平欧榛子油对高血脂大鼠的降脂作用

吕春茂， 陆长颖， 孟宪军， 董文轩， 魏雅静， 刘婵婵

（沈阳农业大学 食品学院，辽宁 沈阳 110161）

血脂是指血液中的脂类，主要由血清总胆固醇（total cholesterol，TC）、甘油三酯（triglyceride，TG）及非酯化脂肪酸等组成[1]。高血脂症是由于脂质代谢或运转异常导致血清（或血浆）中一种或多种脂质高于正常的病症，一般表现为高胆固醇血症、高甘油三酯症或两者兼有（混合型高血脂症）[2-3]。大量的流行病学、临床和实验研究皆证实，高血脂症是动脉粥样硬化的首要危险因素，与冠心病、脑血管病的发病率直接相关[4]。临床上常采用贝特类药和他汀类药预防和治疗高血脂症，效果良好，但难免有肌损害、肝损害、肾损害等副作用[5]。因此，在无副作用的前提下，使用生物源功能性提取物预防血脂代谢异常，防治高血脂症，乃至预防心脑血管疾病，具有重要的理论价值和现实意义[6]。

榛子营养丰富，含脂肪、蛋白质、碳水化合物的量都很可观[7]，其中油脂质量分数高达60.5%[8]。榛子油的脂肪酸组成是其他植物油脂无法比拟的，如单不饱和脂肪酸质量分数77.7%，多不饱和脂肪酸质量分数9.5%[9]，这些不饱和脂肪酸是人体不能自身合成的，它们一方面可以促进胆固醇的代谢，降低血液中低密度脂蛋白胆固醇和血总胆固醇，另一方面可以软化血管，维持毛细血管的健康，从而预防和治疗高血压、动脉硬化等心脑血管疾病[10-11]。榛子油是天然的功能性物质，无副作用。

有关榛子油的研究国内近年已有一些报道，但主要集中在榛子栽培[12]和功能性物质提取工艺上[13-14]，对其在降血脂功能上的研究目前尚少。本实验中通过高血脂症大鼠病理模型，综合观察榛子油对血清总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、葡萄糖（GLU）、高密度脂蛋白胆固醇 （HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）和丙二醛（MDA）的影响，对动脉粥样硬化指数、冠心指数的影响及对病理切片的观察，探讨榛子油降血脂作用，对天然功能物质降血脂和预防脂肪肝的功效进行探索，为对其进一步研究和开发提供依据。

1 材料与方法

1.1 实验动物

SD（sprague-dawley）大鼠，体质量 60～80 g，由辽宁长生生物技术有限公司提供，用普通饲料饲养一周适应环境，饲养地点为沈阳农业大学SPF级动物实验室（辽宁省科学技术厅颁发的实验动物使用许可证，许可证号：SYXK（辽）2011-0001），环境条件为温度20～26℃，相对湿度40%～70%，光照12～24 h，通风良好。

1.2 材料与试剂

平欧榛子，本溪县三阳大果榛子专业生产合作社提供，经去壳、烘干、粉碎后过20目筛备用；金龙鱼大豆油，益海嘉里有限公司（脂肪酸组成（质量分数）：棕榈酸7.2%，硬脂酸2.5%，花生酸2.3%，油酸24.2%，亚麻酸6.9%）产品；氯化钠注射液，辰欧药业股份有限公司产品；基础饲料，沈阳市于洪区前民动物试验饲料厂生产；高脂饲料[15]质量分数：78.8%基础饲料，1%胆固醇，10%蛋黄粉，10%猪油，0.2%牛胆酸钠；胆固醇、牛胆酸钠，北京鼎国昌盛生物技术有限公司产品；猪油、蛋黄粉，市售后自制；总胆固醇试剂盒，甘油三酯试剂盒，北京北化康泰临床试剂有限公司产品；低密度脂蛋白胆固醇测定试剂盒，高密度脂蛋白胆固醇测定试剂盒，长春汇力生物技术有限公司产品；血糖试剂盒，保定长城临床试剂有限公司产品；丙二醛（MDA）测试盒，南京建成生物工程研究所产品。

