普洱茶抗氧化制剂毒理学研究与安全性评价

吴婧，孙世利，徐平，王岳飞*

（1.浙江大学茶学系，浙江杭州 310058；2.广东省饮用植物研究所，广东省茶树资源创新利用重点实验室，广东广州 510640）

普洱茶原产于我国云南西双版纳，采用云南大叶种制成的晒青毛茶为原料，经渥堆后发酵和陈化工艺加工而成，是我国最具特色的茶产品之一。独特的加工工艺促成了普洱茶特有的风味和出色的生物活性。研究表明，普洱茶具有抗氧化、降血脂、预防糖尿病肾病等功能[1-4]，对人体健康具有很好的促进作用。

茶叶深加工尤其是终端健康产品的开发对于更好的发挥茶叶的健康功能至关重要，同时也是进一步提升茶产业效益，加快产业转型升级的一个突破口。目前，尽管普洱茶速溶茶、浸膏等新型终端产品已经研制成功，并且逐步被消费者接纳，然而到目前为止，市场还鲜见具有特殊功能的普洱茶类保健食品。因此，本文以普洱茶水提取物为主要原料，配以维生素C 和维生素E，通过混料、制粒和压片等工艺研制了具有抗氧化功能的普洱茶抗氧化制剂。当前，食品安全问题尤为关注，保健食品的安全性是其功能开发的前提和基础。为此，按照《保健食品检验与评价技术规范》，通过小鼠精子畸形试验、小鼠骨髓微核试验、Ames 试验和30 d 喂养试验等毒理学试验，对普洱茶抗氧化制剂安全性进行评价。

1 材料与方法

1.1 试验材料

1.1.1 样品及处理

普洱茶抗氧化片供试样品为产品粉末，褐色，内含物的主要功能成分是普洱茶提取物。人体推荐摄入量为 1.6 g/(人·d)， 相当于 0.027 g/(kg·d)(人体质量以60 kg 计)。Ames 试验样品为厂家提供的无菌包装样品。实验时普洱茶抗氧化制剂以蒸馏水为溶媒配制成不同浓度溶液。

1.1.2 实验动物和检测条件

急性毒性试验及遗传性试验采用清洁级ICR小鼠和SD 大鼠，由浙江省实验动物中心提供，实验动物生产许可证号为SCXK(浙)2008-0033。实验饲料由浙江省实验动物中心提供，执行标准GB 14924.1-2001。检测环境条件，温度范围20℃～24℃，相对湿度范围50%～70%。实验动物试验前在动物房环境中适应3 d，染毒前，禁食过夜，不限制喝水。

1.2 急性毒性试验

选健康、成年（3个月）的SD 大鼠20 只（体质量180 g～220 g），雌雄各半。采用最大耐受剂量法，设20.0 g/kg 体重一个剂量组。采用经口灌胃给受试物方式。称取样品50.0 g 加蒸馏水至100 mL 配成0.5 g/mL（可灌胃最大质量浓度），按20 mL/kg 体重二次灌胃给予，间隔4 h。染毒后，观察大鼠的一般状况、中毒症状和死亡情况，观察期限两周。

选健康、成年（3个月）的ICR 小鼠20 只（体质量18 g～22 g），雌雄各半。采用最大耐受剂量法，设20.0 g/kg 体重一个剂量组，采用经口灌胃给受试物方式。称取样品50.0 g 加蒸馏水至100 mL 配成0.5 g/mL（可灌胃最大质量浓度），按20 mL/kg 体重二次灌胃给予，间隔4 h。染毒后，观察大鼠的一般状况、中毒症状和死亡情况，观察期限两周。

