液体饲料防霉剂对饲料防霉效果的研究

文│王姣姣 赫彩霞 高文惠（河北科技大学生物科学与工程学院）

我国是一个饲料生产消耗大国，然而在饲料的生产、加工、运输及贮存过程中，饲料霉变的现象屡见不鲜，霉菌毒素对饲料不同程度的污染，造成了巨大的经济损失，已成为饲料业和畜牧业生产中不可忽视的问题。随着饲料工业的快速发展，饲料防霉剂的应用日益广泛，对饲料行业的贡献越来越大，品种也日益增多，因此对饲料防霉剂防霉效果的检验成为关键。

饲料防霉剂防霉效果的检测方法有杯碟法、最低抑菌浓度（MIC）法、饲料强化防霉（破坏性试验）、饲料常规试验、二氧化碳稀释法、温度测定法、平皿记数法等。本试验将某公司生产的防霉剂添加到饲料中使用，通过破坏性实验法和平皿计数法研究其对饲料的防霉效果。

一、材料与方法

培养基。硝酸钠2克、磷酸二氢钾1克、硫酸镁0.5克、氯化钾0.5克、硫酸亚铁0.01克、氯化钠60克、蔗糖30克、琼脂20克、蒸馏水1000毫升。上述试剂中琼脂为生化试剂，其余为分析纯试剂。

（1）破坏性试验。提高饲料含水量为12%、14%、16%，并将恒温培养箱中的湿度调节为85%，温度28℃的条件下储存饲料。

（2）平皿计数法。将加入不同比例（0、0.3‰、0.5‰、0.7‰）防霉剂的饲料在一定条件下储存，每隔7天进行取样，用稀释液稀释、振荡后将上层液吸取1毫升，与培养基混匀，培养后进行计数。

（3）试验分组与编号。在饲料中添加不同量的防霉剂，同时按照试验要求调节饲料中的水分含量，并对样品进行编号，具体方案见表1。

表1 样品编号

二、操作步骤

1.培养基与稀释液的配制。用蒸馏水加温溶解培养基成分，分装后121℃高压灭菌30分钟。必要时，可酌量增加琼脂。称取分析纯氯化钠8.5克，用蒸馏水溶解，定容1000毫升，制成稀释液。按需要量分装在试管和三角瓶中，121℃高压灭菌30分钟。其他玻璃器具和枪头在同样条件下灭菌备用。

2.感官检测。观察饲料的色泽，闻饲料的香气，并挑起少量饲料观察形态。

3.取样检测。

（1）将饲料编号后在实验条件下储存，每隔7天进行取样。以无菌操作称取有霉菌的饲料25克，放入含有225毫升灭菌生理盐水的250毫升三角瓶中，振荡30分钟，即为1∶10稀释液。

（2）用移液枪取上述稀释液1毫升，注入盛有9毫升稀释液的试管中，充分振荡，使霉菌孢子分散开，完成100倍稀释。用相同的方法完成1000倍稀释。

（3）将以上稀释液用移液枪各取1毫升注入平皿中，倒入适量45℃以下的培养基，充分混匀，待其凝固后，倒置放入恒温培养箱中进行培养，3天后开始观察，培养观察一周。

4.水分含量的测定。称取2.000克的饲料放入称量瓶，在103±2℃的干燥箱中烘干3小时，取出在干燥器中冷却至室温后称量，再放入干燥箱中干燥30分钟，取出后冷却称量，两次称量值相差小于0.002克视为恒重，计算水分含量。

5.数据分析和显著性检验。记录实验过程中的数据，用OriginPro8软件根据数据作图，观察储存期内霉菌数的变化以及饲料水分含量的变化趋势和规律。将实验结果用SPSS Statistics软件进行差异显著性检验。