1.3 仪器设备

电子天平，北京赛多利斯仪器系统有限公司制造；TDL-5000B型离心机，上海安亭科学仪器厂制造；HH-6型数显恒温水浴锅，国华电器有限公司制造；DHG-9070A型电热恒温鼓风干燥箱，上海精宏实验设备有限公司制造；ST-06型300克多功能粉碎机，永康市帅通工具有限公司制造；KQ-300DE型数控超声波清洗器，昆山市超声仪器有限公司制造；XS-212光学显微镜，南京江南永新光学有限公司制造。

1.4 方法

1.4.1 榛子油的制备 称取过20目筛的榛子仁粉200 g，用正己烷超声波辅助提取平欧榛子油。提取工艺为：料液比1∶6.3（g/mL），超声波功率为70%（210 W），提取温度 47.5℃，提取时间 31.2 min，之后在室温条件下8 000 r/min离心20 min，取上清液旋转蒸发除去有机溶剂后收集备用[16]。

1.4.2 模型构建与处理 60只SD大鼠，分成两组，组间体质量无明显差异。空白对照组10只，给予普通饲料喂养，其余50只为模型组，给予高脂饲料喂养70 d，尾静脉采血1.0 mL，测定血清总胆固醇（TC）和血清甘油三酯（TG），根据血脂水平，确定高脂模型建立，随后对高脂模型随机分组，每组10只，进行灌胃处理，分别为高脂对照组（500 mg/（kg·d）生理盐水）、豆油试验组（500 mg/（kg·d））、榛子油低剂量组（50 mg/（kg·d））、榛子油中剂量组（500 mg/（kg·d））、榛子油高剂量组（1 000 mg/（kg·d）），另外空白对照组（500 mg/（kg·d）生理盐水），经统计学处理，组间无明显差异。分组当天开始灌胃，连续灌胃40 d。

1.4.3 指标测定 自灌胃之日计，20 d、40 d后尾静脉取血1.0 mL，3 000 r/min离心15 min取血清。末次灌胃后禁食12 h，腹腔注射3 mL/kg水合氯醛，腹主动脉取血，摆斜面凝血30 min，3 000 r/min离心15 min，分取血清。

总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、葡萄糖（GLU）的测定均采用氧化酶法，高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）的测定采用化学修饰酶法，丙二醛（MDA）的测定采用TBA法，动脉粥样硬化指数 AI1=（TC-HDL-C）/HDL-C，AI2=LDL-C/HDL-C，冠心指数R-CHR=TC/HDL-C。

1.4.4 肝脏病理切片的制作 取一小块肝脏放入多聚甲醛固定液中，然后修成4 mm3大小的小块，让肝脏小块与乙醇接触，然后滤干，再经过浸蜡、包埋、修蜡块、切片、脱蜡、苏木精-伊红（H.E）染色、脱水等步骤，最后放在载玻片上，再将洁净盖玻片倾斜放下，以免出现气泡，这样封片后即制成永久性玻片标本，供光学显微镜观察使用。

1.4.5 统计学处理 本试验所有数据由计算机经SPSS17.0统计软件包中的ANOVA法进行单因素方差分析处理，试验数据采用平均数±标准差（x¯±s）表示，组间比较采用t检验处理。p>0.05认为无显著性差异；p＜0.05认为有显著性差异，有统计学意义；p＜0.01有极显著差异。

2 结果与分析

2.1 对高脂血症大鼠血脂的影响

见表1。

表1 榛子油对大鼠血脂参数的影响Table 1 Effects of hazelnut oil on blood lipid parameters in rats