1.3 遗传毒性试验

1.3.1 Ames 试验

试验菌株选用的组氨酸营养缺陷型鼠伤寒沙门氏菌 TA97、TA98、TA100、TA102标准菌株和多氯联苯（PCB）诱导的大鼠肝匀浆（简称S9）由上海市疾病预防控制中心毒理科提供。经生物学检定合格后，采用平板渗入法进行试验。用4 株菌株的非代谢活化系统进行预试，结果在剂量为5000 μg/皿剂量时出现毒性作用，而1000 μg/皿剂量时未出现增菌或抑菌现象。称取无菌样品0.2 g 加灭菌蒸馏水至20 mL，即配制成1000 μg/皿。以此为最高剂量，分别做5倍稀释，用灭菌蒸馏水配制成相当于 200 μg/皿、40 μg/皿、8 μg/皿各剂量。同时设空白对照组、溶剂（蒸馏水）对照组和阳性对照组，每种菌株每个测试浓度设3个平行。用S9 作为体外代谢活化系统，在加S9和不加S9条件下进行试验，直接计数培养基上各菌株的回变菌落数。同条件下重复测试一次。

1.3.2 小鼠骨髓细胞微核试验

用ICR 小鼠，体质量25 g～30 g 的小鼠50只，雌雄各半。按每kg 体质量计算给受量样品，设2.5 g/kg、5.0 g/kg 和10.0 g/kg 体重三个剂量组，用蒸馏水配制。另设阴性对照（蒸馏水）和阳性对照组（环磷酰胺60 mg/kg 体重），每组10 只小鼠，雌雄各半。5.0 g、10.0 g 和20.0 g 加蒸馏水至40 mL配成 0.125 g/mL、0.25 g/mL、0.50 g/mL， 按 20 mL/kg 体重灌胃，间隔24 h 给一次样品。对照组处理相同。末次给样品后6 h 处死动物，取其胸骨骨髓制片镜检，甲醇固定，Giemsa 染色，镜检时每只动物计数1000个嗜多染红细胞（PCE)，计算微核千分率。

1.3.3 小鼠精子畸形试验

选ICR 中健康、成年、体质量25 g～30 g 的雄性小鼠35 只。按每kg 体重计算给受量样品，设样品 2.5 g/kg、5.0 g/kg 和 10.0 g/kg 体重三个剂量组，用蒸馏水配制。另设阴性对照（蒸馏水）和阳性对照（丝裂霉素C 2.0 mg/kg 体重）。每组7 只雄性小鼠。三个剂量组分别称取样品5.0 g、10.0 g 和20.0 g 加蒸馏水至40 mL 配成0.125 g/mL、0.25 g/mL、0.50 g/mL，按20 mL/kg 体重灌胃，连续5 d。对照组处理相同。在首次给样品的第35 d，颈椎脱臼处死小鼠，随机选5 只小鼠取二侧附睾，放入盛有适量的生理盐水的平皿中，用眼科剪将附睾剪碎，四层擦镜纸吸滤，制成吸滤液直接涂片，自然干燥，甲醇固定，用1%伊红染色。高倍镜下检查精子形态，每只小鼠检查完整精子1000条，记录畸变精子类型和数目，计算精子畸形率（%）。

1.4 30 d 喂养试验

选健康、成熟、体质量60 g～80 g 的SD 大鼠。设三个剂量组和一个阴性对照组，低、中、高三个剂量组分别为 0.67 g/kg、1.33 g/kg、2.67 g/kg 体重，分别相当于人推荐量的25倍、50倍和100倍（人推荐量为 1.6 g/（人·d）(人体质量以 60 kg 计)。实验各剂量组按体重10%折算分别将样品粉末均匀拌入基础饲料，以饲料喂养方式给予。低、中、高三剂量组拌入方法：分别取134 g、266 g、534 g样品粉末加基础饲料至20 kg，充分拌匀，三剂量组样品粉末分别占饲料的0.67%、1.33%、2.67%。实验将SD 大鼠80 只，随机分成4组，每组20只，雌雄各半，大鼠单笼饲养，自由进食、饮水。大鼠连续观察30 d，每周记录体重和进食量，并计算食物利用率，实验期末尾静脉取血进行血液学检查，断头取血进行血生化检查。对每只大鼠进行脏器大体观察，取肝、肾、脾、睾丸 （卵巢）称重并计算脏体比，同时对肝、肾、脾、睾丸、卵巢进行病理组织学检查 （石蜡切片、H-E 染色，光镜检查）。

