袁而实不在于心冶。导致胃痛原因常见的有寒邪客胃尧肝气犯胃尧饮食伤胃尧脾胃虚弱等。若寒邪客于胃中袁寒凝不散袁阻滞气机袁可致胃气不和而疼痛曰肝对脾胃有疏泄作用袁恼怒抑郁袁气郁伤肝袁肝失条达袁横逆犯胃袁均可引发胃痛的发生袁若劳倦内伤袁久病脾胃虚弱袁或禀赋不足袁中阳亏虚袁胃失温养袁内寒滋生袁中焦虚寒而痛曰当过食肥甘袁食滞不化袁气机受阻或饥饱无度袁饮食不节袁胃失和降可导致胃痛曰另气郁日久袁气滞血瘀袁瘀血内结袁中焦气机受阻袁而致胃痛发作。可见袁胃痛发生的病机有虚实两端之意袁实证为气机阻滞袁不通则痛曰虚证为胃腑失于温煦或濡养袁失养则痛。

临床上舒肝快胃丸药理作用主要有促进胃排空袁抑制胃酸分泌袁加快肠道运动袁缓解疼痛等袁其是由香附(醋制)尧丁香尧白芍尧佛手尧木香尧郁金尧白术(炒)尧陈皮尧柴胡尧广藿香尧炙甘草尧莱菔子尧槟榔(炒焦)尧乌药等研制而成的中药制剂袁辅料为蜂蜜。舒肝快胃丸可发挥各种中药之功效袁功能主治舒肝解郁尧和胃止痛。常用于两胁胀满袁食欲不振袁呃逆呕吐袁胃脘疼痛袁大便失调。其主要成分之一丁香中的紫丁香苷是一种强效抗肝毒药物袁其恢复微粒体酶系统的酶活性及抑制脂质过氧化作用可以促进肝毒物代谢并改善肝功能使之正常化袁并兼有止血功效。目前关于丁香中主要成分紫丁香苷的测定报道较少。为建立一种快速尧灵敏的紫丁香苷的测定方法袁本研究考察了诸多文献报道[11-18]袁选取C18柱固相萃取方法袁比较甲醇尧乙腈等多种溶剂对样品杂质的洗脱情况袁最终发现经一定比例的甲醇和缓冲液洗脱袁既能有效除去杂质[19-24]袁又能保证紫丁香苷的高回收率袁所得色谱图分离完全袁无测定干扰袁不仅操作简便袁而且重现性较好。

3.1 流动相的选择

本研究考察了不同浓度的甲醇-水-冰醋酸溶液袁发现有机相的种类尧浓度对舒肝快胃丸中紫丁香苷出峰时间的影响较大袁且冰醋酸可消除色谱峰拖尾现象[25-29]。最后选定甲醇-水-冰醋酸(82颐18颐0.1)为流动相袁紫丁香苷的峰形较好袁保留时间适宜袁与其他杂质峰达到基线分离袁效果较为理想。

3.2 提取方法的选择

采用超声提取法袁分别以不同提取时间(10尧20尧30 min)提取后袁进行测定袁结果显示袁超声处理10尧20尧30 min的提取结果差异不显著袁为保证提取效率袁故采用超声(功率100W袁频率50 kHz)处理10 min为提取方法袁分别以甲醇尧水尧10 m L/L盐酸甲醇作为提取溶媒袁超声提取10 min后进行比较。结果显示袁以水为溶媒的提取结果略高于其他溶媒袁但是用水作溶媒时袁由于极性增大袁杂峰较多袁紫丁香苷的峰形较差[30-32]曰而以甲醇作溶媒时基线较为平稳袁色谱峰对称[11-12,29,31-33]袁故选择甲醇超声提取10min。

综上所述袁本文建立的高效液相色谱-荧光联合检测法灵敏度高袁能快速尧准确地测定舒肝快胃丸中紫丁香苷浓度袁并通过阴性辅料干扰试验和一系列破坏性试验证明袁该方法的专属性强袁耐用性好袁且可控制舒肝快胃丸的质量。

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Content determ ination of lilacs glycosides in Shugan Kuaiwei Pills by high performance liquid chromatography com bined w ith fluorescence

ZHAO Rui
Department of Pharmacy,Traditional Chinese Hospital of Liu'an City,Anhui Province,Liu'an 237000,China

Objective To study the feasible of high performance liquid chromatography combined with fluorescence in the determination of lilacs glycosides in Shugan Kuaiwei Pills.M ethods Content of lilacs glycosides in Shugan Kuaiwei Pillswas determined by high performance liquid chromatography combined with fluorescence.Agilent 1200 high perfor鄄mance liquid chromatography Bond Elut C18column 5滋m,4.6 mm伊150 mm was usedmobile phasewasmethanol-wa鄄ter-acetic acid glacial(82颐18颐0.1);flow rate was 1.0 mL/min;fluorescence detection wavelength was 294 nm.Resu lts The study of linear relationship showed that based on sample quantity abscissa(X,g),the peak area of the vertical(Y), linear regression equation was Y=3800X原0.7300(r=0.9998),it prompted that lilacs glycosides within 0.026-0.750 g had good linear relationship with the peak area.Content of lilacs glycosides in 3 batches ofmedicinalmaterial samples were determined,average content of lilacs glycosideswas 1.113 mg/g,RSD was 0.53%.Conclusion This study estab鄄lished detectionmethod of high performance liquid chromatography combined with fluorescence has high sensitivity,it can quickly and accurately determined lilacs glycosides concentration in Shugan Kuaiwei Pills,themethod is feasible.

High performance liquid chromatography-fluorescence;Shugan Kuaiwei Pills;Lilacs glycosides;Content determination

R965

A[文献标识码]1673-7210（2015）06（c）-0110-04

院2015-03-25本文编辑院李亚聪)