血清VEGF、OPN 浓度与进展期胃癌术后复发关系的临床研究*

尹小平，黎蔚浩，朱栋良，王代宏，王 伟，王芳元

(咸宁市中心医院肝胆胰胃肠外科，湖北 咸宁 437100)

胃癌是我国最常见的消化道恶性肿瘤，临床所见多为进展期，手术后复发率高。尽管术后辅助化疗有了较大进展，但进展期胃癌术后2 年内复发率仍超过50%［1］，5 年生存率仅为30%～40%［2］。因此，进展期胃癌术后复发是临床面临的难题，如何尽早诊断复发一直是临床研究的热点。本研究主要通过动态监测进展期胃癌患者血清VEGF、OPN 浓度，来研究其作为进展期胃癌术后复发诊断的价值。

1 资料与方法

1.1 临床资料 收集2010 年3 月至2011 年3 月在我院就诊的进展期胃癌患者40例。其中男22例，女18例，年龄30～81 岁，平均56.3 岁。患者术前均胃镜活检确诊、术中行根治性手术(D2)、术后经病理分期。所有患者在术后2 周开始接受常规化疗。受检者均排除其他恶性肿瘤及严重心血管、骨骼系统疾病，术前均未接受过放化疗。术后复发患者均经胃镜、CT、磁共振或PET/CT 确定证实。

1.2 标本采集 术前3d、术后1 月及以后每3 月抽取5ml 清晨空腹静脉血，所取标本注入无抗凝管，离心(2000rpm，10min)，吸取血清100μl 体积分装，-80℃冷冻备用，同期检测CEA、CA199。

1.3 检测方法及试剂 VEGF 采用酶联免疫吸附测定(ELISA)方法检测，试剂盒由深圳晶美生物有限公司提供，最低敏感浓度为46.9pg/ml，变异系数小于5.0%。OPN 应用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测，鼠抗人OPN 单抗(100μl，1mg/ml，CHEMICON 公 司)，兔抗人OPN多抗(100μl，CHEMICON 公司)，OPN 标准品1mg(CHEMICON公司)，生物素化羊抗兔IgG(H+L)(1.5mg/100μl，北京中山生物技术有限公司)，亲和素-辣根过氧化酶复合物(Avidin HRP)(200μl，华美公司)。所有操作严格按照说明书检测。CEA、CA199 由本医院检验室常规检查。

1.4 标准 以健康体检组(本课题前期研究成果VEGF(69.8 ±18.1)pg/ml，OPN(20.3 ±6.2)ng/ml)，VEGF、OPNX ± 2s 作为上下警戒值，血清VEGF、OPN的上界水平分别为106.0pg/ml、32.7ng/ml。胃癌分期采用1988 年国际抗癌联盟的PTNM 分期，P 为术后病理证实，T 指肿瘤本身侵润程度，N 指区域淋巴结转移，M 指远处转移。

1.5 统计学方法 使用SPSS 13.0 软件分析所有数据。计数资料采用卡方检验或Fisher 确切检验法，计量资料用t 检验，两变量之间的关系采用Pearson 相关分析。P ＜0.05 表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 手术前后患者血清VEGF、OPN 水平比较术前患者血清VEGF、OPN 浓度分别为(172.3 ±45.4)pg/ml、(50.4 ±10.3)ng/ml，阳性率分别为67.5%、77.5%，术后1 月其浓度分别为(75.8 ±21.7)pg/ml、(24.8 ±9.9)ng/ml，阳性率分别为20%、17.5%，术后患者血清VEGF、OPN 浓度及阳性率明显下降，差异有统计学意义(P ＜0.05)。同时术前及术后VEGF、OPN 阳性率分别与CEA、A199 相比明显较高，其差异有统计学意义(P ＜0.05)。见表1。

表1 手术前后VEGF、OPN 对比()

表1 手术前后VEGF、OPN 对比()

与术前相比，* P ＜0.05

2.2 血清VEGF、OPN 水平与术后复发的关系9例术后复发患者与未复发患者术前及术后1 月血清VEGF、OPN 浓度、阳性率对比其差异有统计学意义(P ＜0.01);复发患者经其他辅助检查确诊复发时其血清VEGF、OPN 浓度及阳性率与术后1 月对比，其差异有统计学意义(P ＜0.01)。见表2。

表2 血清OPN、VEGF 水平与术后复发关系()

表2 血清OPN、VEGF 水平与术后复发关系()