1.5 数据统计处理

对实验数据作单因素方差分析 （SAS 统计软件），进行各多组间的比较。

2 试验结果

2.1 急性毒性实验

试验期间，各组大鼠、小鼠饮食和活动正常，生长发育良好，均未见出现中毒症状和死亡情况（表1）。该样品大鼠雌、雄性急性经口最大耐受剂量均大于20.0 g/kg 体重。根据LD50 剂量分级标准，该样品属于无毒级。

表1 普洱茶抗氧化制剂对大鼠、小鼠急性经口毒性试验结果(±S)Table 1 Results of acute toxicity test of the preparation in rats and mice

表1 普洱茶抗氧化制剂对大鼠、小鼠急性经口毒性试验结果(±S)Table 1 Results of acute toxicity test of the preparation in rats and mice

Sex 剂量（g/kg）Dosage 动物数（只）Animal number 始重（g）Beginning weight 终重（g）Last weight 死亡动物数（只）Death number 死亡率（%）Death ratio大鼠 雌性 20.0 10 191.56±6.5274.4 ±9.7 0 0雄性 20.010 198.9±8.2332.3±14.80 0小鼠 雌性 20.0 10 18.7±0.629.6 ±1.4 0 0雄性 20.010 19.2±0.634.3±1.80 0性别

2.2 遗传毒性试验

2.2.1 Ames 试验

试验结果可见，不同剂量样品不论加S9还是不加S9，回变菌落数均未超过空白对照组、溶剂对照组（H2O)回变菌落数的两倍，且各剂量组间无明显的剂量-反应关系（表2）。该样品Ames 试验结果为阴性。

表2 普洱茶抗氧化制剂Ames 试验结果(±S，n=3)Table 2 Ames test results of the antioxidant preparations of Puerh tea

表2 普洱茶抗氧化制剂Ames 试验结果(±S，n=3)Table 2 Ames test results of the antioxidant preparations of Puerh tea

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2.2.2 小鼠骨髓细胞微核试验

各剂量组和对照组小鼠微核率见表3，各剂量组微核率和阴性对照组比较，差异无显著性（P＞0.05），而阳性对照组环磷酰胺组与阴性对照组差异极显著，表现了强烈的致突变性。结果表明，在2.5～10.0 g/kg 范围内，普洱茶抗氧化制剂对两性小鼠骨髓细胞微核产生没有明显的影响。

表3 普洱茶抗氧化制剂对小鼠骨髓细胞微核率的影响(±S）Table 3 Effects of the preparation on marrow micronuclcus test in mice

表3 普洱茶抗氧化制剂对小鼠骨髓细胞微核率的影响(±S）Table 3 Effects of the preparation on marrow micronuclcus test in mice

注：与阴性对照组比较，**P＜0.01。 Note:Comparison with negative control,**P＜0.01.

Groups 剂量（g/kg）Dosage 鼠数（只）Mice number 受检PCE 数（只）Sperm amount 含微核PCE 数(只)Micronucleus PEC number组别微核细胞率（‰）Micronuleus rate P PCE/RBC阴性对照(H2O)0.05 50006 1.2±0.8 / 1.30±0.28雌性2.55 50009 1.8±0.40.1531.23±0.115.05 50008 1.6±1.10.2561.40±0.2910.05 50008 1.6±1.10.2561.30±0.17阳性对照（环磷酰胺）0.065 500092 18.4±3.58** ＜0.0010.99±0.27实验组雄性2.55 50007 1.4±0.90.5501.30±0.295.05 50008 1.6±0.50.4011.32±0.2710.05 50007 1.4±1.30.5501.38±0.36阳性对照（环磷酰胺）0.065 5000101 20.2±6.02** ＜0.0011.14±0.10阴性对照(H2O)0.05 50007 1.4±1.1 / 1.35±0.33实验组

