Survivin、VEGF 基因在非小细胞肺癌中的表达

詹勤元，何陆英，刘清霞，蔡 云

（江西省肿瘤医院内二科，南昌 330029）

肺癌是我国发病率最高的恶性肿瘤，占恶性肿瘤死亡的第一位，其中70%～80%为非小细胞肺癌。Survivin 是新近发现的功能最强的凋亡抑制蛋白，它在正常分化组织中几乎不表达，而在人类各种肿瘤组织中均特异性表达；VEGF 是作用于血管内皮细胞，促进血管生成，特异性最高、功能最强的调控因子。Survivin 不仅抑制细胞的凋亡，而且参与血管的生成，肿瘤血管形成是肿瘤生长、转移的基础。本研究通过检测Survivin、VEGF 基因在非小细胞肺癌中的表达情况，探讨Survivin、VEGF 基因阳性表达与肺癌临床病理特征的关系，以及二者在肺癌组织中表达的相关性，为今后肺癌的诊断、治疗及预后判断提供依据。

1 材料与方法

1.1 病例资料

选择2009 年6 月至2010 年6 月江西省肿瘤医院收治的非小细胞肺癌患者40 例，男20 例，女20 例，年龄20～75 岁，平均58 岁；其中鳞癌15 例，腺癌15 例，其他类型（如大细胞癌）10 例；TNM 分期：I 期16 例，Ⅱ期14 例，Ⅲ期10 例。所有患者术前均未行放化疗。40 例患者经随访，目前均存活；I期16 例患者一般情况良好，未出现转移或复发，Ⅱ期14 例中有10 例、Ⅲ期10 例中有8 例出现不同程度的转移或复发，经化疗和（或）放疗后病情均得到控制。

1.2 标本采集与分组

40 例患者均在本院胸外科行手术治疗，将手术切除的肺癌组织标本作为研究组，手术切除的癌旁正常肺组织标本作为对照组。

1.3 免疫组织化学检测

鼠抗人Survivin、VEGF 基因检测试剂盒购自北京中杉金桥生物有限公司，检测过程中严格按照试剂盒中工作液所要求的标准来进行。采用SP 法染色:标本石蜡包埋，做5 μm 厚切片，常规脱蜡、水化，行抗原修复，血清封闭；一抗4 ℃孵育过夜，二抗室温孵育20 min，链霉卵白素-过氧化酶室温孵育30 min，DAB 显色5～10 min，苏木精复染后脱水、透明、封片，光镜下观察。同时用已知的阳性切片在同条件下染色作为阳性对照，用PBS 代替一抗作为空白对照。

1.4 结果判定标准

阳性表达为胞浆或胞核出现棕黄色，根据细胞着色深浅判定表达强度。Survivin 基因表达强度：细胞不着色为阴性（-），淡黄色为弱阳性（+），棕黄色为阳性（⧺），深棕黄色为强阳性（⧻）。VECF 基因表达强度按文献［1］标准分为4 级：0 级为阴性，1 级为弱阳性，2 级为阳性，3 级为强阳性。

1.5 统计学方法

使用SPSS13.0 统计软件。计数资料比较及均Survivin、VEGF 基因在肺癌组织中表达的相关性采用卡方检验。以P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

研究组Survivin 基因表达阳性率为72.5%（29/40），VEGF 基因表达阳性率为70.0%（28/40）；对照组Survivin 和VEGF 基因均无阳性表达，2 组Survivin、VEGF 基因阳性表达率比较差异均有统计学意义（P＜0.01）。研究组Survivin 基因的表达主要位于癌细胞的细胞浆和（或）细胞核，阳性细胞内见棕褐色；VEGF 基因的表达主要位于细胞浆，极少位于细胞核。研究组Survivin、VEGF 基因阳性表达与肺癌临床病理特征的关系比较见表1。在肺癌组织中Survivin、VEGF 基因表达呈正相关（χ2=8.5，P＜0.01），见表2。

表1 研究组survivin、VEGF 基因阳性表达与肺癌临床病理特征的关系

表3 在肺癌组织中Survivin、VEGF 基因表达的相关性分析 例

3 讨论

Survivin 基因蛋白是作用最强的凋亡抑制因子，可发挥多种生物学功能，如通过抑制凋亡，促进细胞增殖和转化，参与肿瘤的耐药机制等；该基因表达于胚胎和发育的胎儿组织，在终末分化的成人组织中不表达（胸腺除外），但在人类大多数的肿瘤组织和转化细胞中却有大量表达。Survivin 基因通过抑制凋亡通路下游的caspase3 和7 的活性发挥抗凋亡作用，并作用于细胞周期的G2/M 期，与纺锤体的微管蛋白特异性结合维护有丝分裂的正常进行及细胞的分裂增殖、生长分化有关。VEGF 是目前已知的作用最强，特异性最高的促血管生长因子，它可发挥多种生物学功能，如促进血管内皮细胞增殖、增加血管通透性、促进血管支持物的生成、抑制肿瘤细胞凋亡等；在肿瘤的生长和转移过程中有重要作用，在很多实体肿瘤中VEGF 具有重要的预后价值，其表达多位于肿瘤周边及肿瘤向周围浸润区域。VEGF 以旁分泌和自分泌的方式作用于血管内皮细胞，与血管内皮细胞上的受体结合，引发一系列信号转导，刺激内皮细胞分化和血管生成。