2.1.1 榛子油对总胆固醇的影响 由表1显示，高脂对照组的TC水平极显著高于空白对照组 （p＜0.01），表明大鼠高血脂症造模成功。豆油试验组、榛子油低剂量组、榛子油中剂量组、榛子油高剂量组都能显著地降低高脂模型血清中TC水平，分别降低了约13%、13%、16%和16%。豆油及榛子油的3种剂量实验组都对高脂模型有明显的降TC效果，但豆油组与榛子油不同剂量组之间差异不显著，说明榛子油与豆油等具有相似的降TC效果且与油脂的剂量关系不大。

2.1.2 榛子油对甘油三酯的影响 由表1可见，高脂对照组的TG水平极显著高于空白对照组 （p＜0.01），表明大鼠高血脂症造模成功。豆油试验组、榛子油低剂量组、中剂量组、高剂量组都能显著地降低高脂模型血清中TG水平，分别降低了约24%、24%、50%和47%。豆油及榛子油的3种剂量实验组都对高脂模型有明显的降TG效果，然而却存在剂量的选择性。其中低剂量和豆油组差异不显著，中剂量和高剂量组表现出差异极显著性，说明榛子油的中剂量和高剂量对降低TG呈现出更好的效果。

2.1.3 榛子油对高密度脂蛋白胆固醇的影响 由表1可见，高脂对照组的HDL-C水平极显著低于空白对照组（p＜0.01），表明大鼠高血脂症造模成功。豆油试验组、榛子油低剂量组、中剂量组、高剂量组都能极显著地提高高脂模型血清中HDL-C水平，分别提高了约28%、32%、41%和44%。豆油及榛子油的3种剂量实验组都对高脂模型有明显的升高HDL-C效果，然而却存在剂量的选择性。其中低剂量组和豆油组差异不显著，中剂量组和高剂量组表现出差异显著性，说明在提高高脂模型血清中HDL-C水平上榛子油的中剂量组和高剂量组表现出更好的效果。

2.1.4 榛子油对低密度脂蛋白胆固醇的影响 由表1可见，高脂对照组的LDL-C水平极显著高于空白对照组（p＜0.01），表明大鼠高血脂症造模成功。豆油试验组，榛子油低剂量组、中剂量组、高剂量组，都能降低高脂模型血清中LDL-C水平，分别降低了约1%、4%、6%和26%。豆油组及榛子油的3种剂量实验组都对高脂模型有降LDL-C效果，然而却存在剂量的选择性。榛子油高剂量组与低剂量组、中剂量组及豆油组存在明显差异，说明榛子油高剂量组表现出显著的降LDL-C效用。

2.1.5 榛子油对血糖的影响 由表1可见，高脂对照组的GLU水平极显著高于空白对照组（p＜0.01），表明大鼠高血脂症造模成功。豆油试验组，榛子油低剂量组、中剂量组、高剂量组，都能降低高脂模型血清中GLU水平，分别降低了约4%、10%、13%和24%。豆油组及榛子油的3种剂量实验组都对高脂模型有降GLU效果，然而却存在剂量的选择性。榛子油高剂量组、中剂量组、低剂量组、豆油组间存在明显差异，榛子油的降GLU效果与剂量呈现明显正相关。

2.1.6 榛子油对脂质过氧化代谢物丙二醛的影响由表1可见，高脂对照组的MDA水平极显著高于空白对照组（p＜0.01），表明大鼠高血脂症造模成功。豆油试验组，榛子油低剂量组、中剂量组、高剂量组都能降低高脂模型血清中MDA水平，分别降低了约20%、32%、37%和39%。豆油组及榛子油的3种剂量实验组都对高脂模型有降低脂质过氧化代谢物MDA含量的效果，然而却存在剂量的选择性。榛子油高剂量组、低剂量组、中剂量组、豆油组间存在明显差异，榛子油的降MDA效果与剂量呈现明显正相关。