2.2.3 小鼠精子畸形试验

各剂量组和对照小鼠精子畸形率见表4，各剂量组精子畸形率和阴性对照组比较，经秩和检验统计，差异无显著性（P＞0.05）。而阳性对照组丝裂霉素C组与受试物以及阴性对照组差异极显著，表现了强烈的精子致畸性。结果表明，在2.5～10.0 g/kg 范围内，普洱茶抗氧化制剂的小鼠精子畸形试验为阴性。

表4 普洱茶抗氧化制剂对小鼠精子畸形率的影响(±S)Table 4 Effects of the preparation on sperm shape abnormality test in mice

表4 普洱茶抗氧化制剂对小鼠精子畸形率的影响(±S)Table 4 Effects of the preparation on sperm shape abnormality test in mice

注：与阴性对照组比较，**P＜0.01。 Note:Comparison with negative control,**P＜0.01.

组别(g/kg)Groups剂量(g/kg)Dosage鼠数（只）Mice number受检精子数（个）Sperm amount畸形精子数（个）Abnormality number 小计No hook 胖头Fat 香蕉Banana shape无钩 双头/双尾Twin head/twin tail折叠Fold 无定型Amorphous（个）Number畸形率（%）Abnormality rate阴性对照（H2O）0.05 500050 29 00 55116 2.32±0.23实验组2.55 500053 16 00 63123 2.46±0.175.05 500042 73 20 68122 2.44±0.4310.05 500062 27 30 68142 2.84±0.56阳性对照（丝裂霉素C）0.0025 5000134 106 28 112272 5.44±1.14**

2.3 大鼠30 d 喂养试验

不同剂量组普洱茶抗氧化制剂喂食大鼠30 d后，均未见异常症状和体征，也无死亡病例。各剂量组体重（表5），周进食量（表6），食物总利用率和周食物利用率（表7），血红蛋白、红细胞计数、白细胞计数（表8）、淋巴细胞、单核细胞、粒细胞（表9）和阴性对照组比较差异均无显著性（P＞0.05)。 对大鼠血生化指标(表10 和表11）检查结果表明，除雄性大鼠血清甘油三酯原始数据不符合方差齐的要求（P＜0.05），数据经转换仍不符合要求改用秩和检验，各剂量组和阴性对照组比较差异无显著性外（P＞0.05），其余原始数据符合方差齐的要求（P＞0.05)，各剂量组大鼠血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶、尿素氮、肌酐、总胆固醇、甘油三酯、血清血糖、总蛋白、白蛋白、球蛋白、白/球比和阴性对照组比较差异均无显著性 （P＞0.05)。

2.4 病理组织学检查

普洱茶抗氧化制剂喂食大鼠30 d后，各剂量组的脏器中肝、脾、肾、睾丸（卵巢）及脏体比，包括肝/体、脾/体、肾/体、睾丸（卵巢）/体比（表12）和阴性对照组比较，差异均无显著性（P＞0.05)。对大鼠的肝、肾、脾、胃肠、睾丸（卵巢）进行解剖，结果发现，肝：肝脏被膜完整，肝小叶结构清晰，肝板排列不紊乱，胞核形状规则，汇管区小胆管、血管、淋巴管可见，枯否氏细胞无殊；肾：被膜完整，皮质区与髓质区分层清晰，无纤维组织增生，肾小球未见充盈、萎缩、坏死等改变，肾盂黏膜完整，无化生等异常改变；脾：脾组织未见异常，红髓与白髓可见，白髓内可见动脉鞘，红髓内可见散在的淋巴细胞与红细胞，红、白髓比例基本正常；胃和肠（小肠、十二指肠）：粘膜上皮细胞形态未见异常，固有层，粘膜下层，肌层和浆层未见炎细胞浸润，胃腺，肠腺均无萎缩，增生性改变；睾丸：睾丸曲细精管不萎缩，各级生精细胞排列不紊乱，间质未见异常改变；卵巢：可见各级生长卵泡、间质未见异常。检查结果表明，普洱茶抗氧化制剂对大鼠没有明显毒性。