国内外学者对Survivin、VEGF 基因在肿瘤组织中的表达进行了大量研究，研究［2-8］表明，Survivin、VEGF 基因在多种肿瘤中均有表达，提示它的表达与肿瘤的发生、发展、预后均有密切关系。董德琼等［2］的研究表明，Survivin 基因表达预示着肿瘤有较高的侵袭性和不良预后；陶琳等［3-4］的报道显示，在非小细胞肺癌中Survivin 阳性表达率越高，细胞分化程度越低，抑制细胞凋亡的作用越强，肿瘤细胞的浸 润性越强，预后越差；Belyanskaya 等［5］的研究表明，Survivin 基因参与肿瘤细胞的耐药机制，它与肿瘤预后紧密相关；王玲等［6］报道显示，VEGF 基因在非小细胞肺癌中的阳性率与患者的年龄、性别、病理组织学无关，而与TNM 分期有关，分期越晚其阳性率越高，此外VEGF 基因还可促进非小细胞肺癌中Survivin 的表达；王萌等［7］研究表明，Survivin、VEGF基因的表达与NSCLC 的临床病理学特征密切相关，二者联合检测有助于肺癌的诊断及恶性程度与预后的评估；吕喜英等［8］研究表明，Survivin、VEGF 基因在NSCLC 组织中的表达呈正相关，二者联合检测对患者化疗疗效、预后的判断具有重要意义。

本研究结果显示：Survivin、VEGF 基因在肺癌组织中的阳性表达率均显著高于其在癌旁正常组织中的表达（P＜0.01），二者在肺癌组织中的表达呈显著正相关（χ2=8.5，P＜0.01）；Survivin、VEGF 基因表达与非小细胞肺癌的病理类型、年龄、性别均无明显关系，而与细胞分化程度、TNM 分期有一定关联，患者TNM 分期越晚、细胞分化程度越低，Survivin、VEGF 基因表达越高，与Sarela 等［9］报道相符。

综上所述，Survivin 和VEGF 基因可作为一种肿瘤的特异生成、抑制异性生物学标记物，，二者的联合检测可为肺癌的诊断和靶向治疗、预后的判断等提供新的依据。

［1］Vlom M，Koomagi R，Mattrenj J.Progpostic value of vascular endothelial growth factor and its receptor Flt-1 in squamous cell lung cancer［J］.Int J Cancer，1997，74（1）:64-68.

［2］董德琼，薛东鹰，杨渝浩.Survivin 蛋白在肺腺癌中表达及临床意义［J］.国际呼吸杂志，2006，26（2）：92-94.

［3］陶琳，姚峰，李华，等.Survivin 基因表达与非小细胞肺癌发生发展的关系［J］.中国肺癌杂志，2003，6（4）：275-277.

［4］王玲，李侠，薛玉文，等.非小细胞肺癌Survivin、VEGF基因表达及相互关系的探讨［J］.中国肿瘤临床，2004，31（22）：1302-1304.

［5］Belyanskaya L L，Hopkins Donaldson S，Kurtz S，et al.Cisplatin activates AKt in small cell lung cancer cells and attenuates apoptosis by surviving upregulation［J］.Int J Cancer，2005，117（5）:755-763.

［6］王玲，李霞，李玉，等.Survivin、VEGF 基因的表达及微血管密度与非小细胞临床病理特征的关系［J］.癌症，2005，24（7）：823-826.

［7］王萌，陈公琰，蔺铁，等.Survivin、VEGF 在非小细胞肺癌中表达及相关性研究［J］.肿瘤防治研究，2006，33（1）：1302-1304.

［8］吕喜英，李青山，张秀琴，等.Survivin 在非小细胞肺癌中表达及其与血管内皮生长因子相关性研究［J］.肿瘤研究与临床，2007，19（8）：302-304.

［9］Sarela A I，Macadam R C，Fannery S M，et al.Expression of the antniapoptosis gene，survivin，predicts death from recurrent colorectal carcinoma［J］.Gut，2000，46（5）:645-650.