三、结果与分析

1.感官检验。记录感官检验的结果如下。

（1）储存7天后取出，1～12号样品在色泽、气味和组织方面无明显变化。

（2）储存14天后取出，1～2号及4～12号样品色泽变浅，气味减弱，组织方面无明显变化，3号样品色泽明显变暗，少量结块。

（3）储存21天后，1～2号少量结块，3号长出肉眼可见的少量霉菌，6～7号、9号以及12号微量结块。其他样品组织方面无明显变化，色泽变暗，气味减弱，无异味。

（4）储存28天后，1～2号、5～6号结块，3、6、9、12号大量结块且3号长出大量霉菌，4号、7号、8号、10号无明显变化。

（5）储存35天后，1～9号变质且3号、6号长出大量霉菌，11-12号结块。10号轻微结块。

表2 各组样品平均霉菌数

由以上结果可知，在高温高湿的储存环境中，饲料的色泽首先会发生变化，其次气味减弱，随着时间的推移会少量结块，此时，饲料已经变质，商品及食用价值消失。继续储存，饲料表面会长出肉眼可见的霉菌，发生腐败。

2.霉菌检测数。储存之前用平皿计数法测量饲料原样品的霉菌数，之后每隔7天测量一次，随着天数的增加，饲料中霉菌数逐渐增加。根据检测结果可作图，对水分含量相同，防霉剂添加量不同，以及防霉剂添加量相同，水分含量不同的饲料进行直观的比较可以看出，加入防霉剂0～7天之间，霉菌数有所下降。由此可见，此种防霉剂具有一定的杀菌作用；3号和6号样品在14到21天中霉菌数增长速度加快，其他样品在21到35天时霉菌数增长速度也明显加快，因此，在储存期的后期，防霉剂的防霉作用不明显；3号和6号样品水分含量相同，防霉剂添加量不同，但最终霉菌数相似，因此，当饲料的水分含量在16%时，防霉剂作用不明显，此时应提高防霉剂的添加量，以达到防霉效果。

◎图1 饲料储存试验霉菌检测数

3.水分含量。试验中测量霉菌数的同时，对饲料的水分含量也进行了测量，并记录结果。根据水分含量的测定结果可以作图对不同的样品作出直观的分析。由图2可知，饲料储存过程中，水分含量一般先上升再下降然后第二次上升。综合感官检验结果，在水分含量第二次上升时一般会饲料发生霉变；加入防霉剂的饲料水分含量下降较慢，可见，此种防霉剂具有一定的保水作用。

◎图2 饲料储存过程中水分含量的变化

4.防霉效果差异显著性检验。根据试验过程中记录的数据，计算出未添加饲料防霉剂但水分含量不同的各组样品在储存期内的平均霉菌数，见表2，以此作为差异显著性检验中与其水分含量相同，但添加了不同量防霉剂样品的检验值。

将上表中的平均霉菌数作为与之相对应的样品T检验的检验值，得出各样品之间差异显著性结果，见表3。

从上表可以看出，在和1号样品比较的过程中，只有10号样品得出的sig值小于0.05，具有显著性差异；在和2号样品的比较过程中，5号、8号、11号样品的sig值均小于0.05，具有显著性差异；在和3号样品比较的过程中，只有12号样品的sig值小于0.05，具有显著性差异。由此可知，在饲料水分含量为12%和16%时，防霉剂的少量添加所起到的防霉作用不明显，只有在加大添加量时才会有显著地防霉作用；在饲料水分含量为14%时，即使少量添加防霉剂，防霉效果依然明显。因此，饲料本身的水分含量对防霉剂的防霉效果有影响。

四、讨论与结论

1.试验方法的选择。破坏性试验旨在提高饲料水分含量，恶化环境（高温、高湿）从而促使饲料尽快发霉。平皿记数法根据霉菌生理特性和防霉剂防霉机理，选择适宜霉菌生长而不适宜细菌生长的培养基，采用平皿记数法，在一定菌液中加入一定量的防霉剂，培养后测定霉菌菌落总数、菌落总数越少，表明其防霉抑菌效果越佳。

本试验综合以上两种试验方法，将培养箱的温度调为霉菌的最适生长温度，即25～28℃，将湿度调为85%，在尽量缩短试验时间的基础上保证了试验结果的准确性。

2.结论。饲料本身的水分含量对防霉剂的防霉效果有一定的影响，当水分含量较高时，防霉剂的防霉效果不明显。试验结果表明，此种防霉剂具有一定的杀菌作用，同时具有一定的保水作用。综合感官检验结果，在水分含量第二次上升时饲料发生霉变，根据这个规律可以通过测量饲料的水分含量来预测饲料发霉变质的时间和阶段。

表3 差异显著性检验