表5 普洱茶抗氧化制剂对大鼠体重的影响(±S）Table 5 Effect of the preparation on body weight

表5 普洱茶抗氧化制剂对大鼠体重的影响(±S）Table 5 Effect of the preparation on body weight

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表6 普洱茶抗氧化制剂对大鼠周进食量的影响(±S）Table 6 Effect of the preparation on week intake

表6 普洱茶抗氧化制剂对大鼠周进食量的影响(±S）Table 6 Effect of the preparation on week intake

性别Sex组别Groups 剂量（g/kg）Dosage 鼠数（只）AmountFirst week 第2周Second week 第3周Third week 第4 周Fourth week周进食量（g）Food intake amount per week第1周阴性对照组 0.0010 118.2±5.5121.2±7.8156.0±10.4229.5±11.1雌 实验组0.6710 121.2±6.6129.1±10.8160.8±11.0219.3±10.81.3310 123.6±5.4128.9±10.9165.6±10.5225.7±15.32.6710 124.7±4.6128.0±8.8164.0±11.2225.9±11.9阴性对照组 0.0010 132.7±6.4153.4±8.0222.7±12.4258.1±13.2雄 实验组0.6710 133.7±7.9150.9±9.9220.0±17.4254.0±16.31.3310 131.0±6.7151.2±8.3219.5±12.9254.6±13.82.6710 132.6±6.6154.2±11.6224.5±13.3258.8±11.3

表7 普洱茶抗氧化制剂对大鼠总食物利用率及周食物利用率的影响(±S）Table 7 Effects of the preparation on overall and week food utilization

表7 普洱茶抗氧化制剂对大鼠总食物利用率及周食物利用率的影响(±S）Table 7 Effects of the preparation on overall and week food utilization

性别S e x组别G r o u p s 剂量（g/k g）D o s a g e鼠数（只）A m o u n t体重增加（g）I n c r e a s e w e i g h t总进食量（g）F o o d i n t a k e a m o u n t总食物利用率（%）F o o d u t i l i z a t i o n r a t i o F i r s t w e e k 第2周S e c o n d w e e k 第3周T h i r d w e e k 第4周F o u r t h w e e k周食物利用率（%）F o o d u t i l i z a t i o n r a t i o p e r w e e k第1周阴性对照组 0.00 10 14 4.4±13.36 24.9±28.12 3.1±1.94 8.7±6.93 0.0±8.71 7.8±3.39.6±2.2雌实验组0.67 10 14 8.0±15.76 30.3±29.32 3.4±1.94 8.3±10.62 9.5±12.61 9.4±5.98.6±1.91.33 10 15 5.3±13.46 43.8±39.32 4.2±2.04 8.2±8.03 1.4±7.11 8.9±4.01 0.6±3.02.67 10 15 4.4±13.86 42.6±34.72 4.0±1.84 8.5±9.83 0.1±12.51 9.4±3.01 0.4±2.5阴性对照组 0.00 10 25 4.9±17.97 66.9±39.93 3.3±1.94 0.1±4.54 0.9±8.43 0.5±3.42 7.6±2.5雄实验组0.67 10 24 8.9±20.77 58.7±47.73 2.8±2.34 1.6±10.73 8.4±7.63 0.3±6.62 6.8±2.61.33 10 24 7.3±20.97 56.3±41.73 2.7±1.73 9.2±6.13 9.9±8.72 9.8±6.22 7.5±3.72.67 10 25 4.5±15.27 70.0±40.93 3.1±1.44 1.6±8.14 1.8±8.63 0.3±4.22 5.7±3.3

表8 普洱茶抗氧化制剂对大鼠HB、RBC、WBC 的影响(±S）Table 8 Effects of the preparation on HB,RBC and WBC in rats

表8 普洱茶抗氧化制剂对大鼠HB、RBC、WBC 的影响(±S）Table 8 Effects of the preparation on HB,RBC and WBC in rats