2.2 榛子油对动脉粥样硬化指数AI1、AI2和冠心指数R-CHR的影响

根据大鼠血清中TC、HDL-C和LDL-C的浓度，作者对每组大鼠的动脉粥样硬化指数AI1=（TCHDL-C）/HDL-C、AI2=LDL-C/HDL-C 和冠心指数R-CHR=TC/HDL-C进行了计算。由表2可见，AI1、AI2与R-CHR均随着榛子油剂量的增大而显著降低，且呈剂量依赖性关系，揭示榛子油具有降低高脂大鼠AI1、AI2与R-CHR的效果。

表2 榛子油对大鼠血脂指数的影响Table 2 Effects of hazelnut oil on blood lipid index in rats

2.3 对大鼠肝脏病理变化的影响

各组大鼠处死后进行解剖检查发现，高脂对照组肝脏呈灰白色脂肪性变，肝脏边缘圆钝，为槟榔肝状，属于典型的脂肪肝；而榛子油组肝脏呈淡红色，脂肪肝程度较高脂对照组轻，虽然也有少许脂肪沉积的油状感，但其色泽改变不明显，说明榛子油对肝脏具有一定的保护作用[17]。

H.E染色光镜观察结果如图1所示，空白对照组大鼠肝脏中的肝细胞排列整齐，胞质均匀，细胞核清晰，位于细胞正中，肝中央静脉周围；肝小叶结构完整，肝索排列整齐，细胞未见淡染、胞质疏松、空胞样变、胞质溶解、核浓缩及核破裂等现象，形态正常。高脂模型组大鼠肝弥漫性脂肪变性，细胞内和细胞间隙有大量的脂滴空泡，这是由于脂肪在肝脏内沉积，经切片处理后在光镜下呈现空泡状，水肿，伴点片状坏死及炎细胞浸润现象，肝脏中的肝细胞排列混乱，细胞核被挤向一边，且体积增大，脂肪变性比较明显，胞浆内充满大小不等的脂肪滴，肝小叶结构的轮廓尚存，但模糊不清，肝细胞大多呈空胞样结构，胞质疏松淡染或消失[18]；高倍光学显微镜观察显示，胞核结构大多异常，可见核溶解，大鼠肝脏出现脂肪变性，显示大鼠高脂血症模型组造模成功。高剂量榛子油组，肝结构完整，较正常肝细胞增大，脂变肝细胞数目、空泡状，水肿，伴点片状坏死、炎细胞浸润及核溶解较高脂对照组明显减少。中剂量榛子油组肝细胞可见脂滴数、空泡状，水肿，伴点片状坏死、炎细胞浸润及核溶解现象较高脂对照组少。低剂量榛子油组、豆油组肝细胞可见脂滴数较高脂对照组少，空泡状，水肿，伴点片状坏死、炎细胞浸润及核溶解现象较高脂对照组减少不明显。说明榛子油给药组均可改善高脂大鼠肝细胞脂肪变性的现象，可降低高血脂症大鼠肝脏脂质沉积，预防脂肪肝的发生，且具有抗动脉粥样硬化的作用，并呈现一定的剂量—效应关系。

图1 不同实验组大鼠肝脏组织切片Fig.1 Slice of rat liver of different treatment during feeding period

3 结语

本实验中用平欧榛子油对高血脂模型大鼠进行研究，结果表明在用高脂饲料饲喂70 d后，血清中TC、TG的含量明显升高，因此高血脂大鼠模型诱导成功。在用大豆油和不同剂量的榛子油灌胃40 d后，豆油试验组、榛子油低剂量组（50 mg/（kg·d））、中剂量组（500 mg/（kg·d））、高剂量组（1 000 mg/（kg·d））均可使大鼠血清中 TC、TG、LDL-C、GLU、MDA，以及 AI1、AI2、R-CHR 降低，使 HDL-C 提高，与模型组相比有显著性差异，表明榛子油有明显的降低血脂的作用，同时可以有效地纠正高血脂症动物的脂质代谢紊乱，降低高血脂症大鼠肝脏脂质沉积，预防脂肪肝发生，对高脂饮食所致高血脂症具有良好的防治作用[19]。

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