与术后未复发患者比较，* P ＜0.01;与术后1 月比较，#P ＜0.01

2.3 复发患者血清OPN、VEGF 与CEA、CA199比较 复发患者术前、术后1 月及影像学确诊复发时，OPN、VEGF 阳性率分别单独与CEA、CA199对比，OPN、VEGF 阳性率高于CEA、CA199，其差异有统计学意义(P ＜0.05);OPN 与VEGF 联合检测阳性率亦高于CEA 与CA199 的联合，且差异有统计学意义(P ＜0.05)。见表3。

表3 复发患者血清OPN、VEGF 与CEA、CA199 比较［n=9，n(%)］

2.4 复发患者血清VEGF、OPN 升高时间与其他辅助检查确诊时间比较 复发患者血清VEGF、OPN升高表现阳性的平均时间分别为(155.4 ±47.4)d、(163.9±45.9)d，血清CEA、CA199 升高表现阳性的平均时间分别为(190.2 ±51.6)d、(200.0 ±58.4)d，经胃镜或影像学检查发现复发的平均时间为(228.2±61.3)d，三者相比VEGF、OPN 表现阳性的平均时间较短，其差异有统计学意义(P ＜0.05)。

3 讨论

研究表明，肿瘤转移及复发与肿瘤微血管形成密切相关，肿瘤细胞可生成多种促血管生成因子以诱导血管生成，其中作用最为突出的是血管内皮生长因子［3］。Maehara 等［4］报道VEGF 在胃癌中呈高表达，其血清浓度与肿瘤的复发和转移及预后密切相关。骨桥蛋白(OPN)是一种分泌型钙结合磷酸化糖蛋白，胃黏膜及粘液细胞中的粘蛋白颗粒和酶原颗粒可以分泌少量OPN，在机体中以游离状态和结合状态存在［5］。有研究提示OPN 促进细胞增殖、移行的能力，重塑细胞外基质，在降低细胞粘附中发挥重要作用，并与许多血管因子相互作用，从而促进肿瘤的侵袭、转移及复发［6］。

本研究发现胃癌患者根治性手术后其血清VEGF、OPN 浓度及阳性率明显下降，与术前相比差异有统计学意义(P ＜0.05)，而术后9例转移或复发患者血清VEGF、OPN 浓度及阳性率再次升高，与术后1 月对比差异有明显统计学意义(P ＜0.01)，说明胃癌患者血清VEGF、OPN 主要来源于肿瘤本身，这与国外研究相同［7，8］。本组数据40例患者中有9例术后1 年内发生转移或复发，经对比研究发现，术后复发患者其术前血清VEGF、OPN 浓度及阳性率明显高于术后未复发患者，其差异有统计学意义(P ＜0.01)，提示VEGF、OPN 在胃癌的转移复发中发挥着重要的作用。且患者血清VEGF、OPN 浓度升高表现阳性的时间明显早于胃镜、CT 等影像学检查，其差异有统计学意义(P ＜0.05)。目前消化道肿瘤最常用的标记物检测为CEA、CA199，其单独检测的敏感性为30.0%～38.9%，联合检测的阳性率为53.6%［9，10］。本研究发现VEGF、OPN 其单独及联合检测术前(本课题前期研究结果)及术后复发阳性率高于CEA、CA199 及两者的联合，其表现阳性的时间亦早于CEA、CA199，其差异均有统计学意义(P ＜0.05)。

综上所述，胃癌患者血清VEGF、OPN 主要由肿瘤组织分泌产生，其浓度的高低与患者预后直接相关，术后监测其血清浓度可以评估根治性手术的彻底性，也可更早预测和发现肿瘤的转移与复发。

［1］顾香，李明.胃肠道肿瘤再手术［J］.临床外科杂志，2004，24(7):392

［2］赵成功，赵久武，王仕琛.胃癌术后局部复发原因分析及对策［J］.中国实用外科志，2009，29(2):154

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［4］Maehara Y，Kabashima A，Koga T，et al.Vascular invasion and potential for tumor angiogenesis and metastasizing gastric carcinoma［J］.Surgery，2000，128(3):408

［5］Wai PY，Kuo PC.The Role of osteopontin in tumor metastasis［J］.J Surg Res，2004，121(2):228

［6］Rittling SR，Chambers AF.Role of osteopontin in tumour progression［J］.Br J Cancer，2004，90(10):1877

［7］Ohta M，Konno H，Tanaka T，et al.The significance ofcirculating vagcalar endothelial growth factor(VEGF)protein in gastric cancer［J］.Cancer Lett，2003，192(2):215

［8］Ue T，Yokozaki H，Kitadai Y，et al.Co-expression of osteopontin and CD44v9 in gastric cancer［J］.Int J Cancer，1998，79(2):127

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［10］吴和顺，李杨.进展期胃癌手术前后血清CEA、CA199水平变化临床价值的探讨［J］.中华综合临床医学，2004，6(2):10