性别Sex组别Groups 剂量（g/kg）Dosage 鼠数（只）Amount 血红蛋白（g/L)Hemoglobin 红细胞计数（×1012/L）Red blood cell count 白细胞计数（×109/L）White blood cell count阴性对照组 0.0010 158.4±13.28.0±0.718.4±3.9雌 实验组0.6710 164.1±8.08.2±0.315.6±3.71.3310 158.6±10.27.9±0.515.2±3.32.6710 154.41±5.07.7±0.814.7±3.3阴性对照组 0.0010 149.3±11.27.6±0.520.5±3.9 Male雄实验组0.6710 155.4±11.67.6±0.717.9±4.21.3310 147.7±11.77.3±0.615.9±4.12.6710 157.4±13.07.6±0.719.8±3.8

表9 普洱茶抗氧化制剂对大鼠WBC 的影响(±S）Table 9 Effects of the preparation on WBC in rats

表9 普洱茶抗氧化制剂对大鼠WBC 的影响(±S）Table 9 Effects of the preparation on WBC in rats

性别Sex组别Groups 剂量（g/kg）Dosage 鼠数（只）Amount 淋巴细胞（%）Lymphocyte 单核细胞（%）Mononuclear cells 粒细胞（%）Granulocyte阴性对照组 0.0010 68.7±6.81.3±0.230.0±6.8雌 实验组0.6710 72.6±6.01.2±0.226.2±5.91.3310 72.5±5.61.2±0.326.3±5.82.6710 70.5±4.71.1±0.428.4±4.9阴性对照组 0.0010 69.2±6.21.4±0.229.4±6.2雄实验组0.6710 69.21±0.81.3±0.329.5±10.81.3310 70.3±9.81.3±0.328.4±9.62.6710 68.1±5.91.2±0.230.6±5.9

表10 普洱茶抗氧化制剂对大鼠血生化的影响(±S）Table 10 Effects of the preparation on blood components biochemical components in serum of rats

表10 普洱茶抗氧化制剂对大鼠血生化的影响(±S）Table 10 Effects of the preparation on blood components biochemical components in serum of rats

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表11 普洱茶抗氧化制剂对大鼠血生化的影响(±S）Table 11 Effects of the preparation on blood components biochemical components in serum of rats

表11 普洱茶抗氧化制剂对大鼠血生化的影响(±S）Table 11 Effects of the preparation on blood components biochemical components in serum of rats

性别Sex组别Groups 剂量（g/kg）Dosage 鼠数（只）Amount 血糖（mmol/L）Blood glucose 总蛋白（g/L）Total protein 白蛋白（g/L）Albumin 球蛋白（g/L）Globulin 白/球Albumin/globulin阴性对照组 0.0010 7.0±0.866.6±1.934.4±1.232.2±1.11.07±0.05雌 实验组0.6710 7.4±0.867.9±2.135.3±0.832.6±1.51.08±0.041.3310 7.7±0.569.0±2.435.3±0.633.6±2.01.06±0.062.6710 7.8±0.869.0±2.435.2±1.533.81.41.04±0.05阴性对照组 0.0010 7.1±0.866.5±1.733.7±0.732.7±1.31.03±0.04雄 实验组0.6710 6.9±0.765.5±2.033.3±0.932.2±1.41.04±0.041.3310 7.1±0.965.9±2.233.6±0.832.3±1.71.04±0.062.6710 7.4±0.765.7±2.933.0±1.232.7±2.01.01±0.05

表12 普洱茶抗氧化制剂对大鼠脏器重和脏体比的影响(±S）Table 12 Effect of the preparation on organic weight and organic weight/body weight of rats

表12 普洱茶抗氧化制剂对大鼠脏器重和脏体比的影响(±S）Table 12 Effect of the preparation on organic weight and organic weight/body weight of rats

性别Sex组别Groups 剂量(g/kg)Dosage鼠数(只）Amount肝重(g）Liver weight肝/体(%)Liver/boby脾重(g)Sleen weight脾 /体(%)Sleep/boby肾重(g)Kidney weight肾/体Kidney/boby睾丸(卵巢)重(g)Testis(ovary)weight睾丸(卵巢)/体(%)Testis(ovary)/boby阴性对照组 0.0010 7.05±0.663.34±0.510.53±0.070.25±0.051.88±0.200.89±0.110.14±0.020.06±0.01雌 实验组0.6710 7.39±0.553.42±0.120.55±0.090.26±0.041.88±0.230.88±0.070.14±0.030.06±0.011.3310 7.62±0.743.41±0.260.54±0.080.24±0.031.93±0.170.86±0.060.14±0.030.06±0.012.6710 7.71±0.383.47±0.320.61±0.160.27±0.051.99±0.190.89±0.060.13±0.020.06±0.01阴性对照组 0.0010 10.71±1.533.29±0.400.82±0.100.25±0.032.80±0.300.86±0.113.09±0.210.95±0.08雄 实验组0.6710 10.40±0.813.25±0.220.86±0.130.27±0.032.68±0.180.84±0.053.09±0.200.97±0.071.3310 10.35±0.903.23±0.310.86±0.170.27±0.062.73±0.290.85±0.073.02±0.200.95±0.062.6710 10.53±1.023.23±0.230.74±0.060.23±0.022.87±0.250.88±0.083.12±0.230.96±0.07

3 讨论

普洱茶抗氧化制剂是以普洱茶为主要原料研发的具有抗氧化功能的保健食品，其主要原料为普洱茶提取物（水提取）、维生素C 和维生素E。普洱茶不同于其他茶类，在经过渥堆等工艺加工后，其多酚类物质发生了质的变化，儿茶素类通过聚/缩合反应，形了二聚体、三聚体和多聚体多酚类物质，比如茶黄素、茶红素、茶褐素等，并且部分与多糖和蛋白通过络合作用形成共轭产物，不仅提高了抗氧化性，同时也增加了稳定性。同时已有较多研究证明，茶多酚与维生素C/E 之间存在协同作用，能协同抑制脂质过氧化，减弱过多自由基对DNA 的损伤[5-7]。普洱茶是人们日常饮品，原料来源安全，水提是一种最为安全的提取方法，同于浓缩了日常饮茶的剂量，促使其抗氧化功效更好地发挥。然而，普洱茶抗氧化制剂作为功能食品其安全性必须经过严格的实验来论证。

通过第一、二阶段急性毒性试验、遗传毒性试验和30 d 喂养试验对普洱茶抗氧化制剂进行了毒理学评价。大、小鼠急性毒性试验可以确定实验动物对受试物的毒性反应、中毒剂量（致死剂量），只有当动物未出现死亡的剂量大于或等于10.0 g/kg（涵盖人体推荐剂量的100倍）时才可进行下阶段毒理学试验[5]，本次试验普洱茶抗氧化制剂对雌雄大小鼠经口LD50均大于20.0 g/kg，表明普洱茶抗氧化制剂安全性很高，可以进入下一阶段的毒理学试验[8,9]。第二阶段进行了遗传毒性试验和30 d 喂养试验，遗传毒性试验选用了反映基因突变的Ames 试验、反映染色体损害的小鼠骨髓细胞微核试验，反映生殖细胞突变的小鼠精子畸形试验，以期从多方面探讨普洱茶抗氧化制剂的致突变性[10]。试验结果表明，Ames 试验、小鼠骨髓细胞微核试验、小鼠精子畸形试验的结果均为阴性，表明普洱茶抗氧化制剂在此试验条件下对实验动物未见明显遗传毒性。30 d 喂养试验室通过喂饲不同剂量的受试物30 d，观察其对动物引起有害效应剂量、毒作用性质和靶器官，估计亚慢性摄入的危害性，并可初步估计其最大无毒作用剂量[11]。在30 d 喂养中普洱茶抗氧化制剂对雌雄大鼠体重、总食物利用率、脏体比、血常规以及血液生化指标均无明显影响，肝、肾、脾、胃、十二指肠、睾丸和卵巢均未见病理组织学改变。从毒理学的角度看，作为保健食品，普洱茶抗氧化制剂对动物和人是安全的。

综上所述，普洱茶抗氧化制剂在本实验研究剂量范围内，无毒、无遗传毒性、长期食用对人体不产生有害作用，可作为保健食品进行下一步的保健功效研究。

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